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利用RT-PCR和Western-blotting技术分析了胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)、C17-20裂解酶(P450c17)、StAR mRNA和蛋白在成年昆明小白鼠心脏、脾、肝、肾中的表达.结果显示,StAR mRNA及其蛋白、P450scc mRNA在以上组织中均有表达;3β-HSD在肾中有较强的表达,在其他组织的表达较弱;P450c17在上述组织中无明显的表达,但在睾丸中有明显的表达.这表明,心脏、脾、肝、肾均具有合成类固醇的能力,但合成类固醇的类型存在一定的差异. 相似文献
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采用免疫组化SP法研究了雌激素受体在lO日龄雏鸡脑组织内的表达,着重观察了雌激素受体在小脑、中脑、下丘脑及端脑的分布。研究表明,雌激素受体主要存在于细胞核中,少数区域仅存于胞浆或胞膜。雌激素受体在脑内分布广泛。在小脑中部皮质的颗粒层、蒲肯野氏层,中脑的中央白质、外侧丘系腹侧核、视束、后连合等区域,雌激素受体免疫反应产物为高密度;在小脑前部皮质的颗粒层,中脑中央灰质、尾侧线形核,端脑副高纹状体等区域,雌激素受体免疫反应产物为中等密度;小脑前部皮质的蒲肯野氏细胞,下丘脑视上核,端脑原始旧纹状体等区域,雌激素受体免疫反应产物为低密度。结果揭示,在鸡脑早期发育过程中,雌激素起著广泛而重要的作用。 相似文献
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TGF-β调节仔猪睾丸支持细胞增殖的机制 总被引:1,自引:1,他引:0
旨在研究TGF-β对仔猪睾丸支持细胞增殖相关蛋白及基因表达的影响,进一步揭示TGF-β调控仔猪支持细胞增殖的作用机制。本研究用TGF-β及TGF-β/Smad通路抑制剂LY2109761处理培养的仔猪睾丸支持细胞,通过CCK-8与流式细胞术检测支持细胞活性和细胞周期,Western blotting检测Smad3的蛋白磷酸化水平,实时定量PCR(RT-qPCR)检测c-Myc mRNA、Skp2mRNA及ssc-miRNA-24的表达。此外,支持细胞转染ssc-miRNA-24模拟物、抑制剂后,用TGF-β处理支持细胞,检测相关基因和蛋白的表达。结果表明,TGF-β以剂量依赖方式影响支持细胞活性;180pg·mL-1 TGF-β以时间(0~24h)依赖方式影响细胞增殖指数(Proliferation index,PI)和S期细胞比例(S-phase cell fraction,SPF),抑制Smad3磷酸化,增加c-Myc mRNA、Skp2mRNA、ssc-miRNA-24的表达;10μmol·L-1 LY2109761促进TGF-β诱导支持细胞活性,并增加细胞增殖指数和S期细胞比例。ssc-miRNA-24模拟物抑制Smad3磷酸化,促进c-Myc、Skp2 mRNA表达;ssc-miRNA-24抑制剂则具有相反的效果。综上表明,在仔猪睾丸支持细胞中,TGF-β可通过增加ssc-miRNA-24的表达,抑制Smad3磷酸化,增强c-Myc与Skp2mRNA的表达,促进支持细胞增殖。 相似文献
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为阐明活性氧(ROS)对睾丸支持细胞(SC)的影响,并深入探讨精子发生调节机制,通过体外培养的仔猪睾丸支持细胞研究ROS对SC中微丝结构的影响.利用H2O2模拟细胞内的ROS环境,使用细胞松弛素B(CytB)破坏细胞中的微丝并利用维生素E(VE)抑制细胞内的ROS,通过细胞活性检测、免疫荧光、酶活检测、免疫印迹等方法检测ROS对睾丸支持细胞微丝的影响.结果表明,H2O2和细胞松弛素B均能提高SC内ROS的水平和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性,降低抗氧化酶的活性,破坏细胞内微丝的结构和分布,二者具有协同作用,VE能降低ROS对SC的作用.上述证明,H2O2通过不依赖于微丝途径和降低细胞内抗氧化能力使细胞内ROS处于较高水平,并通过ERK级联,使细胞中微丝发生多聚化,破坏微丝的结构. 相似文献
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白细胞介素-1α调节仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的机制 总被引:3,自引:1,他引:2
本实验利用体外培养的2~3周龄仔猪睾丸间质细胞,研究了IL1α调节间质细胞睾酮分泌的机制。结果表明,IL1α能抑制hCG刺激间质细胞分泌睾酮,其睾酮产生量随IL1α剂量增大(0~100μ/ml)及刺激时间延长(0~48h)而下降。用20μ/ml和50μ/ml的IL1α刺激48h,可分别抑制60%和65%的睾酮产生。IL1α同样抑制cAMP(3μmol/ml)诱导的间质细胞睾酮的分泌,但不影响hCG与间质细胞膜受体的结合量及hCG诱导的第二信使cAMP的增加。说明IL1α抑制hCG促睾酮分泌的作用,其抑制点不在hCG与受体的结合及第二信使cAMP的聚集上,而在cAMP产生之后的某个环节。 相似文献
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通过免疫荧光获得雌激素α、β受体在体外星形胶质细胞(Acrocyte,AC)中表达的形态学证据;CCK-8法获得脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)激发AC的适宜浓度。在此基础上,研究了17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对AC的细胞活性、细胞周期和超微结构的影响。结果显示:E2作用AC 48h,10nmol/L E2可提高AC细胞活性和G2+S%(P〈0.05),而100,1 000nmol/L E2可降低AC细胞活性(P〈0.05),100nmol/L E2还可降低G2+S%(P〈0.05);100nmol/L E2作用AC 24,48,72h,均可降低AC细胞活性和G2+S%,以作用48h时抑制作用最强(P〈0.05);10nmol/L E2可引起AC线粒体数量增加,细胞核分裂增多,但线粒体、粗面内质网结构正常,而100nmol/L E2可导致AC线粒体肿胀或空泡化,粗面内质网扩张或断裂。结果表明,低浓度(10nmol/L)E2促进AC增殖;高浓度(100,1 000nmol/L)E2抑制AC增殖。 相似文献
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不同时期小鼠睾丸合成睾酮能力的差异 总被引:2,自引:0,他引:2
不同发育阶段,睾丸合成睾酮的能力差异很大。为了阐明引起睾酮合成差异的分子机制,实验以不同年龄的SPF昆白小鼠,采用RT-PCR与Western blot分析了不同年龄阶段类固醇合成酶的变化。结果显示:(1)在不同年龄阶段,P450scc(胆固醇支链裂解酶)mRNA、3β-HSD(3β-羟胆固醇脱氢酶)mRNA、StAR(类固醇合成快速调节蛋白)mRNA和蛋白的水平无明显变化;(2)P450c17(C17-20裂解酶)mRNA的表达水平在30、60和120d均处于较高的水平,但是在270d则处于较低的水平;(3)30~270d,细胞外信号调节激酶(ERK)活性无明显变化。表明,P450c17 mRNA表达差异可能导致不同时期睾酮合成能力差异的重要原因,但ERK活性可能与衰老引起睾酮合成能力下降无直接关系。 相似文献
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采用免疫组化(immunohistochemistry)和半定量RT-PCR法研究了胶质细胞源性神经营养因子(Glial cellline-derivedneurotrophic factor,GDNF)在生后仔猪睾丸中的表达,探讨了GDNF在睾丸发育和精子发生中的作用.实验结果发现,在幼龄阶段(2~4周龄),GDNF蛋白主要表达于间质细胞区,而在曲细精管内未见表达.从第2月龄开始,GDNF蛋白在曲细精管内的支持细胞胞浆出现阳性信号,呈较低水平表达.随着年龄的进一步增长,GDNF在睾丸曲细精管内的表达不断增强,到成年时GDNF蛋白表达水平达最高.RT-PCR结果显示,仔猪出生后2周,睾丸中即存在GDNFmRNA的表达,随着年龄的增加,GDNFmRNA水平持续升高,到2月龄和6、18月龄分别与出生2周时有显著性(P<0.05)和极显著性(P<0.01)差异,其中第6月龄达高峰.实验结果表明GDNF可能直接参与了出生后仔猪睾丸的发育,并在调节精子发生中起着重要的作用. 相似文献