耐药性淋球菌的三年监测

本文在1988年～1990年三年中,用11种常用抗菌药物对衡阳市淋病患者中所分离的644株淋球菌进行药物敏感性测定,从中检出耐药性淋菌株224株,占34.8％。检测结果表明,耐药菌株(尤其是青霉素、链霉素和四环素的耐药株)在三年中有明显增长(P<0.05);多重耐药株在耐药性淋球菌中亦有明显增长(P<0.05)。     

SARS病毒S蛋白部分片段B-细胞表位的多参数预测

目的预测SARS病毒S蛋白(spike glycoprotein)部分片段(aa No.400～600 & aa No.1 100～1 195)的B-细胞表位.方法应用多种参数和方法进行综合分析,包括跨膜分析、保守区分析、同源性比较、Hopp ＆ Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β-转角、万氏法等综合预测方法.结果显示B-细胞识别的表位可能在436～456和1 136～1 146残基或其附近,这两个被预测的表位均含有β-转角和不规则卷曲结构.结论本研究为应用合成肽抗原制备抗SARS病毒S蛋白抗体、诊断非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome, SARS)提供了依据.     

泌尿生殖道支原体临床分离株对7种抗菌药物的耐药性研究

目的 比较7种抗生索对泌尿生殖道支原体临床分离株的抗菌作用，指导临床用药。方法 采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中146株解脲脲原体(Uu)和92株人型支原体(Mh)对7种抗菌药物的耐药性。结果 146株Uu对四环索、多西环索、米诺环素、罗红霉索、阿齐霉索、交沙霉索、氧氟沙星的耐药率分别为34．2％、24．7％、28．1％、8．9％、4．8％、11．0％、和28．8％。92株Mh对四环索、多西环索、米诺环索、罗红霉索、阿齐霉索、交沙霉索、氧氟沙星的耐药率分别为55．5％、25．0％、45．7％、97．8％、100％、8．7％、和16．3％。耐四环索的Uu和Mh株对多西环索、米诺环索、交沙霉索以及氧氟沙星存在交叉耐药性。850例Uu和Mh混合感染者对交沙霉索的耐药率最低(8．1％)。结论 泌尿生殖道支原体的耐药性监测对指导临床治疗具有重要意义。     

问号状钩端螺旋体外膜蛋白Loa22的克隆、表达及对豚鼠的免疫保护作用研究

目的构建问号状钩体强毒赖型56601株外膜蛋白Loa22的重组质粒,表达Loa22蛋白,研究该蛋白对豚鼠的保护作用。方法以问号状赖型钩体56601株基因组为模板扩增目的基因,将Loa22基因克隆至原核表达载体PQE-31,构建PQE31-Loa22重组体,将其转入大肠杆菌M15中诱导表达目的蛋白。于0、2、4周将蛋白及对照PBS分别经豚鼠腹股沟、腋下免疫豚鼠。每次剂量为蛋白50μg/只,末次免疫后2周,用培养3d的56601株钩体从腹腔攻击各免疫组豚鼠(1ml/只)。连续观察15d,观察各免疫组豚鼠发病情况,并取各免疫组豚鼠的肺、肝、肾做病理切片。分析蛋白Loa22对豚鼠的免疫保护作用。结果成功扩增出Loa22基因,构建原核重组质粒PQE31-Loa22。重组质粒能在大肠杆菌M15中高效表达Loa22蛋白。用Loa22蛋白主动免疫的豚鼠用56601株钩体攻击,结果显示无发病现象,而免疫对照组的豚鼠中出现了食欲不振、活动减少等现象,病理切片有明显改变。结论成功构建了Loa22重组原核表达质粒,表达纯化的蛋白可以使豚鼠抵抗同型钩体的攻击,免疫保护作用为82%。     

医学微生物学精品课程中网络课程的构建

精品课程建设是高等学校教学质量与教学改革工程的重要组成部分。在精品课程建设中,网络课程的建设与应用是必不可少的。以“天空教室网络教学平台”为网络教学支撑环境开发了医学微生物学网络课程。介绍了医学微生物学网络课程的研究背景、研究目的及意义,以及在医学微生物学精品课程建设中网络课程的研究思路、研究方法及经验。     

