肝细胞肝癌SMMC-7721细胞中FOXQ1基因沉默对奥沙利铂的化疗增敏作用

目的观察沉默肝癌SMMC-7721细胞中叉头框Q1(FOXQ1)基因的表达对奥沙利铂敏感性的影响。方法 (1)构建靶向FOXQ1基因的shRNA重组慢病毒载体及阴性对照重组慢病毒载体,再筛选最佳的干扰序列。(2)将细胞分为3组:干扰组(转染FOXQ1-sh RNA-1重组慢病毒载体)、阴性对照组(转染阴性对照重组慢病毒载体)及空白对照组(未做任何处理)。检测3组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达。(3)将另一部分细胞分为干扰组、阴性对照组、空白对照组、干扰+奥沙利铂、阴性对照+奥沙利铂组与空白对照+奥沙利铂组,给予相应处理,培养48 h后检测细胞凋亡率。细胞活力实验方法同细胞凋亡率实验。结果 (1)FOXQ1-shRNA-1组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达水平均低于FOXQ1-shRNA-2组和FOXQ1-shRNA-3组(P0.05),为最佳干扰序列。(2)干扰组细胞中FOXQ1 mRNA及其蛋白的表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05),但阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。(3)不管是在加入OXA条件下,还是在未加入OXA条件下,干扰组细胞的凋亡率均高于阴性对照组与空白对照组(P0.05),细胞活力均低于阴性对照组和空白对照组(P0.05),但同条件下阴性对照组和空白对照组的细胞凋亡率和细胞活力比较差异均无统计学意义(P0.05);在干扰组、阴性对照组和空白对照组中,均是加入OXA组的细胞凋亡率高于未加入OXA组(P0.05),加入OXA组的细胞活力低于未加入OXA组(P0.05)。结论沉默FOXQ1基因的表达能够有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,并增加其对奥沙利铂的化疗敏感性。     

钙释放激活钙通道调节分子1促进结肠癌细胞系SW480的迁移和侵袭

  目的  探讨钙释放激活钙通道调节分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1）对SW480迁移和侵袭的影响及其机制。  方法  以ORAI1干扰慢病毒感染SW480细胞,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中ORAI1mRNA和蛋白的表达,Transwell小室、黏附实验、血管形成及拟态分别检测细胞侵袭、迁移能力,同、异种细胞间黏附及血管生成能力,激光共聚焦显微镜检测细胞钙内流（store-operated Ca2+ entry,SOCE）,Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-2、VEGF和E-cadherin蛋白的表达。  结果  SW480转染ORAI1干扰慢病毒72h后,可见明显的荧光表达;较空病毒组和（或）对照组,干扰组ORAI1的表达降低（P < 0.01）;侵袭和迁移能力减弱（P < 0.01）;同种黏附能力增强（P < 0.05）;异种黏附能力减弱（P < 0.05）;血管生成能力减弱（P < 0.01）;SOCE内流峰值降低（P < 0.05）;p-ERK1/2、MMP-2和VEGF的表达降低（P < 0.01）、E-cadherin表达增加（P < 0.01）。  结论  ORAI1可以促进SW480的迁移和侵袭,其机制可能与SOCE增加有关。      

基于SEER数据的原发性小肝癌肝切除术后生存率列线图模型的构建及验证

目的基于SEER数据和中国数据建立并验证原发性小肝癌肝切除术后总生存率列线图模型。方法提取2004年—2015年美国国立癌症研究所SEER数据库所登记的原发性小肝癌接受肝切除术治疗的1809例患者资料作为建模组;收集2010年—2017年在川北医学院附属医院接受肝切除术治疗的小肝癌患者158例为验证组。采用单因素Cox风险回归、lasso回归、多因素Cox风险回归分析小肝癌患者肝切除术后OS的影响因素。根据OS的独立影响因素构建列线图模型,利用一致性指数(C-index)、绘制校准曲线及ROC曲线检验模型的预测能力。利用Kaplan-Meier生存分析和log-rank检验分析高、低风险组间的生存差异。结果多因素Cox风险回归分析发现性别(HR=1.22, 95%CI:1.05～1.41,P=0.010)、Seer分期(HR=1.51,95%CI:1.23～1.85,P<0.001;HR=10.31,95%CI:2.53～42.04,P=0.001)、肿瘤直径(HR=1.22,95%CI:1.06～1.39,P=0.004)、脉管侵犯或转移(HR=1.43,95%CI:1.24～...     

