9型腺相关病毒转染乳鼠心肌细胞的可行性及安全性

背景：9型腺相关病毒对心肌细胞具有更好的靶向转染,是目前研究基因治疗心脏疾病的理想载体。目的：探索9型腺相关病毒体外转染乳鼠心肌细胞的可行性及对乳鼠心肌细胞的毒性评估。方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞,以携带荧光蛋白基因的9型腺相关病毒为载体,将分离纯化的乳鼠心肌细胞分为正常培养组、无病毒转染组、病毒转染组。结果与结论：第1周细胞搏动频率及百分率正常培养组和病毒转染组与无病毒转染组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,但正常培养组高于病毒转染组（P〈0.05）;3周后各组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。经9型腺相关病毒转染的心肌细胞24h开始有表达,4~6d荧光最强,3组细胞72h内不同时间点还原比率均接近于1.0。说明9型腺相关病毒能成功有效地转染乳鼠心肌细胞,对乳鼠心肌细胞无明显毒性作用。     

鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB培养内皮细胞

背景:有研究证实,Ⅰ型鼠尾胶原可促进成肌纤维细胞的增加,对内皮细胞的迁移及成管有较为明显的作用,推断胶原可为细胞的生长提供一个较为合适的内环境。目的:探讨鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB抗人脐静脉内皮细胞凋亡的效果及安全性。方法:将第4代人脐静脉内皮细胞培养于铺有鼠尾胶原的培养皿上,用Alamar Blue法检测不同时间点的还原比率。将第4代人脐静脉内皮细胞分为4组培养于24孔板,其中生长因子组是在细胞接种前加入血小板源性生长因子BB蛋白于细胞悬浮液中;联合组需事先加入血小板源性生长因子BB蛋白于鼠尾胶中,铺于板底;最后各组均使用H2O2诱导凋亡,73 h后采用Western blot测定血小板源性生长因子BB、凋亡相关蛋白及抗凋亡蛋白的表达,同时Tunnel检测细胞凋亡阳性率。结果与结论:在铺有鼠尾胶原培养皿中培养人脐静脉内皮细胞的成管数量明显多于正常培养人脐静脉内皮细胞的成管数量(P<0.05)。鼠尾胶原培养的细胞与正常对照细胞生长状态相似,说明鼠尾胶原对细胞无明显毒性作用。联合组血小板源性生长因子BB、Bcl-2、p-Akt表达高于其余3组(P<0.05),Bax表达低于其余3组(P<0.05)。联合组细胞凋亡率低于生长因子组、H2O2组(P<0.05)。表明鼠尾胶原对人脐静脉内皮细胞无明显毒性作用,联合血小板源性生长因子BB生长因子后可显著增强抗细胞凋亡效果。     

2007-2010年新疆维吾尔自治区汉族、维吾尔族、哈萨克族35岁以上人群空腹血糖水平与颈动脉内中膜厚度的相关性研究

目的 分析新疆维吾尔自治区汉族、维吾尔族、哈萨克族≥35岁人群FBG水平与颈动脉内中膜厚度(IMT)的相关性.方法 于2007年10月至2010年4月,按照多阶段分层整群随机抽样原则,在新疆维吾尔自治区的7个市(州、地区)选取汉族、维吾尔族、哈萨克族≥35岁常住人群,排除颈动脉内中膜增厚(IMT ＞0.9 mm)者及长期外出、流动人口,共获得有效调查对象13 935名.测量其FBG及颈动脉IMT值,根据FBG值将调查对象分为FBG正常组、空腹血糖受损(IFG)组、糖尿病组.采用方差分析比较不同组别颈动脉IMT的差异,采用多元线性回归模型探讨颈动脉IMT的影响因素.结果 汉族、维吾尔族、哈萨克族男性颈动脉IMT分别为(0.81 ±0.29)、(0.71±0.27)、(0.79 ±0.21)mm(F=88.50,P＜0.05),其糖尿病组颈动脉IMT为(0.82±0.29) mm,高于FBG正常组[(0.77±0.26) mm]和IFG组[(0.79±0.27) mm] (F=7.49,P ＜0.05).汉族、维吾尔族、哈萨克族女性颈动脉IMT分别为(0.72±0.27)、(0.63±0.25) 、(0.77±0.22)mm(F=173.93,P＜0.05),其糖尿病组和IFG组颈动脉IMT分别为(0.75±0.29)、(0.74 ± 0.26) mm,均高于FBG正常组[(0.70±0.25) mm] (F=10.46,P＜0.05).舒张压(β'=0.101,P＜0.05)、TC(β'=0.056,P ＜0.05) 、FBG(β'=0.023,P =0.009)是颈动脉IMT的独立影响因素.结论 新疆维吾尔自治区汉族、维吾尔族、哈萨克族≥35岁人群FBG水平是颈动脉IMT的独立影响因素,且两者呈正相关.     