钩端螺旋体Lipl21基因真核质粒构建及在HeLa细胞的表达

目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白Lipl21基因片段的真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染HeLa细胞,探讨其在体外真核细胞中的表达情况,为寻找新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子提供实验依据. 方法应用PCR技术从钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增Lipl21基因,纯化回收后克隆入pUCM-T载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1（＋）,运用脂质体2000将重组体pcDNA3.1（＋）/LipL21转染入HeLa细胞,免疫组化法观察目的基因的表达. 结果双酶切及测序鉴定证明成功构建LipL21真核表达重组体pcDNA3.1（＋）/LipL21,DNA测序显示重组质粒含有561bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变.重组质粒pcDNA3.1（＋）/LipL21在体外HeLa细胞中能有效表达目的蛋白LipL21. 结论成功构建了钩端螺旋体Lipl21基因真核表达质粒pcDNA3.1（＋）/Lipl21,且能够在体外真核细胞中表达,为进一步筛选新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子奠定了一定的实验基础.     

衡阳地区淋球菌流行株对抗生素耐药性监测

目的了解衡阳地区淋球菌流行株对抗生素的耐药性及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋球菌(TRNG)的流行状况.方法采用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)以及用改良碘法检测β-内酰胺酶.结果101株淋球菌共检出PPNG 32株(31.7%)、TRNG 20株(19.8%),对四环素、环丙沙星、青霉素及大观霉素的耐药率分别为94.1%、91.1%、89.1%和2.0%,未发现耐头孢曲松钠的菌株.淋球菌交叉耐药情况较为严重,79.2%菌株对青霉素和环丙沙星呈现交叉耐药,84.2%菌株对四环素和环丙沙星呈现交叉耐药.结论头孢曲松钠和大观霉素仍可作为衡阳地区淋病治疗的首选药物,但大观霉素已出现耐药株,应引起临床医师的高度警惕;持续监测淋球菌的耐药性十分重要.     

穿透支原体主要外膜蛋白pET20b（＋）／p35重组载体的构建、表达及鉴定

目的构建高表达且稳定的pET20b( )/p35重载体,能在其中进行诱导高表达并得到纯化的p35蛋白.方法运用Blast、Pfam等生物信息学手段对穿透支原体(Mpe)p35基因序列结构与功能预测,将p35基因全长插入原核表达载体pET20b( )中,在BL21Star^TM(DE3)进行诱导表达、用Ni柱纯化,在GSH-GSSH体系中逐渐降低其变性剂的方法复性蛋白,Western-blot进行鉴定.结果成功的构建了pET20b( )/p35重组载体,并能在宿主菌中较高表达;此蛋白以包涵体的形式进行表达.结论得到了纯化的p35蛋白,为进一步研究其生物学功能及其空间结构奠定了基础.     

淋病患者合并感染与药物敏感性研究

用培养法和PCR法对100例淋球菌阳性患者混合感染并行药物敏感性研究，结果显示：Gc＋Uu、Gc＋Mh、Gc＋Ct、Gc＋Tv、Gc＋Cd、Gc＋Uc＋Mh、Gc＋Uu＋Ct、Gc＋Mh＋Ct、Gc＋Uv＋Mh＋Ct、Gc＋Ct＋Uu＋Tv混合感染阳性率分别为35％、25％、19％、1％、3％、21％、13％、5％、3％、1％。男性淋病患者混合感染率与女性患者相比，差异无显著性（P＞0．05）。淋球菌对8种抗菌药物的耐药率达5％～60％，其中安必仙、先锋霉素V、菌必治耐药率分别为36％、5％、11％；氟味酸、氧氟沙星、环丙沙星为41％、23％、5％；乙酸螺旋霉素、红霉素为60％和51％。我们认为本研究结果可为临床泌尿生殖道淋球菌感染病人提供诊断、治疗和预防依据。