高糖对原代培养血管内皮细胞[Ca2+]i和分泌LN及IV-C的影响

目的旨在探讨体外培养条件下高糖状态对血管内皮细胞的影响.方法以原代培养人脐带静脉内皮细胞为材料,用Fura-2荧光检测法观察高糖对原代培养血管内皮细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,用放射免疫分析法观察高糖作用下血管内皮细胞分泌基底膜蛋白成分Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)和层粘连蛋白(LN)的情况.结果在11.11mmol/L、16.67mmol/L和33.33mmol/L糖浓度下培养24小时,血管内皮细胞[Ca2+]i分别升高了1.74、2.84和6.74倍.发现不同糖浓度作用下血管内皮细胞分泌Ⅳ-C的量均无变化;在16.mmol/L糖浓度下培养24小时血管内皮细胞分泌LN的量下降了26.69%.结论在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞[Ca2+]i升高,而对血管内皮细胞分泌LN起抑制作用,对Ⅳ-C的分泌无明显影响.在糖尿病微血管病变早期,高糖可能通过血管内皮细胞[Ca2+]i升高而起主要作用.     

高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及caspase-9、caspase-3表达的影响

目的探讨高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、caspase-3表达的影响,进一步探讨其加重脑缺血损伤的作用机制。方法将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:高血糖组、正常血糖组和假手术组。按体质量4g/kg给予大鼠尾静脉注射25%(质量浓度)的葡萄糖,造成大鼠高血糖状态;继而制作大脑中动脉阻塞脑缺血再灌注模型。于缺血2h再灌注24h进行神经功能评分,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(terminal-deoxy-nucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡数,采用免疫组化染色检测大鼠脑组织caspase-9和caspase-3表达。结果 (1)高血糖组神经功能评分为(4.20±0.63)分,正常血糖组为(3.50±0.70)分,假手术组为0分。高血糖组及正常血糖组的神经功能评分较假手术组均显著增加(P<0.05),且高血糖组神经功能评分较正常血糖组增加(P<0.05)。(2)高血糖组凋亡细胞数为(16.30±3.30)个,正常血糖组为(14.60±3.27)个,假手术组为(0.50±0.53)个。高血糖组及正常血糖组的凋亡细胞数较假手术组增多(P<0.05),且高血糖组细胞凋亡数较正常血糖组增多(P<0.05)。(3)高血糖组caspase-9和caspase-3灰度值分别为114.30±3.83、111.50±3.17,正常血糖组分别为117.20±4.34、117.40±3.24,假手术组分别为146.20±1.98、146.80±0.74。高血糖组及正常血糖组的caspase-9和caspase-3表达水平较假手术组均增强(P<0.05),且高血糖组caspase-9和caspase-3表达水平较正常血糖组增强(P<0.05)。结论高血糖可增加缺血再灌注后脑神经细胞凋亡;caspase-9、caspase-3的激活及表达增强可能是高血糖加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

多种教学方式在生物化学教学中的实践与收获

生物化学是一门重要的医学基础课程,与多种学科有密切关系,越来越成为生命学科的共同语言,在医学及生物类专业的学生培养中具有十分重要的地位。由于其内在知识结构系统性强、内容抽象、缺乏直观性,教学过程又受到其他基础学科的制约,严重影响了学生的学习兴趣和教学效果。同时,生物化学教学中普遍存在着教学时间有限性和知识增长无限性的矛盾。要解决好这一矛盾,保证知识、能力、素质的协调发展,关键是深化教学内容和教学方式的改革,充分利用有限的授课时间最大限度的提高教学效率和效果;我们在以往的生化课程教学中注重丰富多种教学方式的实践,激发了学生的学习兴趣、调动学生学习的积极主动性,获得了较为明显的教学效果。     

硕士研究生分子生物学实验技术教学改革初探

为提高硕士研究生分子生物学实验技术的教学质量,在教学内容的选择、教学方法的改进、实验设施的分配与利用、考核体制的建立等方面进行改革,取得了较好效果,为研究生今后的科学研究和实际应用奠定基础.     

高糖对原代培养血管内皮细胞[Ca^2＋]i和分泌LN和IV—C的影响

目的：旨在探讨体外培养条件下糖状态对血管内皮细胞的影响。方法：以原代培养人脐带静脉内皮细胞为材料，用Fura-2荧光检测法观察高糖对原代培养血管内皮细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i）的影响，用放射免疫分析法观察高糖作用下血管内皮细胞分泌基底膜蛋白成分Ⅳ型胶原蛋白（IV－C）和层粘连蛋白（LN）的情况。结果：在11．11mmol/L、16.67mmol/L和33.33mmol/L糖浓度下培养24小时，血管内皮细胞[Ca^2 ]i分别升高了1．74、2．84和6．74倍。发现不同糖浓度作用下血管内皮细胞分泌IV－C的量均无变化；在16．67mmol/L糖浓度下培养24小时血管内皮细胞分泌LN的量下降了26．69％。结论：在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞[Ca^2 ]i升高，而对血管内皮细胞分泌LN起抑制作用，对IV－C的分泌无明显影响。在糖尿病微血管病变早期，高糖可能通过血管内皮细胞[Ca^2 ]i升高而起主要作用。     

抑制消减杂交筛选乳腺癌相关基因

目的:为了研究乳腺癌发生的分子遗传学机理,分离克隆模型鼠乳腺癌组织中特异表达的基因.方法:利用抑制消减杂交技术,结合反向cDNA斑点杂交试验,小鼠乳腺癌组织中分离出与正常乳腺组织差异表达的EST,应用生物信息学方法鉴定所得EST的小鼠同源基因,并分析其与乳腺癌发生的相关性.结果:获得20个在小鼠乳腺癌组织中高表达的,与已知的小鼠基因片段高度同源的基因,及2个与数据库中提交的假想蛋白基因高度同源的基因.结论:利用抑制消减杂交技术,可以高效高通量分析在乳腺癌中特异表达的基因,探讨乳腺癌发生的分子机制.     

高糖对原代培养人血管内皮细胞TGF-β基因表达和分泌LN及C-IV的影响

小研究旨在探讨体外培养条件下高糖状态对人血管内皮细胞的影响。以原代培养人脐带静脉内皮细胞为材料,采用RT-PCR技术观察高糖状态下原代培养血管内皮细胞转化生长因子β(TGF-β)基因表达水平,用放射免疫分析法观察高糖作用下的血管内皮细胞分泌基底膜蛋白成分IV型胶原蛋白(IV-C)及从粘连蛋白(LN)的情况。在16.67mmol/L D-葡萄糖浓度作用6、12和24h,血管内皮细胞TGF-β基因表达分别增高了0．38、1．22和1．43倍,而血管内皮细胞分泌IV-C的量无变化;和16.67mmol/L糖浓度下培养24h血管内皮细胞分泌LN的量下降了55．60％。结果显示在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞TGF-β基因表达增强,而对血管内皮细胞分泌LN起抑制作用,对IV-C的分泌无明显影响。在微血管病变早期,高糖可能通过血管内皮细胞TGF-β基因高表达而起主要作用。