胃癌和胃癌前病变Cx43、PCNA的表达及意义

目的　通过观察间隙连接蛋白 Cx4 3和增殖细胞核抗原 (PCNA )在正常胃粘膜、胃癌前病变和胃癌中的表达和分布情况 ,探讨 Cx基因表达与胃癌发生的关系。　方法　运用 SP免疫组织化学方法检测 Cx4 3、PCNA在 70例原发性胃癌 ,6 2例中、重度不典型增生和 16例正常胃粘膜中表达规律。　结果　 Cx4 3在正常胃粘膜 ,中、重度不典型增生和胃癌中表达的阳性率分别为 10 0 % ,83.9%和 17.1% ,三者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 Cx4 3表达与胃癌的分化程度相关 (P<0 .0 1)。胃癌前病变、胃癌组中的 PCNA较正常胃粘膜组增高 (P<0 .0 1)。 Cx4 3表达与 PCNA呈负相关 (P<0 .0 1)。　结论　 Cx4 3表达降低在胃癌发生发展中起重要作用 ,Cx4 3可做为胃癌早期诊断的指标     

肌线粒体NADH—TR酶组化染色及其在神经肌病病理诊断中的意义

应用改良的还原型辅酶Ｉ四唑氮还原酶（ＮＡＤＨ－ＴＲ）氧化酶化染色方法，对４００例经常规ＨＴ，ＭＧＴ以及ＡＴＰ酶和透射电镜确诊的神经肌肉疾病肌组织的恒冷冻连续切片进行组化染色，结果显示该染色对发现肌纤维内部结构变化，区别Ｉ，Ⅱａ，Ⅱｂ型肌纤维、成群肌萎缩以及同型肌群化，鉴别神经原性肌肉疾病和肌原性肌肉病及其分型具有重要价值。     

肌球蛋白三磷酸腺苷酶的染色技术

肌球蛋白三磷酸腺苷酶(mlyosin ATPase)定位于骨骼肌，ATP酶染色是鉴别肌纤维类型及分布的最理想的应酶，对神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩的诊断有重要的价值。目前要用钙激活法，该方法较为轻典，但其染色效果受多种因素影响；没有一定的经验，每次实验并不一定都能成功。笔者经过多年的实践与摸索，获得较为稳定且满意的结果，现介绍如下。     

人肝病变组织低分子量角蛋白CK19的表达

目的 研究低分子量角蛋白CK19在人肝细胞癌、肝癌前病变、肝硬化组织中的表达状况及意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测56例细胞癌、8例肝硬化及9例正常肝组织中CK19的表达。结果 56例肝癌旁不典型增生组中异型增生细胞及卵圆细胞的CK19表达率（51.9%)显著高于癌旁非不典型组中肝细胞的表达率（17.2%),但与肝癌组织的表达率差别不大。肝硬化组中CK19的表达率为37.5(3/8)阳性细胞均为卵圆细胞及异型增生细胞,结论 肝细胞癌和增生的卵圆细胞及异型增生肝细胞表达CK19,提示CK19可做为判断肝细胞异型增生的一个指标,肝细胞癌CK19表达与其组织学类型有密切关系。     

SRC-1基因在小鼠神经干细胞分化过程中的变化

目的观察类固醇受体辅助活化因子-1(SRC-1)基因在小鼠神经干细胞(NSCs)体外培养分化过程中表达的变化。方法用机械分离和酶消化法从1~3 d小鼠大脑皮质获取NSCs原代细胞,体外培养获神经球,传代并消化,经血清诱导神经球细胞分化。形态学、细胞免疫荧光实验观察神经球形态、Nestin表达鉴定NSCs;抗体分别标记神经元、星形胶质细胞,检测细胞分化d 3、9的细胞类型。RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞分化d 0、3、9 SRC-1基因mRNA和蛋白的表达。结果新生小鼠大脑皮质获取的细胞,体外培养能扩增形成神经球,Nestin阳性表达。NSCs分化d 3主要为神经元,d 9主要为星形胶质细胞。与NSCs分化d 0相比,SRC-1表达在分化d 3明显升高,在分化d 9明显降低。 结论 成功分离并获取新生小鼠皮质NSCs。在NSCs分化中,SRC-1表达量有明显变化,分布依次为神经元>NSCs>星形胶质细胞。     