FOXQ1 介导TGF-β1 信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞体外血管生成

目的：探讨沉默叉头框蛋白Q1（forkhead box Q1,FOXQ1）基因对胰腺癌PANC-1 细胞体外血管生成的影响及其在转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）信号通路中的作用。方法：用FOXQ1-shRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒（NC-shRNA）感染PANC-1 细胞,流式细胞术检测感染率,实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blotting 法检测沉默效果。实验设FOXQ1-shRNA组、NC-shRNA组与空白对照组,用人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）进行体外血管生成实验,荧光显微镜下观察细胞血管生成能力。用qPCR、Western blotting 法检测VEGF-A、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平;用TGF-β1（终质量浓度5 ng/ml）诱导FOXQ1-shRNA组和NC-shRNA组细胞,检测诱导前后细胞体外血管生成能力变化与FOXQ1、VEGF-A、MMP-2 表达差异。结果：shRNA慢病毒感染率为90%左右,FOXQ1-shRNA组PANC-1 细胞的体外血管生成数目显著少于NC-shRNA组[ （9.33±2.08）vs（28.67±2.52）条,P<0.05],其VEGF-A、MMP-2 表达下调（均P<0.05）。TGF-β1 增强各组细胞体外血管生成能力,促进FOXQ1、VEGF-A、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平（均P<0.05）。结论：FOXQ1 介导了胰腺癌PANC-1 细胞体外血管生成,其机制可能与VEGF-A和MMP-2 的下调有关,且可能受TGF-β1 通路的调控。     

沉默FOXQ1基因抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞迁移侵袭能力

目的：探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法: 制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、阴性对照组和空白组,用Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中FOXQ1、MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果: 随着肝癌SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力的增强,FOXQ1的表达逐渐增加;干扰组较阴性对照组与空白组FOXQ1表达水平降低\[（0.34±0.03）vs（0.89±007）和（0.84±0.05）,P<0.05\];沉默FOXQ1基因后,SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力显著下降\[(9.67±1.15) vs （25.67±208）和(27.33±2.52),P<0.05\],MMP-2与MMP-9表达水平下降\[MMP-2：(0.35±0.04) vs (0.61±0.05)和(065±008);MMP-9： (0.40±0.05) vs (0.73±0.07)和(0.77±0.06),均P<0.05\]。结论: 沉默FOXQ1基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与MMP-2与MMP-9的表达下调有关。     

急性胰腺炎评分系统设计与研究

分析目前急性胰腺炎手工评估模式存在的问题,提出建立基于医院信息平台的急性胰腺炎评分系统,详细阐述系统设计与实现,包括网络架构、结构、流程、数据库管理平台、数据库设计等,指出该系统有助于提高临床医生工作效率、给予患者及时诊治。     

ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的： 检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。 方法： 采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5 的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。 结果： PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P＜0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72　h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组［(8.770±0.656)%］和阴性对照组［(8.763±1.201)%］比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论：ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。     

沉默Gli2基因对人肝癌细胞系SMMC-7721体外血管生成的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因2(Gli2)对肝癌细胞SMMC-7721体外血管生成作用及机制。方法设干扰组、对照组和空白组;构建靶向Gli2的shRNA重组慢病毒和阴性对照慢病毒,转染到SMMC-7721细胞,RT-q PCR和Western blot检测沉默效率;用体外血管生成实验检测血管生成能力;用ELISA检测SMMC-7721细胞上清液中VEGF-A、MMP-2分泌水平;用RT-q PCR、Western blot检测细胞内VEGF-A、MMP-2的表达差异。结果 shRNA慢病毒转染率为90%左右,干扰组与对照组和空白组相比Gli2表达降低(P0.05);血管生成能力减弱(P0.05);上清液中VEGF-A含量下降(P0.05);细胞中VEGF-A、MMP-2表达明显降低(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够抑制肝癌细胞SMMC-7721血管生成,其机制可能与VEGF-A、MMP-2的下调有关。     

miR-145对胰腺癌细胞系PANC-1上皮间质转化及肿瘤干细胞增殖的影响

目的探讨miR-145对胰腺癌细胞系PANC-1发生上皮间质转化(EMT)及肿瘤干细胞增殖的影响及相关机制。方法设miR-145组、对照组与空白组;构建miR-145过表达慢病毒,转染到PANC-1细胞系中;用RT-q PCR法检测各组miR-145的表达;用黏附试验检测细胞黏附能力的变化,用瘤球形成实验检测胰腺癌干细胞的形成;用RT-q PCR和Western blot检测E-cadherin、N-cadherin与OCT4的mRNA和蛋白质的差异。结果转染miR-145过表达慢病毒后能够明显增加miR-145的mRNA水平(P0.05);miR-145组比对照组与空白组PANC-1细胞同种黏附能力增加、异种黏附能力降低、抑制肿瘤干细胞球数量及直径(P0.05);miR-145组相比对照组与空白组,E-cadherin表达明显增高而N-cadherin和OCT4在mRNA与蛋白质表达均明显降低(P0.05)。结论上调miR-145能够促进胰腺癌细胞系PANC-1 EMT的逆转,降低胰腺癌肿瘤干细胞特性获得,其机制可能与E-cadherin的上调及N-cadherin和OCT4的下调有关。     

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。