武汉市农村卫生改厕效果评价

为了解武汉市农村户厕的建筑和使用情况,评估农村卫生改厕效果,于2018年8—10月,在武汉市远城区随机抽取160户改厕（三格式户用卫生厕所）和56户非改厕的农村家庭,采用自行设计问卷调查户厕的一般情况、建筑情况、家庭环境卫生状况和管理情况,检测粪水中粪大肠菌值、沙门菌值指标。结果显示,与非改厕户比较,改厕户的户厕有门窗、给排水设施、盛放手纸的容器、专用清扫工具、洗手设施、陶瓷蹲便器和坐便器、自来水或冲洗水桶的比例均较高,差异有统计学意义（P<0.05）;两组户厕有通风设施的比例比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与非改厕户比较,改厕户庭院卫生、圈舍卫生状况良好的比例较高,差异有统计学意义（P<0.05）;而两组厨房卫生状况比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与非改厕户比较,改厕户的户厕卫生清洁比例高,有明显恶臭的比例较低、无蝇蛆、有粪污分离、一年以上清理粪渣、厕所正常使用的比例均较高,差异均有统计学意义（P<0.05）。改厕户户厕粪水的粪大肠菌值的合格率高于非改厕户,差异有统计学意义（P<0.05）;两组沙门菌检出率比较,改厕户沙门菌值检出率...     

西玛津调控SPAG6介导AP - 1转录活性对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的 研究与探讨西玛津对小鼠精母细胞（GC - 2 spd）增殖的影响及作用机制。方法 COS - 7细胞共转染pAP1 - luc和Spag6基因的表达质粒，荧光素酶报告基因实验检测SPAG6对AP - 1转录活性的影响。以不同浓度西玛津（0、5、25、125 μg/mL）染毒GC - 2 spd细胞24、48和72 h，采用CCK - 8法检测细胞存活率。西玛津染毒24 h后，western blot检测SPAG6和COPS5蛋白的表达变化，qPCR检测促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl - 2 mRNA的表达。结果 COS - 7细胞内过表达SPAG6能抑制AP - 1的转录活性。与对照组比较，25和125 μg/mL西玛津染毒组中GC - 2 spd细胞存活率、细胞内SPAG6蛋白及Bax mRNA的表达水平均下降，差异具有统计学意义（P＜0.05），然而COPS5蛋白及Bcl - 2 mRNA的表达没有显著变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 西玛津对GC - 2 spd细胞具有毒性作用，可能通过抑制SPAG6蛋白表达从而调节AP - 1介导的凋亡基因的表达，诱导生精细胞凋亡。     

有机磷阻燃剂TDCIPP诱导的m6A修饰引发雄性小鼠生殖毒性

目的 探讨TDCIPP染毒致雄性C57BL/6小鼠生殖毒性的机制。 方法 将24只4周龄C57BL/6小鼠根据体重随机分为四组,即5、25、125 mg/(kg·d) TDCIPP暴露组和玉米油对照组,灌胃染毒28 d后,HE染色观察小鼠睾丸组织形态学结构、附睾尾精子形态,并计算精子数量和畸形率;评估m6A修饰水平及m6A甲基转移酶（Mettl3、Mettl14、Wtap基因）、去甲基化酶（Alkbh5、Fto基因）mRNA水平;采用m6A - seq测序技术分析125mg/(kg·d) TDCIPP暴露后睾丸组织发生了m6A甲基化的基因差异表达情况;Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase - 3、Bax、Bcl - 2的表达。 结果 与对照组相比,TDCIPP暴露组小鼠睾丸组织结构均发生破坏;25和125 mg/(kg·d) TDCIPP暴露组附睾尾精子数量下降（P＜0.01）、精子畸形率上升（P＜0.01）,存在剂量 - 效应关系。125 mg/(kg·d) TDCIPP暴露组小鼠睾丸组织的RNA m6A修饰水平和Mettl14基因mRNA表达水平显著增加（P＜0.01）;m6A - seq测序发现差异表达基因主要富集在凋亡、RAP1、PI3K/AKT、MAPK等信号通路;Caspase - 3蛋白水平在各暴露组均上升（P＜0.001）,Bax/Bcl - 2比值在25和125 mg/(kg·d) TDCIPP暴露组上升（P＜0.001）,均存在剂量 - 效应关系。 结论 TDCIPP暴露可诱导小鼠睾丸组织内甲基转移酶METTL14介导的m6A甲基化修饰异常,进而引发雄性小鼠生殖毒性。     

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的 探究活性氧(reactive oxygen species, ROS)在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl₂对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl₂染毒TM3细胞24 h, Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl<...     

铅镉联合染毒对小鼠初级精母细胞的毒性效应

目的研究乙酸铅和氯化镉对小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)的联合毒性效应。方法将处于对数生长期的GC-2 spd细胞分别暴露于0(对照),不同浓度(10、20、40、80μmol/L)乙酸铅和(或)不同浓度氯化镉(1、2、4、8、16μmol/L)染毒24 h,采用CCK-8法检测细胞的存活率。采用活性氧(ROS)试剂盒检测20μmol/L乙酸铅及500μmol/L ROS保护剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)分别与不同浓度氯化镉(0、1、2、4、8、16μmol/L)联合染毒24 h后的ROS水平。结果与对照组相比,20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率上升,40、80μmol/L乙酸铅染毒组和2、4、8、16μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均下降,差异均有统计学意义(P0.05);而10μmol/L乙酸铅染毒组和1μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均无明显改变。与对照组相比,除10μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组和20μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的存活率升高外,其他联合染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05);而20μmol/L乙酸铅+2μmol/L氯化镉组GC-2 spd细胞的存活率无明显变化。与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,1μmol/L氯化镉+10、20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率均升高,而1μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05);仅2μmol/L氯化镉+20μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率升高,而2μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(P0.05);16μmol/L氯化镉+10、20、40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均无明显变化,细胞基本全部死亡。与对照组相比,各浓度氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,500μmol/L NAC与不同浓度氯化镉联合染毒组、20μmol/L乙酸铅与不同浓度氯化镉联合染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论乙酸铅和氯化镉对GC-2 spd细胞毒性具有交互作用,表现为乙酸铅对低浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有拮抗作用,对高浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有协同作用。     

