乙型肝炎病毒S和前S1基因的融合构建及其在P. pastoris酵母中的表达

目的构建含有乙型肝炎病毒(HBV)S和前S1(preS1,10～50AA)表位的ss1融合基因,并在P.pastoris酵母中表达SS1融合蛋白。方法以HBV全基因组质粒为模板,扩增出目的区段:S(1～222AA)、preS1(10～50AA),以酶切-PCR的方法将其连接为ss1融合基因,然后克隆入表达载体pPIC3.5k;电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115,筛选后进行诱导表达并对表达产物进行检测。结果表达产物的相对分子质量为30000左右,与抗HBs抗体和抗preS1抗体均有特异反应。结论ss1融合基因能够在P.pastoris酵母中高效表达,而且表达产物具有HBVS蛋白和preS1蛋白的抗原性,为进一步研究其免疫原性打下基础。     

乙型肝炎表面抗原对BALB/c小鼠细胞免疫应答的影响

目的研究不同来源乙肝表面抗原(HBsAg)对BALB/c小鼠的某些细胞免疫应答的影响.方法采用血源、CHO和酵母HBsAg分别免疫BALB/c小鼠,于免疫后不同时间制备脾脏单个核细胞(MNC),测定MNC对刀豆蛋白(ConA)和细菌脂多糖(LPS)的增殖反应性;采用绵羊红细胞(SRBC)作为致敏原,测定不同HBsAg免疫小鼠后迟发性超敏反应(DTH)的发生程度.结果不同来源HBsAg对ConA或LPS刺激的反应指数(SI)表现出不同的时间曲线,一般于免疫20?d和25?d时显著升高,其中血源HBsAg较高,酵母较低.H.M.-HBsAg在免疫5?d时即显出较高的SI值.CHO-HBsAg对SRBC诱导的DTH反应具有显著的抑制作用(P＜0.05).结论不同来源HBsAg诱导细胞免疫反应的类型和程度存在差异,CHO细胞来源的HBsAg对TH1细胞介导的DTH反应有抑制作用.     

不同来源乙肝表面抗原的细胞免疫学对比研究

目的　研究不同来源乙肝表面抗原诱导CD8 抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)的差异及T细胞产生细胞因子的能力 ,从而对各种来源乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)的免疫原性有更充分的评价。方法　不同来源HBsAg分别免疫BALB c小鼠 ,于免疫后不同时间制备脾脏单个核细胞 (MNC) ,再以相应的HBsAg体外刺激 ,酶联免疫方法 (ELISA)测定细胞因子分泌水平 ;以Na2 5 1CrO4标记靶细胞 ,测定CTL反应活性 ;应用流式细胞仪分析T细胞亚群。结果　HM HBsAg免疫小鼠 10d后的脾细胞产生IFN γ水平最高 ,而在免疫后 2 0d和 2 5d ,IL 2的水平显著高于其它各组 ,CD3 分子脾淋巴细胞显著高于其它各实验组 (P <0 .0 5) ;plasma HBsAg免疫小鼠的脾淋巴细胞产生IFN γ和IL 2水平较低 ,但在免疫 2 5d对P815 HBs的杀伤性最强 ;HM HBsAg和SSC HBsAg免疫后CD4 CD8- 脾淋巴细胞比例显著增高 (P <0 .0 5) ;CD4- CD8 细胞所占百分比各组间及与空白对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　不同来源HBsAg诱导的细胞免疫反应类型和程度不同     

抗-HGV抗体酶联免疫试验法(EIA)与HGV PCR法检测结果比较

用抗－ＨＧＶ抗体酶联免疫试验法（ＥＩＡ）和ＨＧＶＲＴ－ｎＰＣＲ方法分别检测１００例正常献血员血清和４９例非甲～戊型肝炎患者血清。结果：在１００例健康献血员中,两法的符合率为９４％,但在４９例非甲～戊型肝炎患者中,两法的符合率仅为６３．３％。提示抗－ＨＧＶＥＩＡ法可用于献血员的筛查,但诊断ＨＧＶ感染应同时应用抗ＨＧＶＥＩＡ和ＨＧＶＲＮＡＲＴ－ｎＰＣＲ法。     

国产甲乙型肝炎联合疫苗的安全性和免疫原性初步研究

目的评价国产甲、乙肝联合疫苗的安全性和免疫原性。方法对278名健康儿童和312名健康成人接种国产甲、乙肝联合疫苗，并与单价甲肝灭活疫苗和乙肝灭活疫苗进行对照，观察其免疫后的副反应和检测抗体阳转率。结果接种国产甲、乙肝联合疫苗成人和儿童中均未观察到严重全身反应和局部反应。首针免疫后7个月，儿童组甲肝抗体和乙肝抗体阳转率分别达到100％和96．88％，GMT达到29144mIU／ml和102mlU／ml；成人组甲肝抗体和乙肝抗体阳转率也达到100％和98．84％，GMT达到21891mIU／ml和112mlU／ml。儿童和成人接种甲乙肝联合疫苗后，甲肝和乙肝抗体阳转率和GMT均高于单价疫苗。结论国产甲、乙型肝炎联合疫苗是安全的，并可诱导较高的甲肝抗体和乙肝抗体应答。     

