新生儿疾病筛查人群中CYP21基因P30L和V281L突变携带者频率的研究

目的研究新生儿疾病筛查人群中CYP21基因P30L和V281L突变杂合子的频率分布。方法58份新生儿干血滤纸片测定17-OHP,同时提取新生儿脐带血DNA,应用PCR扩增和限制性内切酶分析P30L和V281L两种与21-OHD相关的CYP21基因突变,计算杂合子频率。结果在116个等位基因中有1个鉴定出P30L突变,未鉴定出V281L突变。本研究人群中P30L的携带者频率为0.9%,V281L的携带者频率为0。结论本研究新生儿筛查正常人群中可检出CYP21基因突变携带者,对人群中CYP21基因突变携带者的研究有助于对漏检21-OHD的基因突变分析。     

乙型肝炎患者体内病毒复制水平的试验观察

目的探讨乙肝病毒感染者体内血清标志物与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV—DNA）和转氨酶的相互关系及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HBV血清标志物，采用实时荧光定量PCR方法检测HBV—DNA，采用速率法测定血清内的转氨酶。结果随着病毒复制水平的增加，“大三阳”的检出率具有逐渐增加的趋势，而“小三阳”的检出率具有逐渐减少的趋势；“大三阳”与患者体内血清转氨酶异常检出率显著高于“小三阳”；在“小三阳”中，当HBV—DNA大于10^5时，转氨酶异常者的检出率显著增加，而“大三阳”中没有观察到该结果。结论“大、小三阳”可作为HBV复制和疾病进展评估的参考指标。     

ELISA在出入境人员梅毒检测中的应用分析

目的分析ELISA在出入境人员梅毒检测中的应用价值。方法对出入境人员1847份标本采用TRUST和ELISA同步盲法进行检测,TRUST或ELISA阳性者进行TPPA检测;对TRUST阴性,ELISA阳性受检者进行跟踪复检和流行病学调查。结果1847份标本中,TRUST检测28份阳性,ELISA检测57份阳性,TPPA复检ELISA检测57份阳性者均为阳性。对31份TRUST阴性,ELISA和TPPA阳性标本受检者1～2月后进行TRUST复查。全部仍为阴性。结论ELISA与TPPA检测结果具有很好的一致性,对出入境口岸梅毒监测具有很好的应用价值;推荐采用ELISA做初筛试验,阳性结果以TRUsT试验复核的出入境人员梅毒血清学检测程程序。     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的 优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法.方法 根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针.通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法.结果 该方法敏感度高,特异性强,重复性好.应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4 h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验.结论 本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断.     

登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法,测定登革热病毒（DV）及DV病毒的RNA拷贝数。方法利用TaqMan探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,通过对登革热病毒RNA定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果该方法检测灵敏度可达1×103copies/mL,特异性及重复性良好,对同一样品进行5次重复检测,其循环阈值的平均标准偏差为0.792。结论TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定登革热病毒及DVRNA载量。     

梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用

目的表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法。方法以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用Ni2+亲和柱纯化目的蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法。结果构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达。采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性。结论实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法。     

甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

目的优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法。方法根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针。通过改进反应条件与参数．优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法。结果该方法敏感度高,特异性强,重复性好。应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验。结论本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断。     

深圳国际旅行人员HIV-1基因型分析

目的监测深圳口岸国际旅行人员中HIV感染者HIV-1亚型的流行状况。方法从69份HIV-1抗体阳性血浆中提取病毒总RNA,通过逆转录和巢式PCR技术扩增HIV—1 gag和p02基因,再对PCR产物进行核苷酸序列测定,并对所获得的序列进行分析来确定基因亚型。结果69份样品中共发现9种HIV-1亚型和重组亚型,其中CRF01-AE重组亚型28份,B亚型21份,CRF02_AG重组亚型4份,C亚型4份,G亚型3份,CRF07_BC重组亚型3份,CRF08_BC重组亚型3份,A1亚型2份,D亚型1份。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的19个不同国家。结论深圳国际旅行人员中HIV-1亚型和重组亚型种类复杂多样,监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布情况,对及时发现新型毒株,预防和控制艾滋病十分重要。     

2008年深圳口岸外籍人员血清登革病毒抗体水平监测结果分析

〔目的〕了解深圳口岸外籍人员中登革病毒（Dengue Virus,DV）感染状况,为我国口岸登革热防控措施提供依据。〔方法〕用酶联免疫吸附试验（ELISA）对2008年8—9月入境体检的外籍人员进行血清DV IgM、IgG抗体检测,ELISA可疑结果采用登革热IgG/IgM联合快速检测卡进行复检以最终判定结果。〔结果〕共对440名外籍人员进行了血清DVIgM、IgG抗体检测,IgM抗体阳性率为2.27%（10/440）,IgG抗体阳性率为1.14%（5/440）。未检出IgM、IgG抗体均阳性者。东南亚地区人员的DV IgM、IgG抗体阳性率分别为7.59%（6/79）和3.80%（3/79）;拉丁美洲人员的DV IgM和IgG抗体阳性率均为6.67%（1/15）;北美地区人员的DV IgM抗体阳性率为0.99%（1/101）且未检出DV IgG抗体阳性者;欧洲地区人员的DVIgG抗体阳性率为1.59%（1/63）且未检出DVIgM抗体阳性者;非洲和大洋洲人员均未检测出DV抗体阳性者。〔结论〕与其他地区相比,东南亚和拉丁美洲入境人员携带DV的可能性较大。随着全球人口流动的日益频繁,应进一步加大对口岸传染病的防控力度。