人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

目的 构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测。方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体。PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒。体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达。结果 成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL。体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达。结论 构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎冶疗奠定实验基础。     

改善单纯性肥胖大学生身体成分的运动处方

目的:采用有氧运动处方对大学生单纯性肥胖进行干预,观察食干预条件下合理有氧运动配合静力练习的运动处方对治疗单纯性肥胖的作用。方法:2004-03/06,选定南华大学2003级男性重度单纯性肥胖大学生20名,随机选取自愿参加运动者10名作为运动组,另外10名作为对照组。对20名单纯性肥胖大学生进行体质量、血压、体脂和血脂(总胆固醇:用酶反应试剂药盒测定,三酰甘油:乙酰丙酮微量测定法)检测,并为运动组10名大学生开出运动处方,运动处方分为4个阶段,即1～5/6～10/11～14/15～18周)。每次训练时间50～80min,运动频度为3～5次/周,共18周。运动强度基本维持在:靶心率(次/min)=最大心率×(50%～70%),最大心率(次/min)=220-年龄。主要内容为静力练习和有氧跑,再灵活安排一些学生喜好的运动项目,跑的距离和时限随训练阶段的推移,强度呈阶梯式上升,训练中未对受试者进行饮食干预。对照组正常参加体育课和课外体育活动,不改变生活方式与节奏。观察两组大学生运动前后的体质量、体脂、血压及血脂变化。结果:参与观察的男性重度单纯性肥胖大学生20名全部进入结果分析,无脱落者。运动组训练18周后与对照组相比,体质量、体脂、血压均有所下降。其中体质量、收缩压、舒张压差异有显著性[(72.8±3.4),(87.9±2.9)kg;(114.0±2.25),(124.5±3.0)mmHg(1mmHg=0.133kPa);(66.8±3.8),(69.8±3.0)mmHg,t=4.65,3.76,3.27,P<0.05]。运动训练18周后,10名学生血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、载脂蛋白AI均值均有不同程度的下降,其中三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白B与运动前比较,差异有显著性意义[(1.2±0.1),(1.9±0.2)mmol/L;(4.3±0.0),(0.9±0.0)mmol/L;(0.5±0.0),(0.8±0.0)g/L;t=3.67,5.31,5.11,P<0.05]。结论:非饮食干预条件下的有氧运动配合静力练习有助于降低单纯性肥胖大学生的血压、体脂和体质量,增强运动能力,改善血脂代谢水平。     

人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

目的构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测.方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体.PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒.体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达.结果成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL.体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达.结论构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎治疗奠定实验基础.     

高校篮球运动员的运动创伤流行病学调查

对全国9年高校高水平篮球代表队149名运动员进行运动创伤流行病学调查，结果共查出14种损伤，有伤者51人，患病率为34．23％，作者针对问题提出一些对策，以尽可能减少损伤的发生。     

鞘内转染白细胞介素-10基因对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用

目的 探讨鞘内转染白细胞介素-10（IL-10）基因对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用。方法雌性SD大鼠，体重230～250g，坐骨神经压榨性损伤（CCI）后3d出现热痛觉过敏大鼠随机分为基因治疗组（pcDNA3．1-IL-10组）、真核表达载体组（pcDNA3．1组）、生理盐水组（NS组）和CCI组（n=12），前3组分别经蛛网膜下腔注射pcDNA3．1-IL-10/脂质体复合物、pcDNA3．1/脂质体复合物或生理盐水30μl，另取12只雌性SD大鼠为假手术组（Sham组），仅暴露右侧坐骨神经而不予压榨，亦不行蛛网膜下腔注射。转染后2、7、7、10、14d热辐射法测定大鼠热痛阈；RT-PCR检测转染后3d坐骨神经、腰段脊髓、海马组织IL-10mRNA的表达，ELISA法检测上述组织、血浆及转染后1-10d脑脊液中IL-10水平；细胞毒性法检测转染后14d坐骨神经、腰段脊髓、海马和血浆TNF-α水平。结果转染后2～14dCCI组热痛阈长于Sham组，而pcDNA3．1-IL-10能逆转热痛阈延长；pcDNA3．1-IL-10组转染后3d坐骨神经、腰段脊髓、海马等组织可检测到IL-10mRNA，且IL-10含量升高，脑脊液IL-10浓度在转染后1～7d升高，转染后14d坐骨神经、腰段脊髓、海马等TNF-α含量降低（P〈0．05）。结论鞘内转染IL-10能通过抑制炎症反应在一定程度上减轻大鼠神经病理性疼痛。     

细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验

目的 :采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad -CMV -hEn。方法 :将hEn基因自 pCA13-hEn质粒中酶切下来 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒 pAdtrack -CMV -hEn ,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒 pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA ,PacⅠ酶切后在 2 93细胞中包装成腺病毒颗粒。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,同时测定了病毒滴度。并采用RT -PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEnmRNA的转录。结果 :由 pAdtrack -CMV -hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183后 ,可得到阳性重组体细菌克隆 ,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因。纯化所得腺病毒滴度约为 2 .4× 10 11pfu /ml。RT -PCR证实在感染重组体腺病毒Ad .CMV -hEN的细胞中有相应mRNA的转录。结论 :细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所构建的Ad -CMV -hEn在体外能有效转录相应的mRNA。     

