STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织细胞免疫应答

目的研究可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻相关淋巴组织(nasal-associatedlymphoidtissue,NALT)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原,CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NALT的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测其CD4 、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NALT淋巴细胞第1、2、6、8、12(P<0.05)周显著增生,可持续至免疫后第12周;CD4 T细胞第1周至第6周(P<0.05)持续显著增高,CD8 T细胞在第1周至第4周持续增高(P<0.01),CD4 /CD8 比值第2、3周显著降低(P<0.05)。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠能够有效诱导NALT的免疫效应,并可持续较长时间。     

医学寄生虫学实践教学模式的建立

针对医学寄生虫学的专业特点,在进行理论课和实验课教学改革的同时,深入开展实践教学。建立了以实践教学为平台,与育人和社会服务相结合的教学模式。在实践教学中对学生进行知识、能力、素质教育三位一体的培育模式。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

经口感染弓形虫在小鼠组织内的动态分布

目的 观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布.方法 BALB/c小鼠96只,随机分为8组,0d组用0.5ml PBS/只灌胃,其余组用RH株弓形虫速殖子1×104个灌胃感染,感染后2、4、6、8、10、12、14d处死小鼠,每次处死12只,取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印片,吉-瑞氏染色,镜检.结果 感染后2d 在十二指肠、空肠、回肠、肺和心,4d在脾,6d在肾和肝脏发现虫体,脑内未发现虫体.十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势,第6天达高峰后稍有下降.肝内虫体数量呈上升趋势,第6天最多;脾内虫体数量在6d达峰值后保持较高水平;实验期间肾、肺和心内虫体数量保持较低水平.结论 弓形虫经口感染小鼠后2d,小肠组织出现大量速殖子;同时肺和心内有少量速殖子;4d在脾、6d在肾和肝脏发现虫体;速殖子在上述组织内增殖,并形成假包囊,脑内未发现虫体.     

糖尿病患者情绪障碍和社会支持的城乡分布特点

[目的]探讨糖尿病患者焦虑、抑郁情绪和社会支持的城乡分布状况. [方法]对山西省4个地区8个调查点的2132名城乡居民,其中包括139名糖尿病患者,进行问卷调查,了解其一般情况以及情绪状况、社会支持等社会心理因素.[结果]城乡糖尿病患者问社会支持差异显著,城乡糖尿病患者与非糖尿病患者交互作用在抑郁得分差异显著.[结论]糖尿病患者情绪障碍和社会支持在城乡间分布是有差异的,这为临床根据社区、乡镇糖尿病患者各自特点,有针对性地实施心理干预提供了依据.     

RNA原位杂交法动态观察弓形虫速殖子对BALB/c小鼠小肠黏膜的黏附及侵入

目的 RNA原位杂交法观察弓形虫速殖子黏附和侵入小肠黏膜的部位及时间。 方法 30只BALB/c小鼠随机分为两组,实验组（24只）每鼠灌胃感染2×104个弓形虫速殖子（悬于0.2 ml PBS）,对照组（6只）给予等量PBS。分别于感染后15 min、30 min、1 h、2 h、4 h和8 h各处死实验组小鼠4只和对照组小鼠1只,取十二指肠、空肠和回肠标本制备石蜡切片,并作RNA原位杂交。光学显微镜观察原位杂交切片,随机选取50个视野,计数所有观察视野内的虫体总数并计算平均数。 结果 侵入的弓形虫速殖子可位于小肠上皮细胞（吸收细胞、杯状细胞和内分泌细胞）的纹状缘、吸收细胞胞浆内或相邻吸收细胞间及固有层内。感染后15 min,黏附于空肠的速殖子数量（4.93±3.949）显著高于回肠（3.78±3.102） （P<0.05）;侵入空肠的速殖子数量（4.92±4.164）显著高于十二指肠（4.10±3.532）和回肠（3.68±3.301） （P＜0.05）。随着感染后时间的延长,黏附于各肠段的速殖子数量逐渐减少,而侵入的数量逐渐増多。与感染后15 min相比,感染后8 h,黏附于十二指肠（2.32±3.039）、空肠（3.15±3.241）和回肠黏膜（2.59±3.028）的速殖子数量均显著减少（P<0.05）,而侵入十二指肠（8.92±8.955）、空肠（9.11±6.667）和回肠黏膜（9.15±10.192）的速殖子数量均显著增加（P<0.05）。 结论 弓形虫速殖子对其所黏附的小肠上皮细胞无严格的选择性,但其侵入小肠的部位具有选择性,空肠为速殖子侵入的易感部位。     

弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化

目的动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答。方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理。末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠。ELISA法测定小肠冲洗液sI-gA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞。结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平。滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074,FIEL=14.747,P0.01),其中第5周sIgA水平、第2~5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P0.05)。皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P0.05)。结论20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答。皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱。     

不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答

目的观察不同剂量弓形虫排泄一分泌抗原（excreted／secreted antigens，ESA）鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答，确定适宜免疫剂量。方法40只BALB／c小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组8只。分别用5、10、20和30μg ESA滴鼻免疫小鼠2次，间隔14d，对照组用20μl/只PBS滴鼻。于末次免疫后第14d，颈椎脱臼处死小鼠，ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平，分离并计数肠上皮内淋巴细胞（intest inalintraepithelial lymphocytes，iIEL）、肠系膜淋巴结淋巴细胞（mesenteric lymph node lymphocytes，MLNL）及脾淋巴细胞。结果实验期间，小鼠健康状况良好。随鼻内免疫ESA剂量的增加，特异性抗体水平不同程度的升高，MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答。其中，30μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10μg组、5μg组和PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；30μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量，20μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5／2g组及PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；20μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论20μg和30μg ESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答。     

肠黏膜免疫:刚地弓形虫感染中抗体分泌细胞及sIgA的地位

病原体经口感染机体后,肠相关淋巴组织受刺激,促进肠黏膜内IgA抗体分泌细胞(IgAASC)的形成,并向肠腔分泌大量的分泌型免疫球蛋白A(sIgA),IgA ASC和sIgA在肠黏膜免疫应答中起了重要作用.BALB/c小鼠经口感染弓形虫RH速殖子后,小鼠小肠黏膜固有层IgA ASC大量增殖,小肠冲洗液sIgA水平持续增高,发挥抗虫效应.小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠黏膜IgA ASC数量呈正相关(r＝0.732,P<0.01).用可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠可诱导卜二指肠黏膜固有层IsAASC高表达,小肠液和血清sIgA水平升高,表明在抗弓形虫感染中STAg鼻内免疫发挥了作用.     

弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的Peyer’s patches持续性细胞免疫应答

目的以可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen，STAg）和霍乱毒素（choleratoxin，CT）佐剂制备的弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠，观察肠粘膜诱导部位Peyer’s patches（PP）的细胞免疫应答及持续时间，探讨其免疫机制。方法BALB／c小鼠96只，随机分为实验组和对照组，实验组以STAg（20μg／只）为抗原，CT（1／μg／只）为佐剂滴鼻免疫，对照组PBS滴鼻。滴鼻2次（间隔2周）后，每组6只小鼠分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死。计数PP个数，制备PP淋巴细胞悬液，计数并涂片；免疫细胞化学法检测CD4^＋、CD8^＋T细胞亚群。结果实验期间两组小鼠PP数目均无明显变化；实验组免疫后PP淋巴细胞数量明显增生，第2周达高峰，第1、2、3周显著高于对照组（P〈0.05），其中以CD4^＋T细胞增生为主，第1周～第8周高于对照组（P〈0.01），CD8^＋T细胞第1周～第4周显著增高（P〈0.01），CD4^＋／CD8^＋比值无显著变化（P〉0．05）。结论弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫BALB／c小鼠可有效诱导肠PP部位持续性的免疫应答，从而激活肠粘膜效应部位淋巴细胞的抗弓形虫感染作用。