重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆和表达

目的：克隆人KGF-2基因，并在大肠杆菌中进行表达。方法：通过PCR扩增，从人胎肝cDNA文库中获得编码人KGF-2的cDNA，并将其分别克隆入pBV220，pLEX和pGEX4T-1质粒中，研究其在不同表达质粒和大肠杆菌中的表达情况。结果：克隆得到的KGF-2cDNA经测序证明与文献报道的序列一致。将其克隆于pBV220质粒中，在E．coli JM109中表达量相对最高，约占茵体总蛋白的4％；克隆于pLEX质粒中，在E．coli G1724中的表达量约占全茵总蛋白的5％；克隆于pGEX4T-1中，在E．coli JM109中的表达量可占到全茵总蛋白的20％。结论：采用GST融合蛋白表达质粒pGEX4T-1对KGF-2进行表达，较pBV220和pLEX具有明显优势，能实现对KGF-2的高效表达，为进一步的功能研究奠定了基础。     

重组人血管生成素的生物学功能研究

为深入了解血管生成素的生物学作用，探讨其在免疫、造血、血管新生和神经方面可能的生物学功能，我们选择了多种细胞和组织进行实验分析ANG研究。结果表明：其对ECV304和COS7细胞具有促增殖作用，并可观察到明显的促ECV304细胞贴壁的作用；Ang具有明显地促KG—1a增殖的作用，其具体的分子机制有待于进一步的深入研究；Ang对造血干细胞形成集落没有作用，同时发现亦不存在与GM—CSF的协同作用；Ang缺乏直接对鸡胚背根神经节的作用，但可能对胶质细胞的生长有一定的影响。     

利用目的基因随机表位库筛选葡激酶抗原决定簇

目的：用目的基因随机表位库方法寻找葡激酶(straphylokinase SAK)的显性表位。方法：①SAK免疫BALB／C小鼠，免疫亲和层析纯化抗血清后，抗SAK抗体用生物素标记；②构建SAK随机表位肽库，随机挑取12个独立克隆测序，分析库DNA片段的分布和碱基含量情况；③以多抗为靶蛋白用克隆原位杂交法筛选肽库；④构建SAK的缺失突变体mSAK，Western blot分析mSAK的免疫反应性。结果：①筛选肽库得到一个由19个氨基酸组成的免疫显性表位区，命名为A1区；②mSAK不能与抗SAK多抗反应。结论：用简便、有效的方法筛选得到了SAK的一个表位A1区，初步确定A1区是SAK引起免疫反应的重要区域。     

IL-1RA-PEP融合蛋白的构建及其对脑缺血再灌注后细胞凋亡的抑制作用研究

目的 构建白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)与细胞渗透肽(PEP-1)融合蛋白,探讨其对脑缺血再灌注(I/R)后神经细胞凋亡的抑制作用.方法 构建IL-1 RA与PEP-1融合基因,通过诱导表达和分离纯化,制备IL-1 RA-PEP融合蛋白.建立大鼠大脑中动脉阻断模型(MCAo),形成I/R损伤,静脉注射IL-1 RA-PEP,24 h后检测其在大鼠脑组织的分布,以及脑组织梗死体积,炎性细胞浸润和神经细胞凋亡情况,并分析相关凋亡蛋白的表达变化.结果IL-1 RA-PEP融合蛋白具有拮抗IL-1的生物学活性,其能有效地渗透进入I/R大鼠脑组织.给药24 h后,缺血半球脑梗死体积和神经细胞凋亡数量减少,胱天蛋白酶(caspase)3和9等凋亡蛋白表达水平下降,同时Bcl-xL抗凋亡蛋白表达水平升高.结论IL-1RA-PEP融合蛋白能有效地渗透I/R大鼠脑组织,通过对相关凋亡蛋白的调控,抑制了I/R后脑组织神经细胞凋亡,对I/R损伤具有治疗作用.     

