广东省珠海市两种常见沙门菌血清型的分子分型分析

目的 研究珠海市沙门菌1,4,［5］,12:i:–和鼠伤寒沙门菌的耐药和遗传学特征,为食源性疾病分子流行病学调查提供参考数据。 方法 用纸片法进行抗生素敏感试验,根据PulseNet监测网络公布的沙门菌脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方案与欧洲食源性疾病监测网公布的鼠伤寒沙门菌多位点可变数目串联重复序列分析分型方案,对从腹泻病例分离的121株鼠伤寒沙门菌和S. 1,4,［5］,12:i:–进行PFGE和MLVA分型。 结果 药敏试验结果显示,鼠伤寒沙门菌和S. 1,4,［5］,12:i:–的多重耐药株分别为45株（45/51,88.24%）和51株（51/70,72.86%）,2种菌多重耐药率差异有统计学意义（χ2＝4.256,P＝0.039）,两者的耐药率＞50.00%的抗生素分别是氨苄西林、四环素、复方磺胺甲恶唑和氯霉素。 121株沙门菌经PFGE分型后获得88个型别,2种菌株间没有明显聚类特征,但鼠伤寒沙门菌的型别更为分散,优势型别PT15的11株菌包含了2种血清型。 MLVA分型结果显示5个位点中以STTR5和STTR6的重复数变化最多,分别是11和14个重复数,STTR9和STTR3次之,95.87%的菌株在STTR10p位点无扩增产物。 经MLVA分型后获得50个型别,优势型别为MT18和MT10,分别有23株和11株菌,均包含了2种血清型,经构建最小生成树分析发现91.74%（111株）菌株分布在Ⅰ群。 结论 珠海市2种菌株的多重耐药率较高,分子分型型别多样,但鼠伤寒沙门菌型别更为分散,两者遗传特征相似。      

广东省2009－2013 年霍乱弧菌病原学特征分析

目的 分析广东省2009－2013 年霍乱病例及环境来源O1/O139 群霍乱弧菌病原学特征。方法 选取2009－2013 年广东省霍乱病例来源、环境（水体和海水产品）来源的O1/O139群霍乱弧菌。采用血清分型、抗菌药物敏感性试验、毒力基因PCR 检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型方法 , 研究不同来源的霍乱弧菌血清型、抗菌药物敏感性、毒力基因携带以及分子分型方面的异同。结果 2009－2013 年广东省共分离得到各类来源O1/O139 群霍乱弧菌190株（病例16 株, 外环境174 株）。病例来源菌株分为O1 群稻叶型（3 株）、小川型（7 株）和O139 群（6株）3 种菌型;其中10 株ctxA 基因阳性, 2 株小川型菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;5 株菌对11 种抗菌药物完全敏感, 3 株对4 种抗菌药物表现出耐受。外环境来源菌株中53 株稻叶型, 22 株小川型和2 株O139 群菌株携带不完整CTXΦ噬菌体;2 株O139 菌株检出ctxA 基因阳性;25 株对≥4 种抗菌药物耐受, 其中有2 株同时对11 种抗菌药物中的7 种耐受, 以水产品中的稻叶型菌株为主（13株）。PFGE分子分型结果显示, 菌株经NotⅠ酶切后的PFGE型别表现出明显的多样性。稻叶型和O139 群病例菌株的带型聚集在同一个聚类中, 小川型病例菌株带型分散在不同的聚类中, 病例来源菌株与环境来源菌株的带型差别较大。结论 广东省O1/O139 群霍乱弧菌毒力基因和遗传特征复杂多样, 菌株多重耐药形势严峻, 需要加强菌株型别变异及耐药监测。     

