微球的制备和表征

目的制备葡激酶突变体(K35R，DGR)的聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)微球，使其在包封和释放过程中都能保持活性。方法使用复乳溶剂挥发法制备DGR的PLGA微球，研究了搅拌速度、PLGA浓度、内水相和外水相中的添加剂对蛋白包封率以及微球性质的影响，并进行了DGR微球的体外和体内释放试验。结果2%聚乙烯醇可以有效抑制超声乳化时DGR在水/二氯甲烷界面上的变性，将DGR的活性回收率从16%提高到几乎100%。在外水相中加入NaCl可以显著提高蛋白包封率，同时对微球的粒径分布和表面形态也产生了重要影响。DGR微球的体外释放呈现两个时相，15 d释放大约DGR总活性的50%。DGR微球在体内持续释放5 d。结论制备的PLGA微球，DGR包封率高，稳定性较好，是DGR的良好载药系统。     

机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术(RALP)与开放性耻骨后前列腺癌根治术(RRP)的5年肿瘤学效果对比

 目的 分析机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术（robot-assisted laparoscopic radical prostatectomy，RALP）与开放性耻骨后前列腺癌根治术（open retropubic radical prostatectomy，RRP）治疗局限性前列腺癌的5年肿瘤学效果。方法 收集复旦大学附属华东医院泌尿外科2009年7月至2014年3月同期接受RALP或RRP并获得随访的95例患者临床资料，比较两种术式的手术时间、术中失血量及输血比例、术后病理、生化复发率等指标。结果 95例手术均获成功，RALP组无中转开放。RALP组与RRP组手术时间分别为212.3与166.8 min（P<0.05），术中失血量分别为237.3与557.3 mL（P<0.05）；术中输血比例分别为16.7%与78.7%（P<0.05）；手术切缘阳性率分别为22.0%与7.8%（P<0.05），1年尿控率分别为79.5%和84.7%，6个月、1年、2年、3年、4年、5年生化复发率分别为6.2%和4.3%、18.8%和6.4%、25.0%和14.9%、29.2%和21.3%、31.2%和21.3%、31.2%和23.4%。两组5年内的生化复发率差异无统计学意义。结论 RALP具有损伤小、出血少、输血少的优点，但手术时间长于RRP。两种术式的尿控、手术切缘阳性率及5年长期肿瘤学效果等相似。     

人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定

目的 构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体，转染人乳腺癌细胞株MDA—MB—231，观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV304和MDA—MB—231细胞增殖的影响。方法 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA，所得的目的片段与真核表达载体pcDNA3重组，构建重组质粒poDNA3K5，脂质体法将其转染MDA—MB—231，G418筛选阳性克隆，PCR鉴定，RT-PCR和Western blot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞，MTT、法检测其增殖情况，并用MTT法检测转染pcDNA3K5对MDA—MB—231细胞增殖的影响。结果 构建的重组质粒pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确，将其转染MDA-MB-231后挑取的阳性克隆有3个经PCR鉴定正确，并经RT-PCR和Western blot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞后，其存活率降低；转染pcDNA3K5对MDA—MB—231细胞增殖无明显影响。结论 应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA-MB-231细胞后，其分泌产生的有生物学活性的K5，呈现对ECV304细胞增殖的抑制作用，而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响。     

刚地弓形虫速殖子超微结构观察

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的速殖子在人体急性感染期对致病有重要意义。国内对弓形虫的超微结构报道较少。为适应当前对弓形虫研究的需要,我们对速殖子超微结构进行了深入观察。 弓形虫速殖子呈半月形或香蕉形,前端较尖,后端钝圆,一边较扁平,一边较弯曲,大小约5～6×1.8～2.5μm,虫体外有细胞膜包绕。虫体前端有极环和类锥体,极环由内膜的前端增厚形成,厚约58.8～     

组织型纤溶酶原激活剂促进小鼠坐骨神经血-神经屏障损伤后的修复

目的观察组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，t-PA）对坐骨神经血-神经屏障损伤后修复的影响。方法选取野生型小鼠和t-PA基因敲除纯合子小鼠，利用持针器钳夹坐骨神经20s。在损伤后第3，7，11，15天观察小鼠坐骨神经血-神经屏障修复情况。采用尾静脉注射Evans Blue，观察野生型小鼠组和t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障渗透性的差异。利用免疫荧光和Western Blot观察两组小鼠损伤段坐骨神经血-神经屏障重要的组成性蛋白occludin的恢复情况。结果小鼠坐骨神经损伤后小PA基因敲除小鼠组血-神经屏障的通透性在损伤后第7，11，15天高于野生型小鼠组。免疫荧光及其Western Blot显示t-PA基因敲除延缓了坐骨神经损伤后occludin的表达。结论t-PA基因缺失对小鼠坐骨神经血-神经屏障损伤后的修复有一定的阻碍作用，与坐骨神经血-神经屏障损伤后，其组成性蛋白occludin的表达减少有关。