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目的 探讨肝细胞核因子6(HNF6)在肝内胆管发育过程中的作用. 方法 用RT-PCR及免疫组织化学等方法 检测HNF6在小鼠胚胎发育的各个阶段以及成年肝中的表达. 结果 RT-PCR结果 显示,HNF6 mRNA的表达在E9d开始出现,与肝芽形成的时间吻合,E13d HNF6 mRNA的表达消失,E15d又重新出现,并一直维持到出生.免疫组织化学显示,CK19免疫反应在E13d开始出现,此时免疫反应阳性细胞在肝索内散在分布.E15d时在近肝门处的门管区丌始出现由单层的、CK19阳性细胞组成的胆管板,之后,阳性细胞反应主要分布于胆管板和小叶间胆管.E9~11d,多数肝索细胞呈HNF6阳性反应,E13d的肝索中未观察剑HNF6的表达.E15~17d,HNF6阳性反应的分布与CK19相似,成年小鼠肝的胆管上皮细胞仍呈HNF6阳性反应. 结论 HNF6可能与肝干细胞的特化关系不大,而与肝发育的启动、肝干细胞向胆管上皮细胞的分化及其分化状态的维持有关. 相似文献
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目的通过对视神经损伤后,视网膜中生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、三磷酸腺苷酶(ATPase)含量变化的分析,探讨上述物质在视神经损伤中的变化及作用。方法建立家兔视神经损伤的动物模型,利用免疫组织化学方法观察管内段视神经损伤后GAP-43的表达。利用生化分析方法测定视网膜中MDA、NO、ATPase的含量。结果视神经损伤后3d,可在视网膜的切片中看到GAP-43表达阳性的细胞,位于RGCs层,其胞体染成棕黄色,胞核无色;伤后5d阳性细胞增多,颜色加深;伤后7d阳性细胞数和积分光密度值达最高峰;伤后14d阳性反应下降,阳性细胞数下降,染色变浅。视神经损伤后1d视网膜MDA含量较对照组显著升高(P<0.01),第5天达到高峰,此后逐渐下降,至伤后14d仍高于对照组(P<0.05)。NO含量在伤后3d亦较对照组显著升高(P<0.05),于伤后5d达到高峰,伤后14d仍高于对照组(P<0.01)。ATP酶活性于伤后第1天d开始显著降低(P<0.01),5d后逐渐升高,伤后14d仍低于对照组(P<0.05)。MDA的含量与NO呈正相关(r=0.8644,P<0.01);ATP酶的活性变化与NO呈负相关(r=-0.9639,P<0.01),ATP酶的活性变化与MDA亦呈负相关(r=-0.9018,P<0.01)。结论脂质过氧化作用、NO毒性作用可能参与了视网膜的损伤过程。 相似文献
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侧脑室注射血管紧张素Ⅱ促进内源性洋地黄样因子释放 总被引:8,自引:7,他引:1
目的 探讨侧脑室注射血管紧张素Ⅱ对内源性洋地黄样因子(EDLF)释放的影响。方法 大鼠侧脑室注射血管紧张素Ⅱ及侧脑室注射Saralasin或损毁第三脑室前腹区(AV3V)预处理,放射免疫方法测定血清EDLF浓度的变化。结果 侧脑室注射AngⅡ可引起血清EDLF浓度升高;Saralasin预处理或海人酸损毁AV3V区可阻断侧脑室注射AngⅡ引起的血清EDLF升高效应。结论 侧脑室注射血管紧张素Ⅱ促进EDLF释放。 相似文献
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COPD模型大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达及意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨转化生长因子良(TGF-β1)在长期吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)病理变化中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和模型组,分别分为1-6月组,每组6只。建立大鼠吸烟COPD模型。光镜下观察吸烟对大鼠肺组织结构的影响,RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA在肺组织中的表达。结果随吸烟时间延长,肺泡腔不规则扩大,肺泡间隔破裂,有的肺泡融合成肺大泡,以吸烟6月组最为明显,肺组织结构表明COPD模型建立成功。RT-PCR结果表明,TGF-β1mRNA在正常肺组织中呈微弱表达,随吸烟时间的延长,TGF-β1mRNA表达增多,5月组表达最多。结论长期吸烟可引起气道壁炎细胞浸润及肺组织形态学变化,导致COPD发生。TGF-β1,表达随吸烟月份增加逐渐增多,肺组织结构破坏与TGF-β1表达有相关性,表明TGF-β1在COPD的发生和发展过程中起重要作用。 相似文献
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机能学实验教学改革一直是基础医学教育界探讨的热点。遵义医学院开设的机能学设计性实验对机能学实验教学体系和内容做出初步探索和改革,对加强培养医本科学生实践能力、知识综合运用能力和创新意识发挥了积极的作用。 相似文献
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背景:早期肝的发育与横隔间充质和原始心脏的发育在时间和空间上存在密切关系,来自原始心脏和横隔间充质的信号分子可诱导前肠内胚层细胞向肝细胞的特化,横隔间充质为肝芽的形成提供了一个适宜的环境,并可促进其生长和分化。但这一诱导过程的分子机制尚不清楚。
目的:利用发育第3~5周人胚标本,选择甲胎蛋白、细胞角蛋白19、c—Met作为肝干细胞的标记物,观察早期人胚胎的发育及肝干细胞的形态特征,以明确肝干细胞的特征和影响其增殖、分化的因素,为肝干细胞的基础研究和临床应用提供实验依据。
设计:开放性实验。
单位:潍坊医学院人体解剖学教研室。
