免疫学教学中难点的处理

<正>随着细胞生物学、分子生物学和遗传学的发展及渗透,免疫学飞速发展并成为一门独立的学科.同时它又渗透到许多基础和临床医学领域,形成了众多的边缘学科如免疫病理学、肿瘤免疫学、移植免疫学、免疫药理学等.免疫研究的深入揭示了许多过去无法解释的临床病理机理.免疫制品、免疫技术为临床治疗和其他学科的研究提供了手段和帮助.例如牛痘疫苗的应用使天花病毒灭绝于地球;生物导航治疗开辟了肿瘤治疗的全新领域.由于免疫学的发展快速,新版免疫学教材中存在一些错误的数据和概念,可通过查阅国内外新资料给予纠正,在此不做探讨.正象Jerne提出的著名免疫     

抗hDR5单抗对食管癌细胞的凋亡及CDC作用观察

目的：观察抗hDR5单抗对食管癌细胞的凋亡作用及CDC作用。方法：采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用MTT法及显微摄影观察McAb及补体作用后EC109的增殖及形态变化,流式细胞仪观察细胞凋亡。结果：获得了单克隆抗体,其对EC109的凋亡诱导作用呈剂量依赖性;与对照组比较,补体可显著提高单抗对EC109的细胞毒作用,二者联用其细胞生长抑制率可达83.04%,形态学观察可见凋亡小体及细胞溶解;结论：DR5单抗具有诱导EC109细胞凋亡的作用,与补体联合应用具有较强的CDC效应。     

抗人DR5单抗-阿霉素交联物的制备及其细胞毒作用

目的：介绍抗人DR5单抗YM366EC-阿霉素结合物的制备及其细胞毒作用,以探讨YM366EC作为内源性导向载体的可能性。方法：采用氧化葡聚糖（Dex）T-40作为中介载体,联结抗人DR5YM366EC与阿霉素（ADR）制备交联物366EC-Dex-ADR,交联物中ADR与366EC的克分子比为71：1。经ELISA测定交联物的抗体活性大部分保持。MTT法体外测定其细胞毒性。结果：交联物对表达DR5受体的肿瘤细胞处理24小时的IC50是游离ADM的5倍,并且和肿瘤细胞DR5受体表达相关。结论：YM366EC具有良好的导向作用,结合物对肿瘤细胞有选择性杀伤作用。     

抗DR5抗体对食管鳞癌的细胞毒作用及机制

目的：探讨抗人DR5功能性单克隆抗体mDRA-6对食管鳞癌EC9706和109细胞的细胞毒作用及其作用机制。方法：利用MTT法检测mAb mDRA-6对食管癌细胞的细胞毒作用;在显微镜下观察食管癌细胞死亡的形态变化;以琼脂糖凝胶电泳检测食管癌细胞中的DNA片段化。利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡率和线粒体膜电位;利用caspase抑制剂分析mAb mDRA-6的细胞毒作用机制。结果：mAb mDRA-6对食管鳞癌细胞有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性,但对食管上皮细胞NEC细胞没有毒性。经mAb mDRA-6处理,食管鳞癌细胞出现典型的细胞凋亡特征：细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体以及DNA片段化等。流式细胞术检测结果显示,食管癌细胞表面表达DR5,而食管上皮细胞NEC细胞不表达;经1.2μg/ml的mAb mDRA-6作用24小时后,大多数食管鳞癌EC9706和109细胞的表面均表达磷脂酰丝氨酸。Caspase 8的抑制剂几乎完全抑制mAb mDRA-6诱导的细胞凋亡,Caspase 9抑制剂的则影响小。此外,在mAb mDRA-6诱导的食管癌细胞凋亡的早期,线粒体膜电位不改变,在凋亡的晚期,线粒体膜电位降低。结论：mAb mDRA-6主要通过死亡受体信号传导途径诱导细胞凋亡,对食管鳞癌细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。     

抗人DR5抗体mDRA- 6细胞毒作用机制分析

目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb)mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用及其机制。方法:以流式细胞术测定mAbmDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用,以及caspase8、9的抑制剂对mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡的影响。在荧光显微镜下,观察mAbmDRA-6对Jurkat细胞形态的影响。以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中的DNA片段化。结果:mAbmDRA-6对Jurkat细胞具有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体等。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并可导致Jurkat细胞中的DNA片段化。caspase8的抑制剂可明显抑制mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡,caspase9的抑制剂的影响很小。结论:mAbmDRA-6可通过死亡受体信号传导途径诱导Jurakt细胞凋亡,对Jurkat细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。     

两种方法制备的旋毛虫ES抗原对小鼠免疫保护作用研究

旋毛虫病流行于世界各地,是一种危害严重的人兽共患病.旋毛虫的抗原可分为虫体抗原、表面抗原、杆细胞颗粒相关抗原以及排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen,简称ES抗原).ES抗原是旋毛虫的代谢分泌产物,与宿主免疫系统直接接触,具有较强的免疫原性[1].ES抗原也可用于人旋毛虫病的诊断[2].     

免疫胶体金渗滤斑点试验对抗精子抗体的检测

目的 :建立一种快速鉴定抗精子抗体的新方法。方法 :用化学试剂提纯精子抗原 ,将其结合于硝酸纤维素膜上 ;以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立检测人血清抗精子抗体的免疫胶体金渗滤斑点试验。结果 :抗原抗体通过渗滤在膜上反应 ,10min肉眼即可观察到结果 ,10 0例临床血清标本的检测结果 ,本法与ELISA法基本相符。结论 :免疫胶体金渗滤斑点试验可快速测定抗精子抗体 ,具有推广使用的价值     

宫颈糜烂与解脲支原体感染相关性的分析

目的 :探讨解脲支原体感染与宫颈糜烂的关系。方法 :将进行解脲支原体检测的 2 5 6例女性不孕症患者分宫颈糜烂组和宫颈光滑组 ,进行对照分析 ,统计学采用x2 检验。结果 :宫颈光滑组 132例 ,解脲支原体阳性 35例 ,阳性率 36 .4% ,宫颈糜烂组 12 4例 ,解脲支脲体阳性 6 5例 ,阳性率 5 2 .4% ,二者相比差异非常显著 (x2 =9.0 1,P <0 .0 1)。结论 :解脲支原体与宫颈糜烂关系密切 ,是引起宫颈糜烂的主要病原之一。     

解脲支原体检测试剂盒的研制

研制出一种快速、敏感、准确检测解脲支原体试剂盒。方法：筛选出促进解脲支原体生长的促 生长因子,替代新生牛血清。选用多种有效抑菌剂以省去固体培养基鉴定的步骤,并与Ｈａｙｆｌｉｃｋ培养基及无血培 养基进行对比研究。结果：７２小时自制试剂盒与Ｈａｙｆｌｉｃｋ培养基的检出符合率达９８．１％, １６小时内检出率自制 试剂盒、Ｈａｙｆｌｉｃｋ培养基、无血解脲支原体培养基分别为５２．６％、２７．６％、１６．３％,前者明显优于后两种培养基。结 论：自制解脲支原体试剂盒简便、快速、准确,是一种实用的检测试剂盒。     

致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。