新疆地区维吾尔族35岁以上人群肾功能与动脉僵硬度的相关性

目的 研究新疆地区维吾尔族人群的肾功能与动脉僵硬程度的相关性.方法 应用四阶段分层整群随机抽样方法,于2007年10月至2010年3月,在乌鲁木齐市、克拉玛依市、阜康市、吐鲁番地区、和田地区、伊犁哈萨克自治州、阿勒泰地区抽取了35岁以上,资料完整的维吾尔族城乡居民4312人,进行研究分析.用简化MDRD公式计算估计肾小球滤过率(eGFR).测量双侧臂-踝脉搏波速度(b-aPWV),取双侧的平均值与eGFR做线性相关性分析,并对b-aPWV的影响因素进行校正.结果 eGFR与平均b-aPWV值呈负相关(R=0.174,P＜0.01).运用Stepwise多重线性回归校正年龄、性别、体质量指数、收缩压、舒张压、腰围、臀围、尿酸、空腹血糖、总胆同醇、三酰甘油、低密度脂蛋白后,eGFR仍与b-aPWV呈负相关(P=0.012).结论 新疆地区35岁以上维吾尔族人群的肾功能与动脉僵硬度存在负相关.     

新疆汉、维吾尔、哈萨克族慢性心力衰竭流行病学调查及其患病率研究

目的 了解新疆成年人慢性心力衰竭(心衰)的患病率和分布特征.方法 应用四阶段整群随机抽样法,在全疆23个市、7个地区、5个自治州抽取乌鲁木齐市、克拉玛依市、阜康市、吐鲁番地区、和田地区、伊犁哈萨克自治州等6个地区年龄在35岁以上样本,男女均衡.统计不同民族组、不同年龄组、不同性别组人群的心衰患病率,并对心衰患者合并心血管基础疾病进行分析.结果 共抽样35岁以上城市及农村游牧居民8459例,心衰患病率为1.26%;其中汉族为0.89%,维吾尔族为1.11%,哈萨克族为2.14%.男性为1.61%,女性为0.93%,男性患病率高于女性(u=2.79,P<0.05).35～44岁、45～54岁、55～64岁、65～74岁、75岁以上各年龄组的心衰患病率分别为0.29%、0.60%、1.32%、2.55%、4.10%,随着年龄增高,心衰发生的风险显著上升.107例心衰患者中合并高血压病者占63.55%,冠心病者占42.99%,糖尿病者占18.69%,心瓣膜病者占5.61%,心房颤动者占4.67%.结论 新疆心衰患病率较高,随年龄增加呈增多趋势,且存在民族差异.高血压病、冠心病、糖尿病为新疆各民族心衰患者共同合并心血管基础疾病.通过对新疆不同人群心衰的流行病学监测和调查,寻找适合新疆人文地域特点的心衰早期诊断方法和干预模式具有重大现实意义.     

血清淀粉样蛋白A1基因多态性对汉族人群颈动脉内中膜厚度的影响

Objective To explore the association between genetic polymorphism of serum amyloid protein A1 (SAA1) with carotid intima media thickness in a healthy Han Chinese population of Xinjiang. Methods A total of 449 healthy Han Chinese participating the cardiovascular risk survey between June 2007 and September 2009 were included, the genotypes of the SAA1 were detected by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The mean IMT of the right and left common carotid arteries were measured by B-mode ultrasonography. Results (1) There was strong linkage disequilibrium between rs12218 and rs2229338 (D'=0. 89). (2) The carotid common IMT (CC-IMT) and the carotid bulb IMT (CB-IMT) were similar between the AA genotype (wild genotype) and the GGFAG genotype (mutational genotype) in rs2229338 of SAA1 gene. (3) CC-IMT[(0.081 ±0.071)cm vs (0.068 ±0. 019 ) cm, P = 0. 01] was significantly thicker in CC + CT genotype ( mutational genotype) group than in TT genotype (wild genotype) of rs12218 group and the difference remains significant after adjustment for age,gender,blood pressure, waist circumference, creatinine and high density lipoprotein cholesferoL CB-IMT [(0.085±0. 038)cm vs. (0.081 ± 0. 052) cm,P =0. 36] was similar between CC +CT genotype and TT genotype of rs12218 groups. Conclusion Our results suggested that the genetic polymorphism of SAA1 might be linked with IMT and rs12218 mutation could serve as a promoting factor for IMT in Han Chinese people.     