自噬在镉致小鼠睾丸血-睾屏障损伤中的作用

目的:探究自噬在氯化镉致小鼠睾丸血-睾屏障(BTB)损伤中的作用。方法:将20只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组[0 mg/(kg·d)]、低剂量组[0.5 mg/(kg·d)]、中剂量组[1.0 mg/(kg·d)]和高剂量组[2.0 mg/(kg·d)],腹腔注射氯化镉，连续28 d。采用HE染色法分析睾丸组织形态学变化，生物示踪法观察BTB的完整性，Western印迹检测BTB组分ZO-1和N-Cadherin蛋白的表达。采用0、2.5、5和10μmol/L CdCl₂处理睾丸支持细胞株(TM4细胞)24 h, Western印迹检测ZO-1和N-Cadherin蛋白，以及自噬相关蛋白LC3II和p62的变化情况。在含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂氯喹(CQ)(5μmol/L)或自噬激动剂雷帕霉素(Rap)(50 nmol/L)处理细胞24 h, Western印迹检测LC3II、p62、ZO-1和N-Cadherin蛋白表达。结果:与对照组小鼠相比，镉染毒组小鼠的生精小管间隙增大、生精细胞内空...     

三阴性乳腺癌细胞中线粒体功能障碍对糖代谢途径的影响

目的:探讨线粒体功能损伤和膜通透性转换与乳腺癌细胞中葡萄糖有氧糖酵解途径的相关性。方法:分别采用MitoTracker Green、TMRE和钙黄绿素（Calcein AM）荧光染色检测乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MDA-MB-231、BT-20的线粒体形态、线粒体膜电位和膜通透性;通过检测试剂盒分析其葡萄糖消耗量、乳酸生成量、ATP水平,以及三羧酸循环中琥珀酸脱氢酶（SDH）和线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）的活性;采用Western blot检测三组细胞中糖酵解相关蛋白葡萄糖转运受体1（GLUTI）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）和乳酸脱氢酶A（LDHA）的表达情况。采用2.5 μmol/L环孢菌素A（CsA）处理MDA-MB-231和BT-20细胞24 h后检测其线粒体形态及糖代谢的相关指标。结果:与MCF-10A细胞比较,乳腺癌MDA-MB-231和BT-20细胞的线粒体呈短管状或点状,线粒体膜电位下降而线粒体膜通透性增加,葡萄糖消耗量和乳酸生成量均升高（P＜0.05）;细胞内GLUT1、GAPDH、PKM2和LDHA蛋白表达均显著升高而SDH和ICDHm酶活性降低（P＜0.05）;CsA处理后MDA-MB-231和BT-20细胞中线粒体呈长杆状,葡萄糖消耗量和乳酸生成量下降而ATP水平、SDH和ICDHm酶活性均升高（P＜0.05）。结论:乳腺癌MDA-MB-231和BT-20细胞中有氧糖酵解与线粒体异常相关,CsA可恢复线粒体结构和功能,重塑葡萄糖代谢途径。     

SPAG6/SPINK2蛋白复合物在小鼠精子顶体形成中的作用初探

目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定位;分别构建SPAG6和SPINK2蛋白表达质粒,以AH109和CHO细胞为对象,采用酵母双杂交及细胞内共定位实验检测SPAG6与SPINK2蛋白间相互作用;免疫荧光检测SPINK2在SPAG6基因敲除(KO)小鼠的睾丸生精细胞中的表达与定位。结果:小鼠出生后第16～28天,SPAG6表达显著升高,且定位于圆形精子细胞的顶体;酵母双杂交实验显示SPAG6/SPINK2组能在选择性培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)中生长;CHO细胞共转染SPAG6和SPINK2表达质粒时,SPAG6与SPINK2共定位在细胞核周围;SPAG6 KO小鼠睾丸生精细胞中未检测到SPINK2表达及定位于精子顶体。结论:SPAG6与SPINK2形成蛋白复合体,并可能通过调控SPINK2的稳定表达参与精子顶体形成。     

武汉市一起新冠确诊病例出院后家庭再现病例调查

  目的  分析新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例出院后家庭再现病例的流行病学特征,为家庭聚集性疫情防控提供依据。  方法  采用现场流行病学调查方法,收集疫情相关人员基本信息、暴露史、发病情况和临床诊疗资料等,分析家庭聚集性疫情感染来源和传播模式。  结果  本起家庭聚集性疫情中,有3名病例和1人核酸检测阳性。感染来源最大可能来自医院暴露,后续家庭内传播。首发病例C出院时可能未“痊愈”,家庭内再现病例的发病时间可能远早于其报告的“发病”时间,未发现支持出院后传播的证据。  结论  建议强化流行病学调查,并综合临床、实验室等结果进行综合研判,落实密切接触者集中隔离医学观察和病人家庭终末消毒。