二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用

目的为探明藏酋猴创伤所致多器官功能衰竭的致病机理。方法对一例实验藏酋猴因创伤所致多器官功能衰竭的病例进行了系统的病理学观察。结果藏酋猴的剖检病变主要表现为肝脏肿大,肺萎缩,头部皮下组织大面积出血、坏死,腋下淋巴结、肠系膜淋巴结水肿。病理组织学表现为全身各组织器官不同程度的水肿、变性、坏死,尤以心、肺、肝、肾、肠和脑的病变较为明显。结论颅外组织损伤易导致多器官功能衰竭。     

二维电泳分析胎儿酒精综合征斑马鱼模型蛋白表达谱

目的 利用二维电泳分析乙醇诱导斑马鱼胚胎发育畸形的可能分子机制.方法 采用400 mmol/L乙醇在斑马鱼胚胎圆顶期处理3 h,观察乙醇导致的斑马鱼胚胎发育畸形;通过二维凝胶电泳分析受精卵期、圆顶期、胚盾期和5-体节期的胚胎总蛋白,采用差减分析法减少母源性蛋白的干扰,比较5一体节期正常对照组和乙醇处理组斑马鱼胚胎蛋白表达谱的改变;通过原位杂交验证二维电泳的分析结果.结果 400 mmol/L乙醇处理导致62%的胚胎产生体轴发育障碍和60%的胚胎产生独眼畸形.二维电泳分析结果显示,400 mmol/L乙醇处理会导致受精后12 h(12 hours post fertilization,12 hpf)斑马鱼胚胎胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白表达分别下调81%和73%.随后原位杂交显示,胶原蛋白2a1在乙醇处理组胚胎体轴的表达明显下调;24 hpf乙醇处理胚胎胶原蛋白2a1在胚胎体轴的表达水平逐渐恢复正常,但神经管结构受到严重影响.结论 乙醇处理后斑马鱼胚胎发育畸形可能是由于乙醇干扰了胚胎发育过程中胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白的表达;其中乙醇对胶原蛋白2a1在轴中胚层早期表达的干扰,可能是导致发育后期体轴和神经管畸形的重要原因.     

叶酸缺乏对斑马鱼背主动脉发育的影响

目的 观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的背主动脉(DA)发育情况,初步探讨叶酸缺乏后胚胎DA发育异常的机理.方法 采用将二氢叶酸还原酶(DHFR)功能阻断的方法构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别应用DHFR抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR基因knock-down技术处理斑马鱼胚胎.在胚胎发育至48 hpf时在显微镜下观察胚胎的整体发育情况,在60 hpf时应用荧光显微造影的方法观察胚胎的背主动脉发育状况.利用胚胎整体原位杂交和real-time PcR的方法检测影响DA发育的关键因子ephrinB2、Ang-1和Radar的表达情况,利用TUNEL法检测胚胎底索的凋亡情况.结果 MTX处理组胚胎以及DHFR knock-down组胚胎有相似的胚胎发育异常表型.荧光显微造影显示叶酸缺乏组胚胎的DA发育异常.叶酸缺乏组胚胎的ephrinB2、Ang-1和Radar表达减弱,底索凋亡增加.结论 叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎背主动脉发育异常,其机理与ephrinB2、Ang-1和Radar的表达减弱以及底索凋亡增加有关.     

桔梗皂苷对斑马鱼心功能及胚胎发育的影响

目的探索桔梗总苷对斑马鱼心律及胚胎发育的影响。方法从中药饮片提取桔梗总苷,用不同浓度的桔梗总苷对不同发育阶段的斑马鱼胚胎进行处理,观察该药对斑马鱼心律及心脏发育的影响。结果桔梗总苷处理后发现,斑马鱼心率减缓但未出现心律失常;心脏功能相关的离子通道基因表达水平略有降低;高浓度(10mg·L-1)的桔梗总苷处理导致斑马鱼胚胎的死亡与畸形的比例显著增加,同时干扰了斑马鱼胚胎的发育过程。结论桔梗不能引起心律失常,但高浓度用药导致心率迟缓、心功能下降以及致畸致死效应。     

