吸入流行性出血热病毒气溶胶在大白鼠体内的沉积、转运观察

实验大鼠吸入用荧光素标记 EHFV 制备的 EHFV 气溶胶后,观察其体内清除、转运规律。结果发现,最初主要转运途径是经血液吸收和巨噬细胞吞噬,继而分布到各脏器,亦可通过肾脏随尿排出体外。整个清除转运过程约10天左右。     

PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响.方法选择O157∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物,分别或共同进行PCR扩增,检测40株O157∶H7和非O157∶H7菌株,将细菌按10+1～10+6稀释后比较PCR的检测灵敏度.结果所有O157∶H7菌株均在497 bp和625 bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物,其产毒株在484 bp和(或)210 bp处出现SLT2和(或)SLT1基因产物,非O157∶H7菌株PCR结果均为阴性;单一PCR检测灵敏度为150 CFU/PCR反应,多重PCR为＞1 500 CFU/PCR反应.结论在经过增菌后,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为产毒和非产毒O157∶H7的诊断提供了新的手段.     

恙螨体内汉坦病毒核酸的基因芯片检测

目的 建立快速、灵敏、特异的汉坦病毒基因芯片诊断方法。方法 根据发表的汉坦病毒属(HV)76-118株和R22株S基因核苷酸序列，设计引物和探针，制备寡核苷酸芯片。用CV3标记核苷和引物，运用不对称PCR技术制备单链荧光标记核苷酸片段，并与芯片上的寡核苷酸探针杂交，荧光扫描仪检测并分析信号。结果 研究制备的基因芯片能够检测汉坦病毒HTN型和SEO型病毒核酸的特异性荧光信号。结论 HV的基因芯片检测具有特异、灵敏、快速的优点。基因芯片的制备和检测技术的建立，可为肾综合征出血热等传染病的诊断和预防提供理想的方法。     

嵌合式聚合酶链反应检测恙虫病立克次体DNA

嵌合式聚合酶链反应检测恙虫病立克次体ＤＮＡ郭恒彬，吴光华，唐家琪，李先富，于明明，张云，潘秀珍，李越希目前，国内实验室诊断恙虫病的主要方法是检测患者血清中抗恙虫病立克次体（Ｒｔ）的抗体和患者全血接种小白鼠分离Ｒｔ，这些方法均不能作出早期诊断：国外已采...     

以乙肝病毒核心抗原HBcAg为载体的utrophin抗体的制备

目的构建以乙肝病毒HBc为载体的带有utrophin的两个B细胞表位多肽的融合表达质粒pHBc-2UB，表达出融合蛋白并纯化，通过免疫新西兰大白兔获得抗utrophin的抗体。方法通过DNAstarⅡ模拟出utrophin的两个显著优势的B表位。用PCR法合成片段插入HBcAg序列的78位，将该合成片段克隆至pET28a载体中，构建重组表达质粒，表达出融合蛋白HBc-2UB，纯化后免疫新西兰白兔。再将该合成片段克隆至pGEX4T-2载体中，构建重组表达质粒，表达出融合蛋白GST-2UB，用于检测两个表位的抗体。结果测序结果表明重组质粒构建成功，SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确，ELISA检测到高滴度抗体。结论以HBc呈现utrophin的B表位被成功表达和纯化，获得高滴度的与两个B表位结合的抗体，为utrophin检测和DMD治疗药物研究打下了基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7和霍乱弧菌的多重PCR检测

目的 建立同时检测肠出血性大肠杆菌(O157：H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法 首先选择O157：H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原(fliC)基因以及霍乱孤菌外膜蛋白(ompW)和肠毒素A亚单位(ctxA)基因特异的4对引物,分别或共同对O157：H7和霍乱孤菌进行PCR扩增,并以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果 所有O157：H7菌株均在497bp和625bp处出现O157 rfbE基因和H7 fliC基因扩增产物;霍乱菌株均出现560bp、302bp的ompW和ctxA基因扩增产物,O157：H7和霍乱弧菌共同扩增可出现4条单一条带。结论 选择4对特异引物的多重PCR方法可简便、特异、快速、灵敏地对O157：H7和霍乱弧菌进行同时检测。     

基因芯片检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7

目的设计和制备快速、特异、灵敏的检测大肠埃希菌O157：H7基因芯片。方法选择157：H7特异的rfbE、fliC、SLT1和SLT2基因,设计引物和探针,并制备检测芯片,通过两次聚合酶链反应(PCR)扩增,制备荧光标记的靶序列,并与芯片进行杂交,检测O157：H7菌株和非O157病原体。结果O157：H7菌株在采用单一和多重PCR两种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交,均在芯片相应探针处出现阳性信号,非O157杂交结果均为阴性;芯片检测灵敏度比PCR检测高。结论基因芯片可以快速、灵敏、特异地检测O157：H7,为建立快速灵敏的检测细菌病原体和鉴别诊断的自动分析系统提供了新方法。     

东南沿海新发和再发自然疫源性疾病流行特点与防控措施

东南沿海地区是我国自然疫源性疾病的重要疫区,部队曾遭到血吸虫病、恙虫病、流行性出血热的严重威胁。近年来,又发现莱姆病、斑点热、广州管圆线虫病疫源地。登革热在停息50多年后,又再发并引起流行。部队在作战、行军、演习、国防施工中,有时要进入这些疾病的疫源地,不免受到感染或引起流行。因此,需要加强调查研究,在掌握流行特点的基础上,进一步提出具有针对性的防控措施,为保障部队健康服务。     

丙型肝炎病毒(HCV)NS3抗原检测方法的建立与临床应用

用基因工程表达的丙型肝炎病毒 ( HCV) NS3蛋白 ,制备兔抗 - HCV NS3抗体 ,建立检测 HCVNS3抗原的 EL ISA法。该法特异性好 ,批内和批间 CV分别为 5.4%～ 8.9%和 7.8%～ 9.8% ,临床检测结果表明 :60例慢性丙型肝炎患者 ;30例抗 - HCV- Ig G合并 Ig M阳性病人 ;2 50例抗 - HCV- Ig G病人 ;2 0 0例透析病人 ;2 0例白血病病人 ;1 50例普通病人 ;30 0例供血员中 HCV NS3抗原阳性检出率分别为1 3.3% ,2 3.3% ,1 0 .4% ,3.0 % ,5.0 % ,2 .6% ,1 .0 %。结果显示 NS3抗原的检测 ,可作为一种新的方法 ,能更好地反映患者体内 HCV的感染情况     

广谱高特异性重组丙型肝炎病毒抗原的制备纯化及鉴定

利用逆转录PCR技术克隆了中国株HCV的核心蛋白基因和非结构3区蛋白基因,DNA序列无分析显示克隆的基因片段属HCV-Ⅰ型。将二个基因片段分别克隆至质粒表达载体内,构建了多株表达融合和非融合核心蛋白的工程菌及表达非结构3区蛋白的工程菌。建立了二种重组蛋白的纯化方法,