建立公共卫生网络实验室有效防控传染病

大干世界变幻莫测。在一些新的传染病不断涌现的同时，一些曾经被控制的传染病也开始死灰复燃，这些新发和再发的传染病严重威胁着人类的健康。随着全球交通和贸易的增长，这些流行性疾病也时常跨越国界而引起世界性的传播。因此，建立有效的传染病监测系统是阻止传染病在地区和国际间传播的一个必要手段。在监测系统中，公共卫生实验室扮演了重要的角色。将不同地区的实验室组织到一起，[第一段]     

铜绿假单胞菌LasⅠ基因反义核酸载体的构建及生物学作用研究

目的 构建LasⅠ基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasⅠantisense,转化入铜绿假单胞菌并分析其生物学作用.方法 PCR扩增LasⅠ基因序列,反向克隆法构建LasⅠ基因的反义核酸原核表达载体pUCP18/lasⅠantisense,并转化铜绿假单胞菌.通过检测转化菌的LasB和LasR基因表达,测定外毒素的活性和绿脓菌素的表达等指标,分析pUCP18/lasⅠantisense的生物学作用.结果 成功构建pUCP18/lasⅠantisense并转化铜绿假单胞菌,且有效表达,转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素和绿脓菌素表达水平均降低.结论 pUCP18/lasⅠantisense可以降低铜绿假单胞菌毒力因子表达,提示LasⅠ基因可作为医院内铜绿假单胞菌感染治疗的一个新的靶点.     

实时聚合酶链反应检测O1群和O139群霍乱弧菌方法的建立及应用

目的建立检测O1群和O139群霍乱弧菌的实时荧光聚合酶链反应（RT—PCR）方法并进行水体标本的检测评价。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb序列设计引物，利用SYBRGreen染料，建立同时检测霍乱弧菌O1群和O139群的RT—PCR方法，对所建立的方法分别进行实验室内的灵敏度、特异性及重复性评价。采集河口水标本增菌后进行RT—PCR检测，与分离培养方法比较评价实际应用价值。结果建立了检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重RT—PCR方法，根据扩增产物的溶解温度能有效区分O1群和O139群霍乱弧菌两种目标片段的扩增；对其他10种弧菌染色体DNA没有扩增；RT—PCR检测524份河口水体标本的增菌液，与常规分离方法相比显示了明显的灵敏性，并且所有常规分离方法阳性标本其荧光PCR检测亦为阳性。结论以O1群和O139群rfb基因为目标检测片段建立的霍乱弧菌RT—PCR方法可用于环境水体样本中霍乱弧菌常规分离前的快速筛查。     

广东省2007年度非伤寒沙门菌监测及病原学特征分析

目的 了解广东省腹泻病患者中非伤寒沙门菌感染情况和菌株的血清型别、分布、耐药性变化.方法 对纳入研究的腹泻病患者进行非伤寒沙门菌检测,对分离到的菌株进行血清分型、药物敏感性试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 2007年度共检测1128份腹泻粪便标本,分离到71株沙门菌,阳性检出率为6.29%;共分得29种血清型,肠炎和鼠伤寒沙门菌居多;大多数沙门菌对常用的头孢类和喹诺酮类抗生素敏感,鼠伤寒沙门菌的耐药率普遍较肠炎和斯坦利沙门菌高;除肠炎沙门菌外,其余的血清型没有同一PFGE型别的菌株;用Xba Ⅰ酶切17株肠炎沙门菌可分为PFGE-XbaⅠ 1～8型,其中PFGE-XbaⅠ 4型为优势型别.用Sfi Ⅰ和Not Ⅰ酶对12株肠炎沙门菌进行再分型,综合用Xba Ⅰ/Sfi Ⅰ/Not Ⅰ三种酶的结果 发现仍有三组菌的PFGE图谱是完全一致的.结论 2007年度广东省非伤寒沙门菌的感染多数为散发病例,头孢类和喹诺酮类抗生素是治疗非伤寒沙门菌感染的首选药物.     

