铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

目的 对铁皮石斛的目标起始密码子(start condon targeted polymorphism,SCoT)多态性反应体系进行优化,为进一步对铁皮石斛遗传多样性的SCoT分析奠定基础.方法 以铁皮石斛的新鲜叶片为试验材料,采用控制单一变量的方法分别研究模板DNA用量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTPs浓度、及退火温度共5个因素对SCoT-PCR扩增结果的影响.结果 铁皮石斛SCoT标记的20 μL优化反应体系为:DNA模板20 ng、引物浓度为30 μmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、dNTP浓度为100 μmol/L.适宜的PCR扩增程序为95℃预变性4 min; 95℃变性50 s,56.1℃复性退火40 s,72℃延伸2 min,循环36次;72℃延伸5 min,4℃保存.1.5％琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物在600～2 000 bp.结论 该体系的建立为铁皮石斛种质遗传多样性分析、分子标记辅助育种等研究奠定了基础.     

铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

目的 观察蠲痹通督汤配合小针刀松解术等治疗强直性脊柱炎的临床疗效。方法 126例强直性脊柱炎（AS）患者随机分为治疗组与对照组,对照组患者口服非甾体类抗炎药＋柳氮磺胺吡啶片＋雷公藤多苷片;治疗组患者口服蠲痹通督汤,同时采用小针刀闭合松解术治疗,可配合中药熏蒸及激光照射,4周为一个疗程,两组均治疗3个疗程。采用国际AS评价工作组（ASAS）推荐的ASAS20改善标准和患者主要相关体征进行疗效评价。结果 治疗组ASAS20改善例数、临床疗效指标及主要体征的改善均明显优于对照组（P＜0.05）。结论 蠲痹通督汤配合小针刀松解术及中药熏蒸治疗强直性脊柱炎疗效确切,不良反应少,值得临床推广。     

野生白及SRAP-PCR反应体系的优化

采用浓度梯度设计法研究适合白及的SRAP-PCR反应体系。对影响SRAP-PCR的DNA模板、引物、dNTP、Mg2+、Taq酶、退火温度等6个因素进行优化。最终确定白及的SRAP-PCR优化体系:在20μL体系中,DNA模板30 ng、Mg2+2.5 mmol/L、dNTPs 0.25μmol/L、引物20μmol/L、Taq酶2.0U,扩增体系为:94℃预变性5 min;5个循环的94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min;之后35个循环:94℃变性1 min,48℃退火1 min,72℃延伸1 min;72℃最后延伸5 min。该体系的建立为野生白及种质资源遗传多样性的进一步相关遗传分析奠定了基础。