Therapeutic effect of 5-FC on YCD modified murine P388 leukemia in vivo

Cytosine deaminases (CDs) in bacteria andfungi are found to deaminate prodrug 5 - FC intocytotoxic agent 5 - FU .Yeast CD (YCD) is clonedfrom Saccharomyces cerevisiae.It has been shownpreviously that YCD was more efficient inconversing5 - FC than bacterial CD(b CD) [1-3 ] .As anovel suicide gene therapy system,YCD/ 5 - Fcsystem may be promising in cancer therapy andprevention of graft versus host disease.In thepresent study,we established a P388/ DBA murineleukemia model by infusin…     

酵母菌胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因系统对人原代T细胞的作用

目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶基因(YCD)是新型自杀基因,利用重组逆转录病毒载体(RV),将YCD高效导入人原代T细胞,并在体内外探讨转基因T细胞的功能及"自杀"效应。方法:构建RV载体MSCV-YCD-puroR,瞬时质粒共转染法制备RV,流动感染法或Retronectin 离心法感染人原代T细胞,嘌呤霉素筛选获得T-YCD-puroR,检测转基因T细胞对肿瘤细胞的杀伤及细胞因子分泌功能,在体外和SCID小鼠体内,探讨前体药物5氟胞嘧啶(5-FC)对T-YCD-puroR细胞的杀伤效应等。结果:病毒滴度为(5.0±3.7)×106TU/mL。流动转染法对人原代T细胞的基因导入率46.0%±9.6%,2轮离心 Retronectin法的基因导入率为60.3%±7.6%(n=3)。经嘌呤霉素筛选48h获得T-YCD-puroR细胞,其基因阳性率96.7%±1.5%,并可大量扩增。与野生T细胞比较,T-YCD-puroR细胞杀伤K562肿瘤细胞的能力及细胞因子分泌功能无统计学意义。体外实验显示,与野生T细胞比较,T-YCD-puroR细胞对puromycin的IC50上升了304.9倍(0.071mg/Lvs22.3mg/L),对5-FC的IC50下降了133.3倍(656.0μmoL/Lvs4.9μmoL/L)。T-YCD-puroR细胞静脉接种于SCID小鼠,7d后每只小鼠腹腔注射5μmoL的5-FC,连续7d,首次给药24h后即可观察到SCID小鼠外周血中CD45 细胞显著下降(P<0.01)。结论:YCD自杀基因导入对人原代T细胞功能无显著影响,T-YCD-puroR细胞可以在体内外被5-FC有效杀伤。本研究为进一步研究打下了良好的基础。     

D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨

目的:探讨D-氨基酸氧化酶( DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制. 方法:[ HT5"SS〗以D-Ala杀伤稳定表达DAAO和绿荧光蛋白(GFP)的高致瘤性K562e单克隆细胞K DfGd、KDfGC,应用MTT法检测细胞存活率,并用酚红氧化法测定培养上清H2O 2和Lowry法测定细胞蛋白数量,流式细胞仪测定细胞GFP的荧光强度.结果:在25 mmol/L D-Ala作用下24 h即可完全杀死KDfGd细胞,当 D-Ala为20 mmol/L时延长作用时间至48 h,杀伤率由64％增加至96.8％,而D -Ala≤15 mmol/L时杀伤率增加不明显.低于20 mmol/L,D-Ala 对K562e几乎无杀伤作用.培养上清的H2O2变化与杀伤转基因细胞作用相一致.结论:DAAO/D-Ala系统可能是通过产生H2O2发挥杀伤转基因K562e白血病细胞的作用 .     

儿保1号治疗非缺锌性小儿厌食症124例临床研究

根据中医中药“健脾导滞，清热利湿、泻火通便”辩证施治理论，由板兰根、大黄、陈皮、黄芩、神曲、茯苓、山楂、半夏、槟榔、莱服子10味中药配制成的儿保1号冲剂，口服治疗非缺锌性小儿厌食症，加多酶片疗效满意，对照组单纯用多酶片，两组疗效，有显著性差异。     

