参红补血颗粒对气滞血瘀型血管内皮功能障碍小鼠血管内皮的保护作用及其机制

目的 探讨参红补血颗粒（SBG）对气滞血瘀型血管内皮功能障碍（VED）模型小鼠血管内皮的保护作用和对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子（MyD88）、核因子 κBp65（NF-κB p65）及细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达水平的影响,阐明其相关作用机制。 方法 将60只昆明小鼠随机分为正常对照组、VED组、阳性对照组（0.62 g·kg^－1·d^－1 血府逐瘀胶囊）、低剂量SBG（3 g·kg^－1·d^－1）组、中剂量SBG（6 g·kg^－1·d^－1）组和高剂量SBG（9 g·kg^－1·d^－1）组,每组10只。除正常对照组外,其他各组小鼠采用冰水浴游泳法构建气滞血瘀型VED模型,连续给药造模21 d。观察各组小鼠行为表现,血液流变仪检测各组小鼠全血黏度,苏木精-伊红（HE）染色观察各组小鼠肺和胸主动脉组织病理形态表现,ELISA法检测各组小鼠血清血管性血友病因子（vWF）、血栓调节蛋白（TM）、ICAM-1、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平,试剂盒检测各组小鼠血清一氧化氮（NO）水平和胸主动脉组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及超氧化物歧化酶（SOD）活性。体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,分为正常对照组,叔丁基过氧化氢（TBHP）组,低、中和高剂量SBG组,除正常对照组外,其他4组HUVECs采用TBHP诱导HUVECs建立氧化损伤模型,采用MTT法检测各组HUVECs存活率,Western blotting法检测各组HUVECs中TLR4、MyD88、NF-κB p65和ICAM-1蛋白表达水平。 结果 与正常对照组比较,VED组小鼠抓力值和自主活动次数明显降低（P<0.05）, 全血黏度明显升高（P<0.05）; 与VED组比较,阳性对照组和低、中及高剂量SBG组小鼠抓力值均明显升高（P<0.05）,小鼠全血黏度明显降低（P<0.05）,阳性对照组和高剂量SBG组小鼠自主活动次数明显升高（P<0.05）。HE染色,与正常对照组比较,VED组小鼠肺组织出现明显的毛细血管扩张和淤血,并且组织伴有大量炎性细胞浸润;与VED组比较,阳性对照组和不同剂量SBG组小鼠肺泡壁毛细血管扩张和淤血的程度减轻,炎性细胞浸润数量明显减少,并呈剂量依赖性;与正常对照组比较,VED组小鼠胸主动脉内壁结构紊乱,出现缺损和脱落;与VED组比较,阳性对照组和不同剂量SBG组小鼠血管内膜的脱落损伤情况改善,内膜相对完整。与正常对照组比较,VED组小鼠血清vWF、TM、ICAM-1、TNF-α和IL-6水平明显升高（P<0.05）,血清NO水平以及动脉组织中GSH-Px和SOD活性明显降低（P<0.05）;与VED组比较,阳性对照组和高剂量SBG组小鼠血清vWF、TM、ICAM-1、TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05）,血清NO水平以及动脉组织中GSH-Px和SOD活性明显升高（P<0.05）。与正常对照组比较,TBHP组HUVECs存活率明显降低（P<0.05）,HUVECs中TLR4、MyD88、NF-κB p65和ICAM-1蛋白表达水平升高（P<0.05）;与TBHP组比较,高剂量SBG组HUVECs存活率明显升高（P<0.05）,HUVECs中TLR4、MyD88、NF-κB p65和ICAM-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。 结论 SBG可通过抑制氧化应激,缓解炎症反应,达到保护气滞血瘀型VED小鼠血管内皮的作用。     

黄芪对大黄诱导大鼠腹泻的治疗作用及其机制

目的 探讨黄芪对于大黄诱导腹泻大鼠肠道炎症、肠道屏障和肠道菌群的治疗作用,并阐明其可能的作用机制。 方法 50只大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组（2.468 g·kg^－1参苓白术散）、低剂量（1.35 g·kg^－1）黄芪组和高剂量（2.70 g·kg^－1）黄芪组,每组10只。采用大黄灌胃结合饮食不节复制大鼠腹泻模型,检测各组大鼠体质量、粪便含水量和腹泻评分;HE染色观察各组大鼠结肠组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠结肠组织中蛋白酶激活受体2（PAR-2）、磷酸化p38（p-p38）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）、闭锁蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、髓样分化因子88（MyD88）和核因子κB（NF-κB）蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠血清中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、丙二醛（MDA）和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;16S r DNA 基因测序分析各组大鼠肠道菌群情况。 结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量明显降低（P<0.01）,粪便含水量和腹泻评分明显升高（P<0.01）,血清中MTL和GAS水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠体质量明显升高（P<0.01）,粪便含水量和腹泻评分明显降低（P<0.01）,血清中MTL和GAS水平明显降低（P<0.01）。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠结肠组织上皮黏膜损伤,有大量炎症细胞浸润,腺体排列紊乱;与模型组比较,阳性对照组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构较规则,炎症细胞浸润较少,未见明显腺体紊乱,低剂量黄芪组大鼠结肠组织上皮黏膜结构可见轻微损伤,有部分炎症细胞浸润,腺体排列较整齐。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠结肠组织中PAR-2、MLCK、TLR4、TRAF6、MyD88、NF-κB、p-p38和p-MLC蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,ZO-1和Occludin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显升高（P<0.01）,IL-10和SIgA水平及SOD活性明显降低（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平明显降低（P<0.01）,IL-10和SIg A水平及SOD活性明显升高（P<0.01）。肠道菌群检测,在门水平上,与对照组比较,模型组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显升高（P<0.01）;与模型组比较,低和高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中变形菌门和疣微菌门丰度明显降低（P<0.01）,高剂量黄芪组大鼠肠道菌群中ε-变形菌门丰度明显升高（P<0.01）。 结论 黄芪对大黄诱导的腹泻模型大鼠有治疗作用,其机制可能与通过TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路抑制肠道炎症,进而修复肠道屏障,恢复肠道菌群组成有关。