江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的:江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及部分生物化学和药理性质的研究.方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S 100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质.结果:分离得到相对分子质量为59 100,等电点为4.98, SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶.该组分属于金属蛋白酶类.氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸.高浓度的纤溶酶对肿瘤细胞CEN2有抑制作用,有微弱的出血毒性.结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶.     

尖吻蝮蛇蛇毒抗凝、纤溶组分的分离及对凝血系统的影响

目的:研究同一尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化的类凝血酶和纤溶酶对凝血系统的影响。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B和Sephadex G-75层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化获得类凝血酶和纤溶酶,通过体内实验,观察两者对凝血系统指标的影响。结果:从尖吻蝮蛇蛇毒中分别分离获得单一组分的类凝血酶和纤溶酶,它们的相对分子质量分别为39300和26600,体内实验证明,尖吻蝮蛇毒类凝血酶和纤溶酶都能明显延长全血凝固时间、活化的部分凝血酶原时间、凝血酶时间和凝血酶原时间,降低纤维蛋白原含量,但类凝血酶的作用更强,而纤溶酶在较大剂量时才显现抗凝作用,两者合用优于各自单用。结论:尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶和纤溶酶对动物体内的凝血系统有影响,两者合用具有明显的抗凝作用。     

胎盘免疫调节因子对CIK细胞活性的影响

目的探讨胎盘免疫调节因子(placentalfactor,PF)对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)的增殖及CIK细胞杀伤活性的影响。方法抽取健康人新鲜血液,诱导CIK细胞产生后,设加入不同浓度的PF-CIK组和不加PF的空白CIK组,观察CIK细胞的增殖率和细胞毒活性的变化。结果与不加PF的空白CIK细胞相比较,加不同浓度的PF组CIK细胞的增殖率和杀伤率均有统计学差异(P<0.01)。结论PF可上调节CIK细胞的生长及杀伤活性,为CIK细胞的过继性免疫治疗提供了一种新的方法。     

氯化两面针碱对斑马鱼胚胎心脏影响的初步研究

目的观察不同浓度的氯化两面针碱对斑马鱼心脏的影响。方法用发育正常的受精后48 h（48 hpf）的斑马鱼胚胎作为实验模型,用浓度为5.00 mg/L、3.15 mg/L、2.00 mg/L、1.58 mg/L、1.12 mg/L的氯化两面针碱处理上述胚胎,分别于受精后60 h和72 h时观察胚胎心脏的形态及心率的变化。结果各给药组在受精后60 h和72 h时均出现胚胎心脏中毒现象。5.00 mg/L、3.15 mg/L实验组中,胚胎主要表现为心脏跳动停止、心脏区域出血,2.00 mg/L、1.58 mg/L、1.12 mg/L实验组的胚胎则主要表现为心脏发育畸形。心率随着浓度的升高而明显下降,随着暴露时间的延长,心率下降不明显。结论氯化两面针碱对斑马鱼胚胎有心脏毒性。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的生化和药理性质特征

背景：蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白（原）的酶，称为纤维蛋白（原）溶酶（纤溶酶），可做为溶解在心肌梗死．中风等期间形成的血栓的抗栓药物。目的：分离纯化江浙蝮蛇毒纤溶酶，并分析其部分生物化学和药理性质。设计：对照观察实验。单位：广西医科大学蛇毒研究所。材料：实验于2003—07／2005-06在广西医科大学蛇毒研究所完成。昆明种小鼠，体质量18&;#177;25g，平均（20&;#177;2）g，鼠龄三四个月，由广西医科大学实验动物中心提供。蛇毒冻干粉由广西医科大学蛇毒研究所提供：方法：应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S100柱分离纯化纤溶酶，以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量，应用等电聚焦电泳测定等电点，然后测定氩基酸组分及部分药理性质。主要观察指标：纤溶酶相对分子质量、等电点和氨基酸组成．抑制剂对纤溶酶的作用，出血活性实验，纤溶酶对家兔体内抗凝活性的作用。结果：纳入30只鼠和12只免全部进入结果分析．分离得到相对分子质量为59100，等电点为4．98，SDS—PAGE为一条带，高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶。该组分属于金属蛋白酶类。氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氩基酸．有微弱的出血毒性。具有较强且持久的溶栓效果。结论：分离纯化得到了一种有微弱出血毒，具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶.     

SELDI-TOF-MS检测胎盘免疫调节因子对CIK细胞蛋白谱的影响

目的 用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测胎盘免疫调节因子(placental factor,PF)作用后的人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK细胞)的蛋白组变化.方法 将健康人新鲜血液诱导成为CIK细胞后,设PF-CIK组和不加PF的空白对照CIK组,继续培养72h,观察CIK细胞的增殖率和细胞毒活性的变化,并用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELD-ITOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得CIK细胞蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,寻找差异蛋白.结果 与空白对照CIK细胞组相比较, PF-CIK组细胞的增殖率和杀伤率均有统计学意义(P＜0.01).空白对照CIK组和PF-CIK组有6个峰差异有统计学意义(P＜0.05),其中以4个蛋白质生物标志物(M/Z分别为5636.077、6860.359、6072.814和5984.191)差异最大.结论 PF可上调CIK细胞的生长及杀伤活性,并从蛋白组学上分析可发现两组之间存在显著差异的蛋白峰.同时,SELDI-TOF-MS在CIK细胞特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值.     

