生物化学与细胞生物学课程整合的探讨

为了适应新世纪教学内容和课程体系改革的要求,我校借鉴美国哈佛大学医学院的经验,将生物化学与细胞生物学两门课程整合为“细胞的化学与生物学”。整合后在减少两个学科间重复内容、增加学科间联系、减少学时、早期接触临床、培养学生分析解决问题的能力、创新能力等方面有了很大改进,为这两门课程的改革开辟了新途径。     

T细胞转录因子-4在大鼠脑缺血再灌注海马齿状回神经干细胞中的表达

目的:检测T细胞转录因子-4(Tcf-4)在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及其变化。探讨影响神经干细胞早期增殖分化的分子调控机制。方法:采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作大鼠脑缺血再灌注模型。用免疫组织化学SP法及RT-PCR法检测海马神经干细胞BrdU、Tcf-4中的表达。结果:随着脑缺血再灌注第3日齿状回神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7日达高峰,然后逐渐减少。Tcf-4 mRNA反应产物随脑缺血再灌注时间延长逐渐增多,第21日表达最强,以后表达逐渐减少。结论:Tcf-4时间依赖性表达与神经干细胞增殖分化进程相吻合,说明其在神经干细胞晚期分化中起重要调控作用。     

铅对小鼠海马[Ca2+]的影响及L型钙通道的作用

目的　探讨铅对分离的小鼠海马细胞内游离钙的影响及其及L型钙通道的作用。方法　采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞 ,并以莹光指标剂 (Fura 2 )作Ca2 荧光探针 ,用双波长荧光法测定海马细胞 [Ca2 ] i。结果　铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 ] i 升高 [由静息时的 (2 0 3 4± 10 86)nmol L升至 (4 2 3 3± 19 2 6)nmol L] ,而不论胞外是否有钙 ;铅可抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 ] i 升高 ,尼莫地平可加强这种抑制作用 ,而BayK864 4则可部分消除这种抑制作用。结论　铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 ] i 升高作用与胞内钙库释放有关 ;铅的抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 ] i 升高作用与其抑制L型钙通道有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌的影响

目的观察Ras-Raf-ERK 1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖和凋亡影响,探讨bFGF及其信号转导途径与卵巢癌发生发展关系。方法以bFGF和促细胞分裂剂激活性蛋白激酶1(MEK1)抑制剂PD98059处理CAOV3细胞,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白印迹(Western blot)检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的活性。结果bFGF处理后细胞增殖比明显增加,且与bFGF水平呈剂量依赖关系,bFGF浓度为75 ng/ml时细胞增殖比最高为140%;bFGF使无血清诱导的凋亡细胞比例下降[(33.20±5.32)%~(2.38±3.36)%];bFGF诱导ERK1/2活性增高。PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论bFGF通过Ras-Raf-ERK 1/2途径介导,促进卵巢癌CAOV3细胞增殖,抵抗无血清诱导凋亡。在卵巢癌发生发展过程中,bFGF信号传递发挥了重要作用。     

急、慢性染铅对大鼠海马细胞外信号调节激酶2影响

目的探讨急、慢性染铅对大鼠海马总量细胞外信号调节激酶2(ERK2)含量的影响。方法取正常30 d大鼠海马脑片培养,分别用含20μmol/L醋酸铅和不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,作为急性染铅试验标本。大鼠在体染铅,取新生大鼠海马作为慢性染铅标本。用Western印迹法测定标本总量ERK2含量。结果急性染铅实验:染铅组和对照组总量ERK2含量均无明显变化。慢性染铅实验:慢性染铅总量ERK2含量于出生20 d后显著下降。结论急性染铅对总量ERK2含量无明显影响。慢性染铅使ERK2基因表达水平下降,总量ERK2含量明显减少。     

慢性铅暴露对小鼠海马PKC-γ蛋白表达影响

目的 观察铅对小鼠海马蛋白激酶C中γ亚型(PKC-γ)蛋白表达的影响.方法 幼鼠出生第1 d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6 mmol/L.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水.分别在第14,21,35,48 d处死小鼠,用蛋白免疫印记法检测各组小鼠海马区PKC-γ蛋白表达状况.结果 慢性铅露对小鼠脑海马PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 铅扰乱PKC-γ蛋白正常表达.     

PKC-γ和ERK在慢性染铅小鼠脑皮质区的异常表达

目的观察和探讨铅对小鼠脑皮质区蛋白激酶C-γ(PKC-γ)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法小鼠出生1d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,21,28,35d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达状况;分别在7,14,21,28d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区ERK蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度铅2.4mmol/L使ERK表达升高,此后随铅浓度升高ERK表达量逐渐降低,铅浓度升高至9.6mmol/L时,随着铅浓度升高,ERK表达量不再降低,相反有所回升。结论铅扰乱小鼠脑皮质区PKC-γ及ERK蛋白正常表达。     

运动对大鼠骨骼肌p38活性的影响

目的:探讨运动对大鼠骨骼肌p38磷酸化、蛋白和基因表达的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分为1h/d、1.5h/d组,共7周,运动结束后24h和48h取材。测定葡萄糖和胰岛素浓度。采用Westernblot法检测p38和phos-p38的表达,用RT-PCR法分析p38mRNA的表达。结果:与对照组比较,1h/d运动24h取材和1.5h/d运动24h与48h取材p38磷酸化水平明显升高;1.5h/d运动24h取材蛋白含量下降;p38mRNA升高发生于1h/d和1.5h/d运动24h取材组。结论:运动改善p38磷酸化、蛋白和基因表达。     

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的测定.方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2 荧光指示剂Fura-2双波长荧光法测定[Ca2 ]i.结果:海马细胞存活率超过95%.细胞外Ca2 1.0 mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2 ]i为(210±10.7)nmol/L.30 mmol/L KCl可显著增加[Ca2 ]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系.结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura-2建立的双波长荧光法灵敏、可靠.     

生物化学理论课程PBL模式的教学实践

为适应当前以实践能力和创新能力为核心的素质教育的要求,中国医科大学生物化学与分子生物学教研室于2004学年下半年在2003级五年制临床医学专业进行了小规模、阶段性的以问题为基础学习模式的教学实践。结果表明,这一教学模式在提高学生自学能力和知识运用能力上有积极的促进作用。