TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1（TGF-β1/ILK/FSP1）信号通 路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细 胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组：细胞培养液加环孢素A1 mg/L;TGF-β1干预组：阻断剂（SB431542）10 μmol/L 加环孢素A1 mg/L;ILK干预组：阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A1 mg/L;阴性对照组：阴性转染ILKshRNA后加入环孢素 A1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免 疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表 达量均显著增加（P<0.05）;TGF-β1 干预组经SB431542 处理后,TGF-β1、ILK 和FSP1 水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）;经 ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较 环孢素诱导组降低（P<0.05）。结论TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制 之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。     

大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的 构建大鼠整合素连接激酶-RNAi(ILK-RNAi)慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础.方法 针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰(KD)序列.与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体.将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证.包装慢病毒,以绿色荧光蛋白(GFP)表达水平验证病毒滴度.慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RT-PCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达.结果 测序验证成功构建3条大鼠ILK-RNAi慢病毒载体,滴度分别为5×108,2.5×108,3.5×108 pfu/mL.分别以不同感染复数(MOI)感染NRK-52E细胞进行内源筛靶,荧光观察80％细胞的绿色荧光蛋白,RT-PCR、WB检测ILK的表达明显下降.相对于阴性对照序列,KD2,KD3在高MOI组中对ILK表达的敲减达到65％以上(P＜0.05),为有效靶点.其中KD2及KD3的ILK 2-△△ct值分别为0.337,0.217.KD2序列为对ILK的表达抑制最显著.结论 成功构建大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体.     

银杏达莫与ARB联合治疗糖尿病肾病的Meta分析

目的 评价银杏达莫联合血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(angiotensin Ⅱ receptor blockers,ARB)对糖尿病肾病的治疗效应.方法 检索国内外公开发表的有银杏达莫与ARB联合治疗糖尿病肾病的随机对照试验(RCT),采用Cochrane系统评价手册进行质量评价,用RevMan 5.1.4软件进行Meta分析.结果 共纳入9项研究分析,银杏达莫与ARB联合用药治疗组在降低尿微量白蛋白排泄率(UAER)、24h尿蛋白、尿白蛋白(U- Alb)、血肌酐(SCr)、血纤维蛋白原等临床指标疗效优于单用ARB组(P＜0.05),但在降低尿素氮(BUN)、血甘油三酯(TG)以及胆固醇(TC)以及血浆粘度等指标上差异无统计学意义(P＞0.05).结论 银杏达莫与ARB联合用药对早期糖尿病肾病有一定疗效,但由于现有研究样本数较少,文献质量存在一定方法学问题,尚需要严格设计的大样本的RCT加以证实.     

一种适用于临床决策分析中优指标的改进TOPSIS法

目的 提出一种适用于医学中优数据(正常参考值为xi∈[μ-kσ,μ+kσ])的改进TOPSIS法.方法 对居于正常参考值范围内与参考值之外的指标分别进行距离界定,并采用分段函数形式进行无量纲化.结果 传统TOPSIS法对正态分布类中优指标尚不能有效处理;实证分析中,改进TOPSIS法将盐碘中位数(xi3)、尿碘中位数(xi4)定义为中优指标,分析结果与经典TOPSIS分析结果在1997至2005年碘盐监测效果发展趋势有较大变化.结论 改进的TOPSIS法对研究对象的高、低或中优属性界定较为合理,对中优数据适应性较好,是一种分析结果更加真实可靠的决策支持方法,可以有效扩展TOPSIS法的研究范围.     

高盐刺激可诱导巨噬细胞极化从而促进肾脏成纤维细胞的增及表型转化

目的 探讨高盐诱导单核巨噬细胞极化，以及极化后巨噬细胞对肾脏纤维细胞株（NRK-49F）增殖及表型转化的影响。方法 培养大鼠骨髓单核巨噬细胞及NRK-49F，随后予以高盐（Na+161 mmol/L）刺激单核巨噬细胞2 h。采用RT-qPCR检测M0、M1、M2各型巨噬细胞表面标记物，同时分别收集正常及高盐组巨噬细胞培养基，予以RT-qPCR及Elisa分别检测培养基中IL-6及TGF-β的mRNA表达与蛋白表达。随后建立巨噬细胞与NRK-49F的Transwell小室共培养体系。采用EdU及Transwell分别检测NRK-49F增殖及迁移能力。予以Western blot检测NRK-49F中collagen I、collagen III及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达情况。结果 RT-qPCR结果显示，与对照组相比，高盐组细胞中表达M2型巨噬细胞表面标记物甘露糖受体（MR）和精氨酸酶（Arg）基因的mRNA水平显著升高（P<0.05）。EdU及Transwell结果显示，共培养体系中，高盐处理巨噬细胞组上层NRK-49F增殖、迁移能力增强（P<0.05）。Western blot结果显示，高盐处理组细胞培养基可诱导NRK-49F中collagen I、collagen III及和α-SMA蛋白表达增强（P<0.05）。此外，RT-qPCR及Elisa结果显示高盐处理组单核巨噬细胞培养基中IL-6与TGF-β1均显著高表达（P<0.05）。结论 高盐处理可诱导单核巨噬细胞像M2型极化并分泌IL-6与TGF-β1，从而诱导NRK-49F增殖及表型转化。