DAAO/D-Ala系统对高致瘤性K562e细胞体外杀伤效应及其机制的研究

目的 研究D－氨基酸氧化酶（DAAO）／D－丙氨酸（D－Ala）自杀基因系统在基因治疗中的应用。方法 应用转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞KDfGC，用ＰＣＲ、原位杂交技术对ＤＡＡＯ基因修饰的ＫDfGC、不同比例ＤＡＡＯ表达阳性与阴性混合细胞的杀伤作用；用酚红氧化法测定培养上清Ｈ２Ｏ２水平。结果 ＰＣＲ和原位杂交分析证明ＤＡＡＯ基因已整合至细胞基因组中，并在mRNA水平表达。ＫDfGC与未转基因的原肿瘤细胞相比，生长速度差异无显著性。１２.5／Ｌ Ｄ－Ａla作用２４h即可杀死近９０％的ＫDfGC细胞，而且Ｄ－Ａla达到一定有效浓度杀伤效率可成倍提高。上清的Ｈ２Ｏ２产生水平与杀伤转基因细胞作用相一致。ＫDfGC与不同比例的Ｋ５６２e细胞混合时，被１５.0mmol/L D-Ala杀死的细胞比例不超过ＫＤfGC细胞的比较。结论 ＤＡＡＯ／Ｄ－Ａla系统可有效杀伤Ｋ６５２e白血病细胞，在该模型未观察到明显旁观者效应。     

偏头痛的针刺治疗与护理

偏头痛是一种反复发作的神经血管性头痛,常呈一侧或两侧疼痛,少数患者有发作前视觉、感觉和运动等先兆。它是一种常见的、发病率较高的病种之一,在国内,成年人中发病率为7.7%～18.7%,其中男性为1%～19%、女性为3%～29%。常与精神因素、体内激素水平、各种理化因素的刺激有关。笔者就我院疼痛科自2003～2008年间,针对偏头痛患者采用针刺治疗和综合护理进行了临床研究,现报道如下。     

辐射远后效应对红细胞膜阴离子转运蛋白基因表达的影响

目的：研究辐射远后效应对红细胞膜阴离子转运蛋白（band3)基因表达的影响。方法：分离10年期骨髓型急性放射病（ARS）患者骨髓有核细胞，二步法液体培养红系，取新生红细胞涂片，做band 3 mRNA原位杂交，抽提外周血有核细胞总RNA，进行RT－PCR，以β-actin作为内参照，半定量分析band3 mRNA表达丰度。结果：ARS新生红细胞中band 3 mRNA原位杂交显色不均，淡染，定量分析显示1／2患者band 3 mRNA表达强度减弱。结论：辐射远后效应可能在转录水平影响红细胞膜阴离子转运蛋白基因表达，使转录产物减少，翻译产物功能下降即阴离子转运能力减弱，红细胞成熟过程延迟。     

儿保1号治疗非缺锌性小儿厌食症124例临床研究

根据中医中药“健脾导滞，清热利湿、泻火通便”辩证施治理论，由板兰根、大黄、陈皮、黄芩、神曲、茯苓、山楂、半夏、槟榔、莱服子10味中药配制成的儿保1号冲剂，口服治疗非缺锌性小儿厌食症，加多酶片疗效满意，对照组单纯用多酶片，两组疗效，有显著性差异。     

miR-138靶向SYT13对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探究microRNA-138(miR-138)对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响并探讨其相关机制.方法 RT-PCR检测胃癌和癌旁组织中miR-138的表达及miR-138与上皮标志物E-Cadherin及间质标志物Vimentin表达的相关性;使用TargetScan 7.2预测miR-138的可能结合靶点,荧光素酶报告实验、Western blot及RT-PCR检测miR-138对SYT13的调控作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测miR-138调控SYT13对MGC803细胞侵袭迁移能力的影响.结果 miR-138在胃癌中表达下调(P＜0.001),并与E-Cadherin表达呈正相关(r=0.3022,P＜0.05),与Vimentin表达呈负相关(r=0.4762,P＜0.05).miR-138与SYT13存在结合位点,共转染miR-138和SYT13,荧光素酶活性降低(P＜0.05),过表达miR-138,SYT13的mRNA(P ＜0.05)和蛋白(P ＜0.001)表达被抑制.过表达miR-138抑制MGC803细胞侵袭能力(P＜0.001),而同时过表达SYT13,MGC803细胞侵袭能力恢复(P ＜0.001).同时miR-138抑制胃癌细胞迁移,而SYT13促进迁移能力.结论 miR-138可以通过下调SYT13的表达抑制胃癌MGC803细胞的侵袭和迁移能力.