基于Netrin-1介导神经萌发探讨温经活血外治法对膝骨关节炎大鼠疼痛的影响

目的 研究Netrin-1介导感觉神经萌发对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis, KOA)大鼠疼痛行为的影响及温经活血外治法的干预作用。方法 随机将30只大鼠平均分为空白组、KOA组及外治法组。KOA模型通过前交叉韧带横断术构建,造模成功后,外治法组使用温经活血外治法代表方——“易层”贴敷28 d。给药完成后各大鼠腹主动脉采血并提取各组滑膜组织和背根神经节(Dorasal root ganglion, DRG)组织,苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining, HE)染色观察滑膜炎症,神经镀银染色滑膜观察神经萌发;ELISA检测血清中促炎因子白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和疼痛介质P物质(Substance p, SP)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)含量;Western blot和qPCR检测滑膜组织Netrin-1、CGRP和DRG组织神经元表面受体结直肠癌缺失基因(Deleted in colorectal cancer, DCC)、非协调同源-5(Unco...     

“易层”贴敷对膝骨关节炎大鼠滑膜纤维化的改善作用及机制

目的 探究“易层”贴敷对膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜纤维化（SF）的改善作用及潜在机制。方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、KOA组和易层组,每组8只。KOA和易层组大鼠以前交叉韧带离断法复制KOA模型。造模14 d后,易层组大鼠于膝关节均匀涂抹“易层”贴敷[三色散（每100 cm2涂抹8 g）和复方三黄油膏（每100 cm2涂抹5 g）],每天贴敷8 h,连续28 d。末次给药后,观察各组大鼠的滑膜炎症程度及纤维化程度并进行Krenn评分,检测其滑膜组织中Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达,血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,以及滑膜组织中纤维化及HMGB1/Toll样受体4(TLR4)/NF-κB通路相关蛋白及mRNA的表达。结果 与假手术组比较,KOA组大鼠滑膜衬里细胞大量增生且排列紊乱,炎症细胞浸润和胶原纤维沉积明显;collagenⅠ、HMGB1、p-NF-κB p65阳性表达细胞均明显增加,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量...     

中医贴敷治疗膝骨关节炎的研究进展

膝骨关节炎（KOA）是一类以膝关节软骨退变以及继发骨质增生为特征的慢性关节疾病,其发病机制尚不明确。大量的临床研究表明,贴敷疗法治疗KOA效果显著,无明显副作用,价格便宜,易于操作,值得深入研究。从中医贴敷治疗KOA的辨证思路、施治策略、疗效优势、作用机制四个方面展开综述,为KOA的临床诊治提供新思路。      

基于TGF-β1/SMAD3信号通路探讨“易层”贴敷对膝骨关节炎模型大鼠滑膜纤维化的干预机制

目的：观察“易层”贴敷对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠滑膜纤维化的干预作用及其对转化生长因子β 1（TGF-β 1）/细胞信号转导分子3（SMAD3）信号通路的影响，探索其对KOA的治疗机制。方法：将27只大鼠随机分为空白组、模型组和易层组，每组9只，模型组和易层组大鼠双膝采用前交叉韧带横断术（ACLT）制作KOA模型。造模成功后第14天开始，易层组采用“易层”贴敷疗法，即先后予复方三黄油膏、三色散敷药敷膝关节，每日贴敷8 h，连续贴敷28 d ；模型组造模成功后不做干预。于易层组干预完成后，同期处死各组大鼠，取膝关节滑膜组织，备测。取每组3只大鼠的膝关节滑膜组织，固定、包埋、切片，分别行苏木精-伊红（HE）染色和天狼星红染色观察纤维化情况。免疫组化法观察每组3只大鼠膝关节滑膜组织TGF-β 1、SMAD3、磷酸化-SMAD3（p-SMAD3）等TGF-β 1/SMAD3信号通路相关指标表达。蛋白免疫印迹（Western blot）法和实时荧光定量PCR（qPCR）法分别检测每组3只大鼠膝关节滑膜组织Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ ）、肌动蛋白α （α-SMA）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP1）、TGF-β 1、SMAD3、高迁移率族蛋白1（HMGB1）的相对蛋白和基因表达量。结果： HE染色和天狼星红染色后病理图片显示，与空白组比较，模型组大鼠膝关节滑膜组织纤维化程度和炎性细胞浸润程度明显加重，易层组较模型组滑膜组织纤维化程度、炎性细胞浸润程度减轻。免疫组化法结果显示，与空白组比较，模型组大鼠膝关节滑膜组织TGF-β 1、SMAD3、p-SMAD3表达明显增多，阳性着色（褐色）密集；易层组大鼠膝关节滑膜组织上述指标表达明显降低，阳性着色稀疏。Western blot法和qPCR法检测结果显示，模型组大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β 1/SMAD3信号通路的关键指标HMGB1、TGF-β 1、SMAD3蛋白和基因相对表达明显高于空白组（P<0.05），易层组上述指标的表达则显著低于模型组（P<0.05）；模型组大鼠膝关节滑膜组织中促纤维化相关因子TIMP1、Collagen I、α-SMA蛋白和基因相对表达明显高于空白组（P<0.05），易层组上述指标表达显著低于模型组（P<0.05）。结论：“易层”贴敷可能通过抑制TGF-β 1/SMAD3信号通路活化从而改善滑膜纤维化，延缓KOA进展。