一种新型重组(汉逊酵母)乙型肝炎疫苗人体安全性和免疫效果考核

为了观察一种新型重组 (汉逊酵母 )乙型肝炎 (乙肝 )疫苗的人体安全性、抗体应答和母婴传播阻断效果 ,在开封市筛选 6～ 9岁乙肝病毒 (HBV)感染指标 [乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)与抗体 (抗 HBs)、乙肝病毒核心抗体 (抗 HBc) ]均阴性的健康儿童 2 0名 ,按 0、1、6个月程序接种 1批重组 (汉逊酵母 )乙肝疫苗 ,观察不良反应。完成 3针免疫观察未见严重不良反应后 ,选择 348名 6～ 9岁HBV感染指标阴性儿童 ,随机分为 3组 ,每组接种 1批重组 (汉逊酵母 )乙肝疫苗 ,进一步观察不良反应和抗体应答。筛选 4 5名怀孕期间HBsAg、乙肝病毒e抗原 (HBeAg)双阳性母亲所生的新生儿作为研究对象 ,并以 4 1名怀孕期间HBsAg阴性母亲所生的新生儿和 5名母亲HBsAg阳性、HBeAg阴性的新生儿作为对照 ,按 0、1、6个月免疫程序接种该乙肝疫苗。结果显示 :所有接种的儿童和新生儿 ,免疫后无 1人发现有严重不良反应。 348名接种乙肝疫苗的儿童中 ,除 5人次发热反应在 38 1℃～ 38 5℃外 ,体温升高均≤ 38℃。所有发热反应者和个别头痛者均在 1d内恢复正常。儿童接种 3批疫苗 ,第 1针免疫后 7个月时抗体阳转率分别为 98 2 5 % ( 112 / 114 )、10 0 0 0 % ( 10 7/ 10 7)、99 2 1% ( 12 6 / 12 7) ;抗体几何平均滴度 (GMT)分别为35 1     

PCR检测儿童感染HIV的可靠性

作者用聚合酶链反应(PCR)方法对128例6天龄～11岁人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体阳性的儿童进行检测,并与HIV p24抗原检测、HIV分离培养和HIV抗体测定的方     

国产冻干甲型肝炎减毒活疫苗的安全性与免疫原性观察

为了解冻干甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗 (H2 株 )的安全性及免疫效果 ,2 0 0 0年 3月在广西蒙山县进行了人体免疫效果观察 ,结果报告如下。1 .材料与方法 :(1 )疫苗及使用方法 :冻干甲肝疫苗 (H2 株 )系浙江省医学科学院普康生物技术公司研制 ,批号G990 2 2 5 ,失效期2 0 0 0年 8月 2 5日 (2～ 8℃保存 ) ,滴度为 6.77logCCID50 ml。液体甲肝疫苗为同厂家生产 ,批号 991 2 0 1 ,- 2 0℃保存条件下失效期为 2 0 0 1年 1月 1 4日 ,2～ 8℃保存条件下为 2 0 0 0年6月 1 4日 ,滴度为 6 .50logCCID50 ml。冻干疫苗用无菌注射用水 1 .0ml…     

甲肝减毒活疫苗不同滴度的免疫效果评价

甲肝减毒活疫苗不同滴度的免疫效果评价方蕙，康来仪，潘启超，金子辰，郑晓虹，薛以乐，蒋清，张玮，张建民，程萍，沈菊华，万宗举预防和控制甲肝流行最有效的方法是接种甲肝疫苗。目前我国用于接种人体的甲肝减毒活疫苗的减毒株主要是Ｈ２和Ｌ－Ａ－１两株。从７０年代...     

用亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验检测HIV抗原

分离和定量测定人类免疫缺陷症病毒(HIV),需要有鉴定感染细胞中病毒或其蛋白或核酸的方法.目前常用的方法有逆转录酶测定、分子杂交或ELISA.这些方法都需要昂贵的设备和材料且费时.作者介绍了一种检测HIV抗原的新方法,称为亲和素-生物素改良的反向被动血凝试验(AB RPHA).它是把人O型Rh阴性红细胞经过处理后,用亲和素包被,然后与生物素化的HIV抗体结合,在1%胎牛血清生理盐水中制成2%悬液,-70℃冻存或加10%葡萄糖冻干.