NK/T细胞淋巴瘤基因组中EBV DNA整合检测及分析

  目的  明确NK/T细胞淋巴瘤（NK/T cell lymphoma,NKTCL）基因组中是否存在EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）DNA整合,初步分析NKTCL细胞系基因组中EBV DNA整合信息。  方法  利用PCR法扩增EBV DNA和原位杂交法检测EBER表达,验证由郑州大学第一附属医院生物样本库提供的5例EBV（+）及4例EBV（-）NK/T样本EBV感染情况。测序全基因组DNA样本并进行生物信息学分析。利用全基因组序列比对捕获EBV整合序列;使用Blast比对样本EBV fasta文件与EBV fasta库。采用CREST软件提取softclip reads,过滤paired reads并对过滤后的reads进行染色体分布的统计。使用IGV比对染色体部分区域reads分布情况,采用PCR法扩增EBV DNA高频整合区域并行sanger测序。  结果  5例EBV（+）NK/T样本中均检测出EBV DNA和EBER表达,4例EBV（-）NK/T样本则未能检出。样本的测序深度、覆盖深度、覆盖率和比对率均满足后续研究要求。比对结果显示捕获的序列为病毒序列。EBV（+）NKTCL细胞系SNK、YTS和EBV（+）鼻腔NTKCL组织的reads数目最多,且在2号染色体上呈非随机性富集。chr2:30234084-30234483 400 bp区域存在EBV DNA整合,并导致chr2p23.1位点的插入缺失。  结论  EBV（+）NKTCL细胞在chr2p23.1位点存在EBV DNA的高频整合,提示可能影响相关基因表达。      

PD-1/PD-Ls在EBV阳性T/NK淋巴组织增殖性疾病中的表达及临床意义

  目的  探讨程序性细胞死亡蛋白-1（programmed cell death protein 1,PD-1）、程序性细胞死亡蛋白-2配体（programmed death-ligand 2,PD-L2）及程序性细胞死亡蛋白-1配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）在EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）阳性T/NK淋巴组织增殖性疾病[Epstein-Barr virus-positive T/natural killer（NK）-cell lymphoproliferative disease,EBV（+）-T/NKLPD]中的表达及临床意义。  方法  收集2013年1月至2017年12月郑州大学第一附属医院17例EBV（+）-T/NK-LPD患者的病理石蜡包埋组织,其中男性12例,女性5例,年龄为10~82岁,平均年龄29岁,Ⅰ级4例,Ⅱ级7例,Ⅲ级3例,种痘水疱病样淋巴组织增殖性疾病3例。采用免疫组织化学SP法检测PD-1、PD-L1和PD-L2在人EBV（+）-T/NK-LPD组织中的表达,并采用Fisher确切概率法、Spearman秩相关,分析其与临床病理学参数、病理分级及患者预后之间的关系。  结果  在17例组织标本中,PD-1表达阳性12例,PD-L1表达阳性6例,PD-L2表达阳性5例。PD-1、PD-L2的表达与预后无显著相关性（P>0.05）,PD-L1的表达与预后呈正相关（P < 0.05）。PD-L1、PD-L2的表达与年龄、性别、LDH水平及Ki-67表达水平之间无显著相关性（P>0.05）。PD-1及PDL2的表达与病理分级之间无显著相关性（r=0.141,r=-0.149,均P>0.05）,而PD-L1的表达与病理分级之间呈负相关（r=-0.563）,PD-L1的表达与病理分级之间的相关关系具有统计学意义（P < 0.05）。  结论  PD-1、PD-L1和PD-L2在EBV（+）-T/NK-LPD病理组织中异常表达,虽然PD-1的表达与预后、病理分级之间无显著相关性,但在EBV（+）T/NK-LPD中显著高表达,PD-1/PD-Ls信号通路可能成为EBV（+）-T/NK-LPD免疫治疗的潜在新靶点。      

非上呼吸消化道结外NK/T细胞淋巴瘤的不良预后因素分析

  目的  分析非上呼吸消化道来源的结外NK/T细胞淋巴瘤（non-upper aerodigestive tract extranodal NK/T-cell lymphoma,NUAT-ENKTCL）的不良预后因素。  方法  回顾性分析郑州大学第一附属医院2011年1月至2015年12月收治的20例NUAT-NKTCL患者临床资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,应用Log-Rank法检验对EBER表达、年龄、性别、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）水平和治疗前外周血EBV-DNA拷贝数等进行单因素分析。  结果  20例患者中,男女比为13:7。中位年龄为39（12~66）岁,其中≥60岁3例（15%）, < 60岁17例（85%）。Ann Arbor分期:Ⅰ、Ⅱ期8例（40%）,Ⅲ、Ⅳ期12例（60%）。LDH水平升高12例（60%）。治疗前外周血EBV-DNA拷贝数增加11例（55%）。病变组织中EBER（+）13例（65%）。患者截至随访时间死亡4例,生存16例,中位总生存期（median overall survival,mOS）为15.4个月,中位无进展生存期（median progression free survival,mPFS）为8个月。完全缓解（complete response,CR）11例（55%）,部分缓解（partial response,PR）5例（25%）,客观缓解率（objective response rate,ORR）为80%。单因素分析显示年龄与预后呈显著相关性。  结论  EBER的表达并不影响NUAT-ENKTCL患者的预后,年龄≥60岁患者预后较差。