二维电泳分析胎儿酒精综合征斑马鱼模型蛋白表达谱

目的 利用二维电泳分析乙醇诱导斑马鱼胚胎发育畸形的可能分子机制.方法 采用400 mmol/L乙醇在斑马鱼胚胎圆顶期处理3 h,观察乙醇导致的斑马鱼胚胎发育畸形;通过二维凝胶电泳分析受精卵期、圆顶期、胚盾期和5-体节期的胚胎总蛋白,采用差减分析法减少母源性蛋白的干扰,比较5一体节期正常对照组和乙醇处理组斑马鱼胚胎蛋白表达谱的改变;通过原位杂交验证二维电泳的分析结果.结果 400 mmol/L乙醇处理导致62%的胚胎产生体轴发育障碍和60%的胚胎产生独眼畸形.二维电泳分析结果显示,400 mmol/L乙醇处理会导致受精后12 h(12 hours post fertilization,12 hpf)斑马鱼胚胎胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白表达分别下调81%和73%.随后原位杂交显示,胶原蛋白2a1在乙醇处理组胚胎体轴的表达明显下调;24 hpf乙醇处理胚胎胶原蛋白2a1在胚胎体轴的表达水平逐渐恢复正常,但神经管结构受到严重影响.结论 乙醇处理后斑马鱼胚胎发育畸形可能是由于乙醇干扰了胚胎发育过程中胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白的表达;其中乙醇对胶原蛋白2a1在轴中胚层早期表达的干扰,可能是导致发育后期体轴和神经管畸形的重要原因.     

通草增加哺乳期乳汁分泌的机制研究

目的 初步探讨通草在哺乳期增加乳汁分泌的途径和作用机制及其对乳汁成分的影响.方法 将16只产后ICR母鼠分为阴性对照组(n=8)和通草处理组(n=8);通草处理组每日通过灌胃方式给予母鼠通草提取液0.25 mL,阴性对照组给予等量生理盐水.比较通草处理组与阴性对照组小鼠的泌乳量、乳汁中蛋白质和乳糖含量;采用ELISA法检测小鼠血清中催乳激素的水平.采用不同剂量通草提纯液处理小鼠HC11乳腺上皮细胞(设为低剂量通草处理组和高剂量通草处理组,另设对照组);采用荧光定量RT-PCR方法检测乳腺上皮细胞中β-酪蛋白和乳清蛋白mRNA的表达;采用Western blotting技术检测乳腺上皮细胞中β-酪蛋白、STAT5蛋白和磷酸化STAT5蛋白的表达.结果 通草处理组小鼠在哺乳第1、3、8、13和18天的泌乳量均高于阴性对照组.通草处理组母鼠乳汁中蛋白质的质量浓度(119.567 μg/mL)明显高于阴性对照组(100.562 μg/mL),乳糖浓度(53.072 mmol/L)明显低于阴性对照组(63.290 mmol/L),差异均有统计学意义(P＜0.05).在哺乳第1、3、8和13天,通草处理组催乳激素水平与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).低剂量通草处理组和高剂量通草处理组乳腺上皮细胞中β-酪蛋白及乳清蛋白mRNA的表达均高于对照组.对照组、通草低剂量处理组和通草高剂量处理组乳腺上皮细胞中磷酸化STAT5蛋白的表达水平依次升高.结论 通草可以增加STAT5蛋白的磷酸化水平,加强细胞内信号转导,促进乳腺细胞泌乳,增加乳汁中乳蛋白的含量.     

二维电泳分析胎儿酒精综合征斑马鱼模型蛋白表达谱

目的 利用二维电泳分析乙醇诱导斑马鱼胚胎发育畸形的可能分子机制.方法 采用400 mmol/L乙醇在斑马鱼胚胎圆顶期处理3 h,观察乙醇导致的斑马鱼胚胎发育畸形;通过二维凝胶电泳分析受精卵期、圆顶期、胚盾期和5-体节期的胚胎总蛋白,采用差减分析法减少母源性蛋白的干扰,比较5一体节期正常对照组和乙醇处理组斑马鱼胚胎蛋白表达谱的改变;通过原位杂交验证二维电泳的分析结果.结果 400 mmol/L乙醇处理导致62%的胚胎产生体轴发育障碍和60%的胚胎产生独眼畸形.二维电泳分析结果显示,400 mmol/L乙醇处理会导致受精后12 h(12 hours post fertilization,12 hpf)斑马鱼胚胎胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白表达分别下调81%和73%.随后原位杂交显示,胶原蛋白2a1在乙醇处理组胚胎体轴的表达明显下调;24 hpf乙醇处理胚胎胶原蛋白2a1在胚胎体轴的表达水平逐渐恢复正常,但神经管结构受到严重影响.结论 乙醇处理后斑马鱼胚胎发育畸形可能是由于乙醇干扰了胚胎发育过程中胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白的表达;其中乙醇对胶原蛋白2a1在轴中胚层早期表达的干扰,可能是导致发育后期体轴和神经管畸形的重要原因.

