浅析防范和应对国门生物安全风险的经验和做法

按照生物安全立法相关要求,以广州海关口岸新冠肺炎疫情防控为例,论述了口岸流调、样本采集、实验室检测、病例处置、卫生处理等工作流程中海关逐渐形成的一套安全、准确、高效的疫情防控工作流程,介绍了口岸生物安全风险防控工作经验.     

一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒

目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法.方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA,以优化的TaqMan RT-PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性.结果 LNA探针TaqMan RT-PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(10 0～10-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%).结论 新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT-PCR反应,简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT-PCR可满足登革病毒快速检测的需要.     

委内瑞拉马脑炎的研究进展

委内瑞拉马脑炎（Venezuelan equine encephalitis，VEE）是由委内瑞拉马脑炎病毒复合物（VEEV复合物）引起的自然疫源性疾病，历史上引起了多次暴发流行。VEEV还是一种潜在的、可以用于战争和恐怖活动的生物武器。本文就VEE的病原学、流行病学、临床表现、实验室检测、治疗和预防等方面予以综述。     

全国首例输入性基孔肯雅病的实验室诊断

目的:通过系统的实验室检测发现并确认全国首例输人性基孔肯雅病例.方法:利用实时荧光RT-PCR、RT-PCR检测方法,并对RT-PCR扩增产物进行核苷酸序列测定.结果:实时荧光RT-PCR、RT-PCR两种实验方法,在同一病例不同时间采集的多份标本中,都检测到基孑L肯雅病毒核酸;对RT-PCR扩增产物进行测序,测出的521个碱基与基孔肯雅病毒核酸序列比对,结果同源性高达99%.结论:该病例为全国首例输入性基孔肯雅病实验室确诊病例.     

广东国境口岸中央空调水嗜肺军团菌检测及结果分析

目的:为了解广东地区国境口岸中央空调冷凝水中军团菌的阳性率,分析军团菌对出入境旅客健康的潜在危害并为北京奥运会期间国境口岸军团菌防控提供理论依据。方法:通过对2007年度和2008年度广东地区6个国境口岸中央空调冷凝水的采集、处理,利用分离培养、乳胶凝集试验、血清学分型等方法对样本进行军团菌的检测及血清学分型,检验依据为ISO11731:1998。对检测结果进行分析。结果:2007年度从63份样本中检出军团菌7例,检测阳性率为11.1%,其中嗜肺军团菌4例;2008年度从46份样本中检出军团菌3例,检测阳性率为6.5%,全部为嗜肺军团菌。结论:本次军团菌检出率略低于有关文献报道的全国平均检出率,阳性样本中嗜肺军团菌L1型占比率较大(30%);本研究结果有利于分析国境口岸空调通风系统的卫生状况,为口岸卫生控制提供技术指导,有利于北京奥运会和谐、顺利举办。     

新疆出血热的研究进展

克里米亚-刚果出血热（Crimean Congo hemorrhagic fever,CCHF）于1944年发现于俄国的克果米亚,它是由克里米亚-刚果出血热病毒（Crimean Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV）引起的,是一种流行于中国新疆南部、俄国北部、中东、南部欧亚大陆及非洲撒哈拉地区的烈性传染性疾病,其平均病死率在10％～50％之间。     

广东省潮汕地区人群从工夫茶中摄入氟的研究

本文用氟离子选择电极法测定广东省潮汕地区常饮的工夫茶中氟含量,茶叶中氟的最高含量为158.41mg/kg,最低为24.75mg/kg,茶叶中氟的浸出率平均为50.95％。人均经茶摄入氟的量约为0.63mg。在潮汕地区饮茶是一种重要的氟摄入途径,可以作为防龋的辅助手段。过量饮用含氟高的茶,再加上其它食品因素可能使氟的摄入量超过WHO推荐的每日总氟摄入量的标准,导致慢性氟中毒。     

疟疾的实时荧光PCR快速检测方法

目的:建立疟疾的实时荧光PCR检测方法并用于疟疾的快速检测。方法:设计了疟原虫通用型实时荧光PCR检测的引物和探针,建立了疟疾的实时荧光PCR检测方法。对40份疟疾镜检阳性样本和20份镜检阴性样本进行实时荧光PCR检测,并和巢式PCR方法检测结果进行了比较。结果:疟疾实时荧光PCR检测速度快,20分钟即可完成。40份镜检阳性样本的荧光PCR检测均为阳性,2份样本的巢式PCR结果为阴性;20份镜检阴性样本中有3份样本为实时荧光PCR阳性,其余17份样本为实时荧光PCR阴性,与疟疾巢式PCR检测结果相同。结论:该实时荧光PCR方法检测速度快,特异性强,准确性高,阳性率高,不易漏检,适用于疟疾的快速检验,这对防止该病在国境口岸的传入提供了技术依据。     

一株输入性鼻疽伯克霍尔德氏菌的分离和鉴定

〔目的〕通过对入境可再生废物原料(废纸、废钢铁、废塑料等)中病原微生物的检测及结果分析,评估各种废物原料对人体和环境的潜在危害。〔方法〕采集进口废纸样本,利用分离培养、生化鉴定、PCR等方法对入境废纸样本中的病原微生物进行检测。〔结果〕从入境废纸样本中检出一株鼻疽伯克霍尔德氏菌,并对该菌进行了系统鉴定,同时检出多种致病菌及条件致病菌。〔结论〕从入境废纸中检出鼻疽伯克霍尔德氏菌,显示入境废物原料对人体和环境具有潜在危害,出入境检验检疫机构应进一步加强对入境废弃物的监管。     

实时荧光RT-PCR技术在黄热病快速检测中的应用

[目的]建立黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法并用于口岸黄热病的快速检测. [方法]体外转录黄热病病毒5-UTR的部分序列核酸作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR不同的反应程序和引物/探针浓度的组合,摸索最佳反应体系条件并用于黄热病疫苗和入境发热患者标本的检测.[结果]建立的黄热病病毒的实时荧光RT-PCR检测方法最佳反应体系为:2xRT-PCR缓冲液10 μl,正向引物5UTR-FP终浓度750 nM,反向引物5UTR-RP终浓度750 nM,探针5UTR-Probe终浓度500 nM,25xRT-PCR Enzyme Mix 0.8μl,RNA 5μl,用DEPC H2O补足到反应总体积20μl;Roche lightcycler仪器适用的扩增程序为:45℃10 min,95℃10 min;95℃5 s,56℃10 s(single),72℃15 s,45次循环.该方法最低检测限约为20copies病毒/反应,与登革病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒等蚊媒病毒无交叉反应.应用该方法对黄热病疫苗、媒介蚊虫和入境发热患者的血清标本进行检测,结果为黄热病疫苗核酸阳性,其他标本为阴性.[结论]该实时荧光RT-PER方法灵敏度高,特异性强,适用于黄热病病毒的快速检验,防止该病在国境口岸的传入.