氯化两面针碱和羟基喜树碱对斑马鱼胚胎发育的影响

目的:研究氯化两面针碱和羟基喜树碱对斑马鱼发育的影响。方法:氯化两面针碱(NC)分成5.00,3.15,2.00,1.58,1.12 mg.L-1等5个含药剂量组,各组的DMSO终浓度为0.01%,并设含0.01%DMSO的孵化液组及对照组(纯孵化液组)。羟基喜树碱(HCPT)分为16.00,10.00,6.50,4.00,2.50 mg.L-1 5个含药剂量组,各组的DMSO终浓度为0.01%。并设对照组(纯孵化液组)及含0.01%DMSO的孵化液组。在显微镜下将正常发育6 h(6 hpf)和48 h(48 hpf)的斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,每个实验组20颗胚胎。观察药物处理至72 hpf时,胚胎的死亡和畸形情况。结果:氯化两面针碱的6 hpf实验组中,半数致死浓度(LC50)为1.66 mg.L-1,半数致畸效应浓度(EC50)为1.33 mg.L-1;48 hpf实验组中,LC50为2.51 mg.L-1,EC50为2.02 mg.L-1。羟基喜树碱的6 hpf实验组中,LC50为4.21 mg.L-1,EC50为3.29 mg.L-1;48 hpf实验组中,LC50为7.70 mg.L-1,EC50为6.18 mg.L-1。斑马鱼胚胎的死亡率和畸形率随着氯化两面针碱和羟基喜树碱药物浓度的降低和给药时间的推迟而显著降低(P<0.01)。结论:6 hpf胚胎对氯化两面针碱和羟基喜树碱的药物敏感性均大于48 hpf;氯化两面针碱对斑马鱼胚胎的发育毒性大于羟基喜树碱。     

重庆市沙坪坝区成人慢性非传染性疾病及其危险因素监测结果分析

目的 了解重庆市沙坪坝区成人慢性非传染性疾病(慢性病)及吸烟、饮酒等危险因素的分布情况,分析相关危险因素对高血压、糖尿病的影响。 方法 采用分层多阶段抽样法调查沙坪坝区成年居民1200人。利用2013年重庆市慢性病及危险因素监测调查问卷进行问卷调查、体格检查和实验室检查,并进行高血压、糖尿病相关因素的2检验和多因素logistic回归分析。 结果 沙坪坝区成年居民吸烟率27.9%,饮酒率47.2％,超重率33.6%,肥胖率13.9%。男性吸烟、饮酒、超重率均高于女性(2=396.830、249.130、4.240,P0.05)。高血压患病率23.3%,糖尿病患病率8.8%,血脂异常率21.0%。男性高血压患病率高于女性(2=6.195,P0.05),随年龄增加有升高趋势(2=0.890,P0.05),并在不同文化程度、婚姻状况、职业、吸烟状况、饮酒状况、体质指数中分布不同(均P0.05)。糖尿病患病率随年龄增加有升高趋势(2=0.257,P0.05),并在不同文化程度、婚姻状况、职业、饮酒状况、体质指数中分布不同(均P0.05)。多因素logistic回归分析显示:女性(OR=0.475)、文化程度增加(OR=0.835)是高血压的保护性因素,年龄(OR=1.505)、离退休(OR=1.128)、高血压家族史(OR=1.670)、体质指数增加(OR=2.496)、每周饮酒5次(OR=2.387)是高血压的危险因素。每日运动量达6000步以上 (OR=0.634)是糖尿病的保护因素,年龄(OR=1.540)、体质指数增加(OR=1.813)、高血压(OR=1.846)是糖尿病的危险因素。 结论 沙坪坝区成年居民高血压、糖尿病患病率较高,其发病与多种因素有关,应加强高血压、糖尿病的综合防治。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的生化和药理性质特征

背景:蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白(原)的酶,称为纤维蛋白(原)溶酶(纤溶酶),可做为溶解在心肌梗死、中风等期间形成的血栓的抗栓药物。目的:分离纯化江浙蝮蛇毒纤溶酶,并分析其部分生物化学和药理性质。设计:对照观察实验。单位:广西医科大学蛇毒研究所。材料:实验于2003-07/2005-06在广西医科大学蛇毒研究所完成。昆明种小鼠,体质量18～25g,平均(20±2)g,鼠龄三四个月,由广西医科大学实验动物中心提供。蛇毒冻干粉由广西医科大学蛇毒研究所提供。方法:应用DEAESepharoseCL-6B阴离子交换柱和HiPrepSephacrylS100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质。主要观察指标:纤溶酶相对分子质量、等电点和氨基酸组成,抑制剂对纤溶酶的作用,出血活性实验,纤溶酶对家兔体内抗凝活性的作用。结果:纳入30只鼠和12只兔全部进入结果分析。分离得到相对分子质量为59100,等电点为4.98,SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶。该组分属于金属蛋白酶类。氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸。有微弱的出血毒性。具有较强且持久的溶栓效果。结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶。