钙离子水平对猪卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育的影响

维持细胞内钙离子(Ca²⁺)稳态对维护卵母细胞成熟及植入前胚胎正常发育至关重要。本实验旨在研究Ca²⁺水平变化对猪卵母细胞体外成熟发育的影响。收集的猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)，随机分为3组，即对照组、100 nmol/L毒胡萝卜素(TG)组和100 nmol/L TG+300 nmol/L光溜海绵素C(XeC)组，体外培养，分别统计卵丘扩散情况、体外成熟率、胞内Ca²⁺水平，随后进行孤雌激活(PA)统计各组卵裂率、囊胚率及细胞总数。结果表明：添加XeC可显著改善由TG引起的猪卵丘细胞扩散不完全，卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚率降低，以及细胞数减少等现象，并显著降低由TG诱导的胞内Ca²⁺水平。综上，胞内Ca²⁺水平对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育具有重要的调控作用。     

甘氨酸对猪卵母细胞体外成熟质量及卵丘细胞的影响

本实验旨在研究甘氨酸对卵丘细胞及卵母细胞体外成熟质量的影响,优化猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养体系。在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加6 mmol/L甘氨酸,体外培养至44 h后,通过倒置显微镜测量卵丘细胞扩散直径,结合流式细胞术与qPCR检测卵丘细胞凋亡情况;进一步检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)、细胞成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平及细胞成熟相关基因表达。结果表明:甘氨酸能显著提高卵丘细胞扩散直径,减少卵丘细胞的总凋亡率,并能显著提高卵丘细胞中Bcl-2的mRNA表达;甘氨酸能显著增加成熟卵母细胞中的GSH、MPF和MAPK水平以及成熟相关基因BMP15、GDF9、CyclinB1、CDK1、C-MOS的mRNA表达。综上可知,甘氨酸可提高猪卵母细胞体外成熟质量,降低卵丘细胞凋亡率。     

肠道菌群失调小鼠肠道组织学观察

为探明动物机体肠道菌群失调的病理组织变化以及抗生素类药品对动物肠道菌群的影响,本次实验选用昆明小鼠作为实验材料,将40只实验小鼠随机分成五组,分别灌服蒸馏水、头孢氨苄片、氨苄西林胶囊、琥乙红霉素片、罗红霉素,每次每只灌服0.5 m L药品,1次/d,连续给药一周,制备出相应的五组菌群失调小鼠的动物模型。采用脱颈椎方法处死小鼠,取其十二指肠组织,经透明、包埋等操作制备出石蜡组织切片,镜检。得出以下结论:灌服头孢氨苄片破坏较轻,灌服氨苄西林胶囊、琥乙红霉素破坏较为严重,灌服罗红霉素破坏最为严重。     

复方中药加味四物汤对LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响

目的:研究复方中药加味四物汤的抗炎效果。方法:选择小鼠RAW264.7细胞为模型细胞,采用噻唑蓝法(MTT法)检测加味四物汤(mSWD)对该细胞的细胞毒性。用脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7细胞,使其活化,建立体外炎症模型,并通过ELISA和RT-PCR方法检测加味四物汤在50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL不同浓度时对体外炎症模型分泌TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的影响。结果:加味四物汤浓度在0～320μg/mL范围内对小鼠RAW264.7细胞无毒副作用;浓度为50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL时对炎症模型分泌细胞因子TNF-α和IL-6有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;而浓度为200μg/mL时,对IL-1β分泌有抑制作用。结论:LPS诱导小鼠RAW264.7细胞能使TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白含量和mRNA表达量增加,加味四物汤可抑制该生物反应,发挥间接抗炎作用。     

SETD2在猪卵母细胞体外成熟中的作用

SETD2是H3K36me3特异性甲基转移酶，参与组蛋白甲基化修饰，并通过调节多种基因的表达影响细胞功能。为探究SETD2在猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中的表达规律及作用，通过免疫荧光染色检测SETD2及H3K36me3在猪卵母细胞IVM过程中各个时期（GV、MⅠ、MⅡ期）的表达定位情况；在GV期显微注射SETD2干扰RNA(SETD2-siRNA)构建干扰模型，检测干扰后对SETD2、H3K36me3、DNA双链断裂标志物（γH2AX）以及第一极体（PBI）排出率的影响；通过qPCR技术检测干扰后对DNA甲基化转移酶DNMT3B、凋亡和抗凋亡相关基因BAX、BCL2表达的影响。结果表明：SETD2信号GV期聚集在DNA周围，MⅠ和MⅡ期均在细胞质中表达，而H3K36me3在整个减数分裂过程中均与核共定位；进一步研究发现，SETD2-siRNA干扰后显著降低了SETD2和H3K36me3表达水平，增加了γH2AX表达（P<0.05），同时显著降低PBI排出率（P<0.05）;qPCR结果显示，SETD2-siRNA干扰后DNMT3...