Abstract：

Objective To study the putative mechanisms underlying fetal alcohol syndrome by comparative protein-profile analysis between normal and ethanol-treated zebrafish embryo with twodimensional electrophoresis (2-DE).Methods Zebrafish embryos were exposed in 400 mmol/L ethanol at dome stage for 3 hours,and then ethanol-induced abnormalities were observed.Proteomes of zebrafish embryos at early stages including zygote stage,dome stage,shield stage and 5-somite stage,were separated by 2-DE.The subtraction analysis method was applied to eliminate the interference from maternal derived proteins.The ethanol-treated embryos at 5-somite stage was analyzed by 2-DE,and the protein profile was compared with that generated from control embryos at the same stage.The data obtained from 2-DE analysis were verified by in-situ hybridization.Results 400 mmol/L ethanol treatment caused axial malformation (62%) and cyclopia (60%) in zebrafish embryos.The 2-DE analysis showed that the expression of Collagen2al (Col2a1) and TAR DNA binding protein (TDP) was decreased in 12 hours post fertilization (12 hpf) ethanol-treated embryos by 81% and 73%,respectively.The in-situ hybridization also demonstrated that the expression of Col2al in axial mesoderm was reduced by ethanol treatment at the same stage.But for 24 hpf ethanoltreated embryos,the expression of Col2al in axis recovered to a comparable level to that in control embryos,while the structure of neural tube was disrupted severely by ethanol exposure.Conclusions It is suggested that the expressions of Col2al and TDP were disrupted by ethanol during early stage,which might induce the zebrafish developmental abnormalities.The ethanol interference on early expression of Col2al is supposed to be one of the major reasons leading to later abnormalities of axis and neutral tube.     

叶酸缺乏对斑马鱼体轴发育的影响

 目的 构建叶酸缺乏斑马鱼模型,观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的体轴发育情况,初步探讨叶酸缺乏导致胚胎体轴发育异常的机制。方法 分别应用二氢叶酸还原酶（dhfr）抑制剂甲氨蝶呤（MTX）以及二氢叶酸还原酶（dhfr）基因阻抑技术,通过下调二氢叶酸还原酶功能构建叶酸缺乏斑马鱼模型。在胚胎发育至17 hpf时在显微镜下观察胚胎的体轴偏移情况。利用特异性探针通过胚胎整体原位杂交的方法标记肝脏、胰脏以及心脏,以观察其位于中线两侧的位置。利用胚胎整体原位杂交和Real-time PCR 的方法检测与体轴发育密切相关的Nodal信号通路下游因子ntl和gsc的表达情况。结果 叶酸缺乏组一定比例胚胎存在体轴偏移以及肝脏、胰脏和心脏左右轴异位。叶酸缺乏组Nodal信号通路下游因子ntl以及gsc的表达强度无明显变化,但表达的空间模式发生改变,提示轴中胚层发育紊乱。结论 叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎体轴发育异常以及轴中胚层发育紊乱,但对Nodal信号通路无明显干扰作用。     

肝细胞生长因子结构和功能研究进展

肝细胞生长因子是一种能够促进肝细胞分裂增殖的多效性细胞因子 .它是由一条重链和一条轻链组成的异二聚体 ,其中重链由 N端和 4个 Kringle区组成。目前 ,NK1的晶体结构已经解出 ,在 N端有肝素糖蛋白结合区 ,HGF分子与肝素糖蛋白的相互作用对 HGF分子二聚化和内吞清除都有重要意义。 Kringle区的空间取向对HGF分子与受体结合非常重要 ,其中 K1、K2发挥重要作用 ,而 K3、K4发挥辅助作用。轻链有促进受体酪氨酸磷酸化的作用     

母乳中烷氧基甘油含量的测定

目的探讨哺乳期妇女乳汁中烷氧基甘油(AKGs)含量及其变化规律。方法选取2011年6月至2012年6月足月单胎分娩的健康产妇5例,收集哺乳期第1、2、3、4、8、12、16、20、24周母乳用于AKGs测定。母乳样品经萃取、皂化、提取、衍生化处理后,通过气质联用色谱内标法对母乳中AKGs成分进行定量分析。结果母乳中16C∶0 AKG含量逐渐降低,均值从(17.31±3.59)×10-3g/L降低到(11.14±1.83)×10-3g/L,而18C∶0 AKG均值从(14.95±6.00)×10-3g/L下降到(9.68±2.51)×10-3g/L,18C∶1 AKG均值在(4.64±0.91)×10-3g/L到(3.95±0.68)×10-3g/L之间。结论通过气质联用色谱内标法检测到哺乳妇女母乳中存在16C∶0、18C∶0和18C∶1三种AKG,其浓度在哺乳期不同阶段有所改变。