材料:实验于2004-09/2005-01在成都医学院科研中心完成。选择2个月内流产的新鲜人胚胎标本20例,20min内用40g/L多聚甲醛固定,常规石蜡包埋、连续切片,苏木精-伊红染色,显微镜下观察,参照Jirasek的人胚发育分期标准,根据胚胎的长度、体节的数目及器官发育状况确定胚龄。
方法:选择胚龄第3-5周的标本,SABC法进行免疫组织化学染色。多克隆抗肝细胞生长因子、c—Met、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体、转化生长因子β1、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2抗体,单克隆抗增殖细胞核抗原、甲胎蛋白和细胞角蛋白19抗体,4℃孵育过夜,羊抗兔或羊抗鼠ⅠgG及SABC液室温下分别孵育2h,二氨基联苯胺显色。以磷酸盐缓冲液代替-抗作阴性对照。光学显微镜下观察、拍照。
主要观察指标:第3~5周人胚肝干细胞的形态特征及标记物的免疫组织化学染色,肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在第3-5周人胚肝、原始心脏及横隔间充质细胞中的表达。
结果:①第3-5周人胚肝干细胞的形态特征及标记物的免疫组织化学染色观察:第3周末肝芽形成,第4周肝芽的细胞伸人横隔间充质内形成肝索,构成肝索的细胞具有与第3周末相同的形态特点。第5周时这些细胞数量明显增加,细胞体积有所增大,胞核嗜碱性稍减弱,胞质的嗜酸性增强,但细胞的形态仍均匀一致。第3~4周时肝索的细胞呈增殖细胞核抗原的反应阴性,5周时开始出现阳性反应,主要分布在细胞核,少数细胞的胞质为弱阳性。第3~5周时多数肝索细胞都为甲胎蛋白和c—Met阳性,甲胎蛋白阳性细胞的免疫反应沉淀物在胞核、胞质及细胞膜中均存在;c—Met阳性反应主要分布于细胞核,胞质亦可见较弱的阳性反应。而这些细胞为细胞角蛋白19阴性。②肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体在第3—5周人胚肝、原始心脏及横隔间充质细胞中的表达:发育第4周组成肝索的细胞表达c—Met,而不表达其他的因子或受体。第5周时,除了肝细胞生长因子以外的其他因子均在肝索细胞表达。转化生长因子β1及其受体转化生长因子β受体l、转化生长因子β受体2的免疫反应沉淀物主要存在于细胞质和细胞膜,胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体的阳性反应在细胞核、细胞质以及细细胞膜均可见。第3-5周时,肝芽或肝索周围的心肌细胞和间充质细胞呈肝细胞生长因子、转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ免疫反应阳性,阳性信号主要聚集在细胞质,少数胞核亦有阳性。
结论:①人胚胎发育的第3周末,前肠腹侧的部分内胚层细胞特化为肝干细胞。②发育第3-5周人胚肝的细胞为未分化的肝干细胞,若拟研究人胚肝干细胞,此时取材、并利用肝干细胞特异性的标记物,可得到具有双向分化潜能的肝干细胞。对于鼠胚肝于细胞的研究,也可利用人、鼠胚龄的对应关系,推算出其肝干细胞存在的时间、从而决定取材的时间点。③肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1等生长因子促进早期人胚肝的发育。 相似文献
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背量:血管内皮生长因子家族及其受体在血管生成和新血管形成过程中具有重要作用。近来,有关血管内皮生长因子家族对血液发生的作用受到广泛关注。
目的:观察血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子C及其受体和alI.giopoietin-1(ang-1)、angiopoietin-2(ang-2)及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的表达,以了解血管内皮生长因子和angiopoietin家族在血液发生过程中的作用。
设计:单一样本观察。
单位:潍坊医学院,形态实验中心和解剖学教研室。
对象:实验于2002-02/2004-08在潍坊医学院进行,收集流产的47例孕妇的受糟龄第3-12周人胚胎标本,孕妇知情同意。
方法:标本连续切片,每隔10张抽出2张切片,分别做苏木精一伊红染色和免疫组织化学染色。多克隆抗血管内皮生长因子C,fms样酪氨酸激酶,flt-4,ang-1,ang-2,Tie-2抗体以及单克隆抗血管内皮生长因子A,胎肝激酶l抗体4℃孵育过夜,羊抗鼠IgG及SABC液室温下分别孵育2h,DAB显色。分别以正常兔或鼠血清代替一抗作阴性对照。光学显微镜下观察、拍照。
主要观察指标:①血管内皮生长因子A和血管内皮生长因子C及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的时空表达。②ang-1和ang-2及其受体在发育第3-12周人胚胎卵黄囊血岛、主动脉-生殖腺-中肾区的时空表达。结果:①第21-25天人胚卵黄囊血岛血管内皮细胞和造血细胞强表达血管内皮生长因子A及其受体fms样酪氨酸激酶和胎肝激酶l、血管内皮生长因子C及其受体胎肝激酶4、ang-2及其受体Tie-2蛋白,弱表达ang-1蛋白。②背主动脉和中肾于发育第4周开始表达上述各种因子及其受体,免疫阳性反应物集中在大而圆、有核的造血细胞。阳性细胞的数量到第7周到达高峰。8周以后,阳性细胞数量显著减少,到12周,几乎所有的血细胞为免疫阴性反应。③生殖腺主要在第6-8周表达血管内皮生长因子A,fms样酪氨酸激酶,flt-4,ang-1,ang-2和Tie-2蛋白,但不表达血管内皮生长因子C和胎肝激酶l。④主动脉一生殖腺一中肾区的血管内皮细胞未检测到上述各因子的表达。
结论:人胚卵黄囊血岛造血细胞和内皮细胞以及背主动脉和中肾共表达多种与血管发生和血液发生相关的因子。人胚内造血发生于第4周。 相似文献