长链非编码RNA LOC101927019在PM_(2.5)致16HBE细胞炎症反应中的作用

目的探讨长链非编码(lnc)RNA LOC101927019在大气PM_(2.5)致人支气管上皮细胞(16HBE细胞)炎症反应中的作用。方法将采集的广州市大气PM_(2.5)制备成混悬液染毒16HBE细胞,以荧光定量PCR检测不同浓度(25~100μg/ml)PM_(2.5)染毒细胞炎症因子IL-1β基因及lnc RNA LOC101927019的表达水平。采用RNA干扰技术敲低16HBE细胞中LOC101927019的表达,检测100μg/ml PM_(2.5)染毒si RNALOC101927019-16HBE细胞中IL-1β基因的表达水平。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒16HBE细胞IL-1β及LOC101927019的表达上调(P0.01);与对照组比较,16HBEsi RNALOC101927019细胞LOC101927019的表达明显下降(P0.05);与PM_(2.5)染毒转染阴性对照组相比,PM_(2.5)染毒16HBE-si RNALOC101927019细胞IL-1β基因的表达明显下降(P0.01)。结论 lnc RNALOC101927019在PM_(2.5)暴露染毒的细胞中高表达,敲低lnc RNALOC101927019表达可抑制IL-1β的分泌,lnc RNALOC101927019可能在PM_(2.5)致细胞炎症反应中起促炎作用。     

长链非编码RNA AABR07008568.1在PM2.5致NR8383细胞炎症反应中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)AABR07008568.1在大气PM_(2.5)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)炎症反应中的作用及其分子机制。方法采集广州地区现场实时PM_(2.5)样品制成混悬液用于后续实验的染毒,用0、200μg/ml PM_(2.5)染毒液暴露NR8383细胞24 h后,采用lncRNA高通量测序并结合生物信息学分析方法筛选出有差异表达的lncRNAs,使用实时荧光定量PCR分析法(RT-qPCR)验证测序结果。运用胞浆胞核亚细胞定位试剂盒检测AABR07008568.1在胞浆胞核的分布情况。采用RNA干扰(RNAi)技术敲低NR8383细胞中AABR07008568.1的表达水平,以RT-qPCR检测RNA干扰联合200μg/ml PM_(2.5)染毒液暴露NR8383细胞后IL-6的表达水平。用NFκB特异性抑制剂(BAY11-7082,10μmol/L)处理细胞后检测AABR07008568.1的表达水平。结果高通量测序和RT-qPCR结果显示,随着PM_(2.5)暴露浓度的增加,AABR07008568.1表达量增高(P0.05)。通过干扰AABR07008568.1后发现siRNA1的转染效率最高,达到约60%(P0.05)。敲低AABR07008568.1且联合PM_(2.5)暴露后,与阴性对照(NC)组相比,siRNA1组中IL-6的表达水平降低,差异具有统计学意义(P0.05);NC+PM_(2.5)组中的IL-6表达上调,差异具有统计学意义(P0.05)。当使用NFκB特异性抑制剂阻断NFκB通路后,AABR07008568.1表达量下降(P0.05)。结论 AABR07008568.1参与了NFκB通路的激活,但两者之间具体的调控机制尚需更深层次的探索。     

NFκB通路与长链非编码RNA NONHSA G057461.1在PM2.5诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应中的作用

目的研究lncRNAs在大气PM_(2.5)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应中的作用及其分子机制。方法HUVECs经100、300μg/ml的PM_(2.5)染毒48 h后,经过非长链非编码RNA测序得到与炎症相关的lncRNAs,用实时荧光定量PCR分析法(RT-qPCR)验证测序结果。运用胞浆胞核分离试剂盒进行NONHSAG057461.1基因亚细胞定位。采用RNA干扰技术敲低HUVECs中NONHSAG057461.1的表达后,以RT-qPCR检测干扰后IL-1β的表达水平,用NFκB特异性阻断剂BAY11-7082(10μmol/L)处理细胞后检测NONHSAG057461.1的表达水平。结果验证测序结果表明PM_(2.5)可以诱导HUVECs中NONHSAG057461.1上调,且与染毒剂量有一定的剂量-效应关系;干扰NONHSAG057461.1后再用PM_(2.5)染毒,IL-1βmRNA的水平下降。BAY11-7082(10μmol/L)预处理细胞后,发现NONHSAG057461.1的m RNA表达下降,说明NFκB能够调控该基因的表达。结论 NFκB通路可能参与长链非编码RNA-NONHSAG057461.1介导的暴露于PM_(2.5)的人脐静脉内皮细胞炎症反应,具体的机制尚需进一步探索。     

缺血性脑卒中m6A修饰与免疫微环境相关性分析

目的 初步探究N⁶-甲基腺苷(m⁶A)调节因子在缺血性脑卒中(IS)免疫微环境中的潜在作用与机制。方法 基于基因表达综合数据库(GEO),应用单样本基因集富集分析(ssGSEA)、一致性聚类分析和基因集富集分析(GSEA)等生物信息学方法综合分析m⁶A调节因子与IS免疫微环境的相关性。结果 Spearman相关分析结果显示,IGF2BP2 mRNA的表达与CD56亮自然杀伤细胞富集分数的正相关关系最强(r_s=0.66),IGF2BP2 mRNA的表达与2型T辅助细胞富集分数的负相关关系最强(r_s=-0.64);ELF3 mRNA的表达与TGFb家族成员富集分数的正相关关系最强(r_s=0.56),ELAVL1 mRNA的表达与趋化因子富集分数的负相关关系最强(r_s=-0.66)(均P<0.05)。一致性聚类分析确定了两种具有不同m⁶A修饰模式的IS亚型,亚型1中活化B细胞、活化CD4 T细胞、活化CD8 T细...