人单核细胞趋化因子受体5〔CCR5）N—端膜外第一襻特异抗体F〔ab′）2的制备及鉴定

目的：研究人β趋化因子受体5(huCCR5)NH2端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定方法。方法：计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2端膜外第一襻，PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX-1N中，经测序鉴定正确后，在E．coli中表达，纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白-Sepharose CL-4B亲和层析纯化后，用胃蛋白酶消化IgG，经S—200凝胶过滤柱分离制备F(ab′)2。结果：经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2端的特异性抗体。结论：这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′)2的制备方法，对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料，同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。     

一种新的胸腺素α原cDNA

我们克隆了有中国人特征的胸腺素α原全长ｃＤＮＡ,并进行测度分析。方法从健康中心人ＰＢＭＣＰｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ,酶切鉴定,序列分析,结果经测序后发现该基因是一个国外的高加索人种胸腺素α原有８６．４％,同源性的新基因。结论从中国人中新发现了一个ｈｕＰＴＭＡα基因,并于日前被美国ＮＣＢＩ（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒ ｏｆ ｂＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹｉＮ     

重组人肿瘤坏死因子α的抗病毒活性

本文旨在进一步了解重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)的生物学活性。首先在大肠杆菌中克隆出编码TNE-α的基因:裂菌,进而用一系列层析技术从不溶性物质中将TNF-α纯化至均一程度。重新折叠变性蛋白,该重新折叠的TNF-α在小鼠L929细胞上的溶细胞作用达1×10~7U/mg。4℃保存TNF-α。检测按Spofford的改良方法将小鼠L929(获自ATCC,CCl-1)或Hela细胞分别以12500或20000细胞/孔种于96孔平底微滴板上。培养24小时,加入TNF-α,继续培养48小时后,细胞溶解,用0.5%结晶紫溶液染色观察结果。对照细胞仅用培养基,以细胞溶解50%为1个单位。用标准细胞致病作用(CPE)测定抗病毒活性。用TNF-α处理Hela细胞,以脑心肌     

用生物反应器制备Namalva细胞干扰素的实验研究

<正> 干扰素(IFN)主要通过有关细胞按正中心法则合成一类特殊蛋白质来阻止病毒的复制过程,同时又作用于T、B淋巴细胞和NK细胞来发挥免疫调节作用。我室从八十年代初对Namalwa细胞IFN进行了系列化研究,包括制备工艺、IFN纯化、核酸检测、抗肿瘤、抗病毒和临床试用。目前采用日本MSJ-U_3T型30立升带有“自动生物传感系统”的装置,通过该装置,可对细胞生长条件如T(温度)、pH、DO(溶氧)、AGIT(搅拌)     

A study on improvement of expression of human G－CSF cDNA transferred with retroviral double－copy vector

ＡｓｔｕｄｙｏｎｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＧ－ＣＳＦｃＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｗｉｔｈｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｏｕｂｌｅ－ｃｏｐｙｖｅｃｔｏｒＧｕｏＢａｏｙｕ（郭葆玉）；ＺｈａｎｇＳｕｙｉｎｇ（张淑英）；ＸｕＨｕｉ...     

双向电泳分析CCR5对二氢叶酸还原酶表达的抑制作用

目的:采用双向电泳为基础的蛋白质组学的研究手段,发现趋化因子受体5被配体激活后的功能相关蛋白质.方法:构建稳定表达CCR5的HEK-293细胞株.用RANTES刺激12 h后,用双向电泳方法进行分析.在以PDQuest图像分析软件进行分析后,对表达有差异的蛋白质进行MOLDI-TOF MS/MS质谱鉴定,并对鉴定的蛋白作RT-PCR初步分析.结果:流式细胞仪检测结果表明HEK-293细胞稳定表达CCR5,在受RANTES刺激后作双向电泳分析并经质谱鉴定后,发现二氢叶酸还原酶表达降低,与RT-PCR检测结果相一致.结论:经蛋白质学组方法分析,发现CCR5被其配体RANTES激活后抑制了二氢叶酸还原酶的表达.     

人胸腺素原α的克隆、表达和活性初步研究

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础.方法:PCR扩增制备分别编码Protein A的A、D结构域、Protein G的B2结构域和Protein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入Xba Ⅰ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD-18T载体构建重组质粒.以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性.结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布.结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求.     

重组人胸腺素α原生物活性的体外研究

目的　对本室克隆并表达的一种胸腺素α原 (humanprothymosinα ,ProTα)的生物活性进行体外实验研究。 方法　体外对其促进E 玫瑰花结形成率 ,在ConA存在下及单独使用ProTα对小鼠胸腺细胞的促增殖作用 ,以及对细胞活素IL 2 ,IFN γ的促诱生作用进行检测。结果　在高浓度时 (1× 10 -7mol·L-1) ,对人外周血单核细胞E 玫瑰花结形成的激活率可达 5 2 .7%。无论有无ConA ,1× 10 -7,1× 10 -8mol·L-1的ProTα明显刺激小鼠胸腺细胞增殖 (P <0 .0 1) ;此外 ,一定浓度的ProTα能促进IL 2 ,IFN γ的分泌 (P <0 .0 5 )。结论　ProTα具有明显刺激小鼠胸腺细胞增殖和促进IL 2 ,IFN γ分泌的生物活性     

重组huMCP-1融合蛋白对人外周血单核细胞体外溶瘤活性的影响

目的：研究重组人单核细胞趋化蛋白－１（huＭＣＰ－１）融合蛋白对人外周血单核细胞体外溶瘤活性的影响。方法：采用乳酸脱氢酶释放法检测huＭＣＰ－１单独或与细胞因子协同作用下的单核细胞溶瘤活性。结果：１０ug/ml的重组huＭＣＰ－１可促进人单核细胞对人胃腺癌细胞ＳＧＣ－７９０１和Ｈce-８６９３细胞的溶瘤作用方面具有协同作用（Ｐ＜０ ．０１）。１００Ｕ/ml的ＩＦＮγ与１ug/ml的重组hrＭＣＰ－１在增强单核细胞对ＳＧＣ