p~（53）、C－erb B_2和ras癌基因蛋白产物在骨巨细胞瘤中的表达

目的探讨ｐ~（５３）、Ｃ－ｅｒｂＢ_２和ｒａｓ癌基因蛋白产物在骨巨细胞瘤中的表达状况，了解该肿瘤的发病机制。方法应用免疫组化ＳＰ方法对５０例骨巨细胞瘤进行ｐ~（５３）、Ｃ－ｅｒｂＢ_２和ｐ~（２１）检测。结果５０例骨巨细胞瘤均不表达ｐ~（５３）和Ｃ－ｅｒｂＢ_２；ｒａｓ癌基因蛋白产物ｐ~（２１）仅在部分骨巨细胞瘤病例中表达，阳性率为２６％（１３／５０）。结论骨巨细胞瘤的发生可能与ｒａｓ癌基因的活化有关。     

28例共同性斜视眼肌的病理学改变

通过对２８例斜视病变眼外肌的病理学的研究,了解其发病机理及手术时机。方法在手术过程中将病变眼肌缩短纠正眼位的同时,取切下的斜视病变眼肌行病理常规检查。结果斜视眼肌肌外衣结缔组织明显增,炎症细胞侵润,同时发现肌组织萎缩,排列较紊乱,部分眼肌仅见成熟的胶原纤维组织。     

结肠癌及结肠腺瘤细胞核形态计量指标的逐步判别分析

目的 检测结肠上皮异型增生的形态计量指标，探讨其在诊断学中的应用。方法 应用图像分析技术对５３例例结肠癌、３０例结肠腺瘤及１０例正常肠粘膜进行细胞核８项参数的测定。结果 多数九在各组间差异具有显著性（Ｐ〈０．０１），其中核面积、核最大宽径、平均光密度是判别结肠癌变的最佳数，由此建立的判别函数回代符合率达８２．９５％。结论 应用图像分析技术对结肠癌前病变及癌病变进行形态计量分析，可作为鉴别诊断中的重     

APE1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建APE1基因慢病毒载体,为其后续的体内外实验研究提供基础。方法应用基因工程技术,筛选出两条针对APE1基因的RNAi靶序列KD1、KD2,分别与pGCIL-GFP载体连接,经转化筛选鉴定后,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,分别命名为LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2,两种病毒颗粒分别感染MHCC97-H细胞,设为感染LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2细胞组,同时设未感染病毒组和感染空载体细胞组。Real-time PCR和Western blot检测MHCC97-H细胞中APE1基因的mRNA和蛋白的表达。结果 PCR及测序结果与预期结果一致,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2的病毒滴度为4×10^8TU/mL和7×10^8TU/mL。与未感染病毒组和感染空载体细胞组相比,2组慢病毒组APE1基因mRNA和蛋白的表达均明显下降,LV-APE1-shRNA1、LV-APE1-shRNA2对APE1基因的mRNA表达的抑制率分别为75%,90%,对APE1蛋白表达的抑制率达90%,95%。结论成功构建高效阻断APE1基因表达的RNAi慢病毒表达载体,为应用RNAi进一步研究APE1基因在肝癌中的作用机制和基因治疗奠定基础。     

还原型辅酶I四唑氮还原酶的染色方法

还原型辅酶 四唑氮还原酶 (NADH- TR)染色技术是区分 、 型肌纤维结构的重要方法 ,是神经肌病诊断的主要指标之一。该染色方法简便 ,但如果没有把握好一些细节问题 ,将影响染色效果。现将体会介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　肌病患者的肱二头肌或股四头肌活检组织 ,OCT包埋 ,经液氮预冷的异戊烷速冻 ,用 CM30 0 0型恒冷切片机 (德国莱卡公司 )在 - 2 2℃下切片 ,厚度为 4 μm,于- 2 0℃保存。1.2　孵育液的配制　 (1) 0 .2 mol/ L Tris- HCl缓冲液 (p H7.4± 0 .1) 10 ml;加氯化硝基四唑氮 (NBT) 10 m g,电炉加热并搅拌 ,加热…