人嗜酸性细胞趋化素基因cDNA的分离及序列分析

目的：分离编码人嗜酸性细胞趋化素的基因ｃＤＮＡ,并将它克隆至质粒ＰＵＣ１８中进行核苷酸序列分析。方法：采用ＴＮＦα刺激人肺上皮细胞提取总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＣＰＲ方法获得了ｈＥｏｔ的ＣＤＮＡ,并将其定向插入ＰＵＣ１８载体中进行核苷酸序列。结果：ＤＮＡ序列分析表明分离的ｈＥｏｔｃＤＮＡ的序列与文献报道的完全一致。结论：本研究获得了序列正确的ｈＥｏｔ基因ｃＤＮＡ,为下一步的研究打一了基础。     

血管生成素在COS-7细胞中的表达及其生物活性研究

本研究旨在实现血管生成素（ANG）在真核细胞中的表达并探讨其生物学功能。通过RT—PCR获得ang基因，构建真核表达载体pcDNA3．1-ang，在转染COS-7细胞后进行瞬时表达，通过Western blot对表达产物进行鉴定。利用MTT法分析表达上清对ECV304细胞的促增殖作用，同时利用鸡胚分析表达上清的促血管生成作用。结果表明：瞬时转染后细胞培养上清中有重组ANG的表达，并能与抗-ANG单克隆抗体发生特异性反应。与转染空载体的对照相比．转染pcDNA3．1-ang的细胞培养上清具有促进ECV304细胞增殖的作用，并能显著促进鸡胚尿囊膜血管生长。结论：ang可在COS-7细胞中瞬时表达，其表达产物具有显著的促细胞增殖和促进血管生成的作用。     

磷脂转运蛋白在毕赤酵母中的高效表达

为深入了解磷脂转运蛋白的结构和功能，从中国人胎肝组织总RNA成功克隆了磷脂转运蛋白成熟肽基因，所得磷脂转运蛋白基因通过同源重组整合至毕酵母细胞染色体的氧化酶AOX1基因中，甲醇诱导后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示诱导表达蛋白分子量约为75kDa，薄层扫描显示表达蛋白中酵母蛋白总量的28%，为大量制备重组磷脂转运蛋白奠定了基础。     

A/H1N1流感的流行特点及防治

2009年3月底至今,墨西哥、美国等地接连暴发新型A/H1N1流感病毒(早期也称为猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)疫情,已造成超过177人死亡,不但放缓了全球经济复苏的脚步,更为严重的是造成越来越多的人面临死亡的威胁,并引起了人们对新型流感病毒的巨大恐慌.本文对A/H1N1型流感的概况、公共卫生等方面进行阐述,使人们对流感病毒有一定的认识,在提高自我保护意识的同时去除不必要的担心.     

人白介素22对刀豆蛋白A致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的建立小鼠急性肝损伤模型,分析和评价人白介素22在小鼠急性肝损伤模型中的保护作用。方法利用刀豆蛋白A致小鼠急性肝损伤模型,分析并评价模型效果。在此基础上将雌性小鼠随机分为正常组、保护组及模型组;保护组和模型组分别尾静脉注射重组IL-22蛋白和生理盐水6h后,尾静脉注射ConA致小鼠急性肝损伤,正常组尾静脉注射等量生理盐水。16h后检测小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）活性,同时取小鼠肝组织进行病理学检查。结果IL-22能明显降低小鼠血清的ALT、AST水平,减轻ConA对肝组织的病理损伤。结论IL-22对ConA致小鼠肝损伤具有保护作用。为进一步研究其保护作用机制奠定了基础。     

珍宝岛地区“三班倒”吸血昆虫的研究 Ⅰ.“三班倒”吸血昆虫的组成概况

一、前言珍宝岛地区系指黑龙江省虎林县和饶河县沿乌苏里江接壤地带,位于东经133°30′—134°18′和北纬46°20’—47°20′之间,属我国昆虫地理区划松黑北温地带草原区的三江草甸省(图1)。该地区夏季不热,冬季严寒,一年中日平均温度超过22℃的通常不超过45天,一月份平均温度在-24°——17℃之间。年降雨量通常在600毫米左右。