重组人TGF-β1在NIH/3T3细胞系中的表达及鉴定

选择腊质休法将人转化生长因子（ＴＧＦ-β１）基因转移至ＮＩＨ／３Ｔ３中，经Ｇ４１８（４５０ｕｇ／ｍｌ）筛选，随机挑选出１３个表达克隆；其培养上清经体外斌活（加热或酸化）处理，用水貂肺上皮细胞株ＣＣＬ－６４生长抑制法测定ＴＧＦ。用活性，证明绝大多数表达克隆的ＴＣＦ－β１表达量均超过了１００ｎｇ／ｍｌ．４８ｈ，最高克隆表达量为１５６ｎｇ／ｍｌ·４８ｈ。选择高表达克隆经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，证实外源人ＴＧＦ－β１基因稳定重组人ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中，有ｍＲＮＡ表达。ＰＣ…     

人转化生长因子β1在COS-7细胞中的表达

转化生长因子β1(TGFβ1)是一种多功能的细胞生长因子,它几乎参与了体内所有的病理和生理过程,同时还在创伤愈合、肿瘤抑制、免疫调节、神经营养等多方面具有广泛的应用前景。TGFβ1的研究具有十分重要的理论和应用意义。我们在完成了对TGFβ1cDNA的克隆和鉴定之后,对其在哺乳动物细胞COS-7中的表达做了进一步的研究。     

转化生长因子(TGF-β1)mRNA在放射性间质性肺炎中的表达

为探讨ＴＧＦ－β１在放射性间质性肺炎中的意义和作用，揭示其发病机理。方法雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４８只分对照和照射组用６０Ｃｏγ射线照射，吸收剂量３０Ｇｙ，于照后不同时间活杀，取肺组织做常规病理观察和原位杂交。结果照射组大鼠肺组织ＴＧＦ－β１和正常对照组比较表达增高，且以照射后３～６个月（纤维增生期）显著。结论ＴＧＦ－β１可能参与了放射性间质性肺炎的发生发展     

TGFβ_1及TGFβ_1 mRNA在病毒性肝炎肝组织中的表达

为了解慢性病毒性肝炎肝组织中转化生长因子β_1(TGFβ_1)及TGFβ_1mRNA的表达情况及其与肝脏病理改变的关系,本文用免疫组织化学法检测了45例慢性病毒性肝炎患者肝脏TGFβ_1表达,并做其中21例TGFβ_1mRNA原位杂交。结果TGFβ_1肝组织表达阳性率为88.89％,主要为间质细胞、汇管区及纤维化发生活跃部位阳性,且随肝纤维化程度加重而表达增强(r=0.73,P<0.05);TGFβ_1mRNA表达阳性率为57.14％,不仅定位于单核细胞、窦细胞,某些肝细胞也有表达。结果表明TGFβ_1与肝纤维化密切相关,不仅间质细胞能够产生TGFβ_1促进肝纤维化,肝细胞本身可能也参与TGFβ_1分泌环路,在肝纤维化发病机制中起一定作用。     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的　观察TGFβ1正、反义基因转染6 0 Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法　采用脂质体介导法进行基因稳定转染 ,转染细胞经PCR ,DNAdotblot鉴定和RNAdotblot分析。结果　选择 5Gy照射细胞 ,采用LipofectAMINE将TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo TGFβ1和pMAMneo AntiTGFβ1转入HELF ,转染细胞经G418抗性筛选出来 ,并且在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA ,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性 ,且可用neo基因特异的PCR引物扩增出 2 76bp的阳性片段。对提取的RNA用地高辛标记的TGFβ1探针和α1(Ⅰ )寡核苷酸探针经RNAdotblot分析表明 ,转染pMAMneo AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平下降 ,而转染pMAMneo TGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA ,前者表达水平比未转染细胞低 ,后者则略高。 结论　TGFβ1反义基因转染6 0 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1mRNA含量水平减少 ,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低     

纤维连接蛋白模拟多肽改进碳磷酸钙骨水泥反应性的体外研究

目的:寻找改进羟基磷灰石类骨修复材料生物活性的方法.方法:用固相法合成了多肽P19和P18,测定了P19与羟基磷灰石的结合特性,测定了P19对于成骨细胞附着的影响以及在P18与P19存在的条件下,成骨细胞的增殖特性,并用扫描电镜观察了附着在碳磷酸钙骨水泥(calcium carbonated phosphate cement,CPCC)材料表面的成骨细胞形态,并用DNA测量法测定了细胞在材料表面增殖特性.结果:P19铺板后能增强P18促进细胞增殖的作用.多肽分子P19对于成骨细胞的作用与纤维连接蛋白类似,多肽和CPCC结合后仍然保持其各自的生物活性,吸附在材料表面的P19能够促进成骨细胞在材料表面的附着,经过P19多肽修饰的CPCC表面能够明显增加成骨细胞吸附的数量,并能够促进成骨细胞的增殖.P18和P19之间存在一定的协同作用.结论:合成的P19融合肽可以作为HA类骨损伤修复材料的生物活性添加成分以及种植体涂层的修饰,这一方法和技术在HA骨修复材料的改进以及种植体涂层修饰方面有着潜在的临床应用前景.     

细胞因子及其受体在放射性肺纤维化发生中的分子病理机理研究

目的 调查几种细胞因子及其受体在放射性肺纤维化（ＲＰＦ）发生中的作用。方法 采用免疫组织化学、细胞免疫化学和原位杂交的方法对ＲＰＦ大鼠肺组织细胞进行了研究。结果 正常大鼠肺组织有ＴＧＦβ１和ＴＧＦβＲ的弱表达,照射动物肺脏ＴＧＦβ１的表达于照射后２周开始增高,从第８周直到３月表达水平最高,肺脏表达ＴＧＦβ１的部位主要是支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、支气管和血管平滑肌细胞以及成纤维细胞等,ＴＧＦβ２的表达变化规律除了比ＴＧＦβ１稍弱外类似于ＴＧＦβ１。ＴＧＦβＲ表达增强的时间比ＴＧＦβ１稍晚,于第８周开始增强,直到１年也保持较高水平的表达,ｂＦＧＦ和ＰＤＧＦ在照射后２～３个月表达水平明显增高。对支气管肺泡灌洗液中的细胞ＴＧＦβ１免疫细胞化学研究表明：其中的细胞,特别是巨噬细胞表达时间的出现得较早,于     

人转化生长因子β1基因非翻译区的改造及其全长序列测定

通过ＰＣＲ和体外重组技术对ＴＧＦβ１基因５＇和３＇非翻译区进行了改造，在此基础上，通过构建缺失突变体，采用双脱氧终止法，利用ｐＵＣ／Ｍ１３系统测定了人ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ的全长序列。这为今后研究不同长度非翻译区对ＴＧＦβｃＤＮＡ表达水平的影响并实施其高效表达奠定了基础。     

重组人可溶性CD14在昆虫细胞中的表达

细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）即内毒素是革兰阴性菌表面的主要成分之一，它所导致的多脏器损伤和败血症休克的死亡率很高，临床上尚无有效的治疗方法。ＣＤ１４作为ＬＰＳ膜表面结合蛋白，在介导ＬＰＳ信号传递中起着非常重要的作用，但是...