新疆维吾尔族人群CYP2C19＊1、＊2两位点基因多态性分布

目的 研究新疆地区维吾尔族人群CYP2C19基因多态性分布情况.方法 随机选择新疆医科大学第一附属医院心脏中心住院体检者共132例,采用聚合酶链-限制性片段长度多态性方法对CYP2C19*1及*2基因位点进行分型,了解其基因型的分布频率,并与文献报道的汉族人群及欧洲人群进行比较.结果 CYP2C19两位点基因多态性符合Hardey-Weinberg平衡;CYP2C19*1:AA、AG、GG基因型频率在维吾尔人群分别为0.54%、5.4%、94.05%;CYP2C19*2:CC、CT、TT基因型频率分别为61.4%、34.8%、3.8%,与汉族人群及欧洲人群相比较,均有明显差异(P<0.001).结论 新疆地区维吾尔族人群中CYP2C19*1、*2两位点基因型频率分布与汉族及欧洲人群均有明显差异.     

重组9型腺相关病毒载体转染小鼠心脏及对心功能的影响

目的 探讨重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated serotype 9,rAAV9)载体对小鼠心脏的转染效果及对心功能的影响.方法 16只昆明种小鼠经尾静脉将携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-eGFP)转染入小鼠,于7、14、21、28 d留取标本,使用荧光显微镜观察eGFP在心肌、肝、肺、肾、脑、骨骼肌的荧光表达,Western blot法检测eGFP)的蛋白表达.另20只昆明种小鼠随机分为2组,每组10只,分别经尾静脉注射rAAV9-eGFP)和生理盐水,28 d后行心脏超声及血流动力学检查.结果 rAAV9-eGFP经尾静脉注射21 d时eGFP表达在心脏达到高峰,转染效率可达32%,在其他脏器表达量少或无表达.rAAV9-eGFP组较生理盐水组心功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rAAV9可通过外周静脉注射在心脏较高表达,且对心功能无不良影响.     

前列腺环素合酶基因GLu461ALa多态性与维吾尔族人群心肌梗死的相关性

目的 探讨前列腺环素合酶基因(CYP8A1)GLu461ALa多态性与维吾尔族人群心肌梗死(myocardial infarction,MI)的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对210例维吾尔族MI患者和206名维吾尔族健康受试者CYP8A1基因4号外显子GLu461ALa位点进行分析,同时进行血清6-酮前列腺素F1α水平测定.结果 CYP8A1基因4号外显子GLu461ALa在MI组和健康对照组中基因璎频率分别为:CC型0.024(5/210)和0.010(2/206),AC型0.124(26/210)和0.073(15/206),AA型0.852(179/210)和0.917(189/206),两组CC、AC和从3种基因型频率分布差异无统计学意义(χ2=0.782,P>0.05),但CC+AC(突变纯合子+突变杂合子)在MI组[0.148(31/210)]明显高于对照组[0.083(17/206)],差异具有统计学意义(χ2=4.321,P=0.031),且在两组人群中C等位基因频率[0.086(36/420),0.046(19/412)]差异具有统计学意义(χ2=5.284,P=0.021).MI组血清6-酬前列腺素F1α水平[(17.40±4.56)pg/ml]低于对照组[(20.34±5.02)pg/ml],差异具有统计学意义(t=6.255,P<0.01);MI组和对照组CC+AC基因型携带者血清6-酮前列腺素Fα水平[(14.30±3.31)pg/ml,(18.31±4.62)pg/ml]均较AA基因型者[(19.34±5.51)pg/ml,(25.10±5.00)pg/ml]降低,差异具有统计学意义(t'=6.934,P<0.05;t=5.393,P<0.01).logistic回归分析显示,调整传统危险因素的干扰后,CYP8A1 C等位基因仍为MI的独立危险因素(OR=1.77;95%CI:1.06～2.05).结论CYP8A1基因4号外显子GLu461ALa多态性和维吾尔族人群MI的发生具有相关性,可能和基因变异导致的血清前列腺环素水平降低有关.     

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用

背景：胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法：将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿（实验组）和普通培养皿（对照组）中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT 比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL 法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot 检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论：两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值显著降低,呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下,与对照组相比,实验组细胞凋亡状态明显减弱,细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力,减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。