广东省布鲁氏菌菌株脂肪酸成分分析

目的探讨脂肪酸成分分析方法对广东布鲁氏菌菌株进行分型的可能性,获得广东布鲁氏菌脂肪酸成分的本底资料。方法选择历年从广东不同地区分离到的29株布鲁氏菌进行了菌体脂肪酸成分分析,利用MIDI公司Sherlock系统的软件进行聚类分析。结果广东布鲁氏菌的主要脂肪酸成分为19：0cycloω8c酸、16：0酸、18：0酸,其中牛种菌的19：0cycloω8c酸含量最高,羊种次之,猪种最低,其中羊种和猪种布鲁氏菌19：0cycloω08c酸、18：0酸含量差异有统计学意义,1965年和近3年的羊种布鲁氏菌株19：0cycloω8c酸、18：0酸含量差异有统计学意义。结论菌株的脂肪酸成分稳定,但各种间脂肪酸含量存在差异,一定的欧氏距离时,可以在种的水平上区分布鲁氏菌的3个种。     

广东省流行性脑脊髓膜炎流行菌群变化趋势分析

目的研究流行性脑脊髓膜炎（流脑）流行菌群的变迁趋势。方法对广东省1966—2009年分离的656株流脑菌株的血清群构成进行分析。结果656株流脑菌株中,A群占24％、B群占47％、C群占9％,其它群占20％。1966—2001年的447株流脑菌株中,A群占22％、B群占46％、C群占6％,其它群占26％;2002—2009年的209株流脑菌株中,A群占28％、B群占53％、c群占13％,其它群占6％。A群流脑病人来源菌株比例由85％下降至47％,B群流脑病人来源菌株比例由15％上升至28％,c群流脑病人来源菌株比例由0％上升至22％。健康人群鼻咽部携带C群流脑菌株的比例由7％上升至11％,A群由9％上升至24％,B群由53％上升至58％。结论广东省流脑病人及健康人群携带菌株中,C群、B群流脑菌株的比例呈上升趋势,流脑流行菌群正在发生从A群到C群、B群的变化。     

2008年广东省手足口病实验室检测结果分析

目的对广东省2008年手足口病实验室检查结果进行分析,了解2008年广东省手足口病病原学特征,为实验室诊断手足口病提供参考。方法采集2008年4—12月广东省各地送检的292例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液等标本426份和98名手足口病病例接触者的粪便、肛拭子和咽拭子等标本98份,应用RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)。结果292例手足口病患者的426份各类样本中,检测到肠道病毒阳性267份,EV71病毒特异性基因片段阳性169份,CVA16特异性基因片段阳性36份,EV71和CVA16病毒核酸同时阳性3份。292例手足口病病例中,EV71的检出率较CVA16高,分别为50.68%(148/292)和11.99%(35/292),20例手足口病死亡病例均为EV71感染病例。手足口病病例粪便样本的肠道病毒、EV71和CVA16的检测阳性率最高,分别为76.72%(178/232)、45.26%(105/232)和14.66%(34/232),且在发病9 d后仍能检测到EV71病毒。98名手足口病病例接触者的各类样本中,分别检测...     

1起副溶血性弧菌食物中毒的菌型鉴定及同源性分析

目的对1起副溶血性弧菌引起的食物中毒进行菌型鉴定及同源性分析,为食物中毒疫情处置提供参考。方法采集病例和食物、外环境标本进行菌株型别的分离鉴定,并对菌株同源性进行分析。结果共采集标本17份,其中3份外环境标本和5份病例标本检出副溶血性弧菌,病例菌株血清型均为O3:K6,环境菌株血清型为O4:KUT和O1:KUT。所有菌株trh基因阴性,病例菌株tdh阳性,环境菌株tdh阴性。脉冲场凝胶电泳(PFGE)指纹图谱显示所有病例菌株具有相同的PFGE图谱,与环境菌株的PFGE图谱的相似性为64.1%。结论该起食源性疾病暴发疫情是由O3:K6型副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。