腺病毒介导人血管抑素抑制乳腺癌生长的研究

目的：研究腺病毒介导的重组人血管抑制Plasminogen K5基因对乳腺癌的治疗作用。方法：通过PCR将人血纤维蛋白酶原的信号肽基因加至Plasminogen的K5结构域基因，克隆到质粒pCA13，并在293细胞中同源重组，得到腺病毒AdK5。将Ad-K5体外感染乳腺癌细胞B－Cap-37和血管内皮细胞ECV304，观察其对细胞生长的影响，同时在乳腺癌的裸鼠动物模型上，检测其对肿瘤生长的抑制作用。结果：在感染Ad-K5的B－Cap-37细胞中检测到K5基因mRNA的表达。Ad-K5对血管内皮细胞ECV304有抑制作用，但对癌细胞B-Cap-37没有直接抑制作用。动物实验表明Ad-K5能显著抑制肿瘤的生长。结论：K5基因能抑制乳腺癌实体瘤的生长。     

改善单纯性肥胖大学生身体成分的运动处方

目的：采用有氧运动处方对大学生单纯性肥胖进行干预，观察食干预条件下合理有氧运动配合静力练习的运动处方对治疗单纯性肥胖的作用。 方法：2004—03／06，选定南华大学2003级男性重度单纯性肥胖大学生20名，随机选取自愿参加运动者10名作为运动组，另外10名作为对照组。对20名单纯性肥胖大学生进行体质量、血压、体脂和血脂（总胆固醇：用酶反应试剂药盒测定，三酰甘油：乙酰丙酮微量测定法）检测，并为运动组10名大学生开出运动处方，运动处方分为4个阶段，即1～5／6～10／11-14／15～18周）。每次训练时间50～80rain，运动频度为3-5次／周，共18周。运动强度基本维持在：靶心率（次／min）=最大心率&;#215;（50％～70％），最大心率（次／min）=220-年龄。主要内容为静力练习和有氧跑，再灵活安排一些学生喜好的运动项目，跑的距离和时限随训练阶段的推移，强度呈阶梯式上升，训练中未对受试者进行饮食干预。对照组正常参加体育课和课外体育活动，不改变生活方式与节奏。观察两组大学生运动前后的体质量、体脂、血压及血脂变化。 结果：参与观察的男性重度单纯性肥胖大学生20名全部进入结果分析，无脱落者。运动组训练18周后与对照组相比，体质量、体脂、血压均有所下降。其中体质量、收缩压、舒张压差异有显著性[（72．8&;#177;3．4），（87．9&;#177;2．9）kg；（114．0&;#177;2．25），（124．5&;#177;3．0）mmHg（1mm Hg=0．133kPa）；（66．8&;#177;3．8），（69．8&;#177;3．0）mmHg，t=4．65，3．76，3．27，P〈0．05]。运动训练18周后，10名学生血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B、载脂蛋白AI均值均有不同程度的下降，其中三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇及载脂蛋白B与运动前比较，差异有显著性意义[（1．2&;#177;0．1），（1．9&;#177;0．2）mmol／L；（4．3&;#177;0．0），（0．9&;#177;0．0）mmol／L；（0．5&;#177;0．0），（0．8&;#177;0．0）g／L；t=3．67，5．31，5．11，〈0．05]。 结论：非饮食干预条件下的有氧运动配合静力练习有助于降低单纯性肥胖大学生的血压、体脂和体质量，增强运动能力，改善血脂代谢水平。     

人白细胞介素10 cDNA重组质粒在细胞和大鼠体内的转染和表达

目的研究人白细胞介素10（hIL-10）cDNA重组质粒的转染和表达,为以后的基因治疗研究奠定基础。方法构建hIL-10 cDNA真核表达重组质粒pcDNA3-hIL-10后进行酶切和测序鉴定。以SA脂质体介导对照质粒pcDNA3及重组质粒pcDNA3-hIL-10转染COS7细胞和SD大鼠,用ELISA方法检测COS7细胞培养液及大鼠胰腺、肺和肝脏组织中hIL-10的含量。结果用pcDNA3-hIL-10质粒转染COS7细胞48 h后,在培养液中检测到hIL-10蛋白浓度为38 000 pg／mL,而对照组仅为55 pg／mL。hIL-10基因转染24 h后大鼠胰腺、肺和肝脏组织hIL-10的产生量达到峰值,以后逐渐下降,至96 h仍显著高于对照组（P〈0．05）,1周后降至正常水平。结论本研究构建的pcDNA3-hIL-10重组质粒可以在真核细胞及大鼠体内高效表达。