扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。     

2%利多卡因涂抹治疗小儿疱疹性口炎疗效观察

疱疹性口炎是以齿龈、唇内、舌、颊粘膜等各部位口腔黏膜发生疱疹为主要特征的一种病毒性传染病。患儿疼痛颇剧、拒食、流涎、烦躁。如何有效减轻疼痛,令患儿正常进食是家长和医务人员关心的问题。我科采用2%利多卡因涂抹口腔减轻疱疹性口炎疼痛,改善患儿进食情况,促进疱疹愈合,取得明显疗效,报告如下。1资料与方法 1.1一般资料选择2009年10月至2010年4月来我院门诊的疱疹性口炎患儿60例,均符合小儿疱疹性口炎诊断标准[1],     

复肝丸调控miR-424表达抑制肝窦内皮细胞血管新生的体外研究

目的观察复肝丸调控miR-424表达以抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用及其机制。方法以不同剂量(0～2 000 mg/L)的复肝丸与人肝窦内皮细胞(HHSEC)共孵育,CCK8法检测复肝丸对细胞活力的影响,分析复肝丸对细胞无毒性作用的剂量范围,并以此作为后续药效及机制评价的剂量。以CoCl_2诱导HHSEC血管新生模型,分为正常组、模型组、miR-424抑制剂组及复肝丸组,除正常组外,其余各组以CoCl_2诱导细胞血管新生,miR-424抑制剂组及复肝丸组分别以miR-424抑制剂及复肝丸(200 mg/L)与细胞共孵育24 h。采用CCK8法检测细胞活力与增殖情况;Transwell观察细胞迁移变化情况;Matrigel管腔生成实验评价细胞管腔形成情况;定量RT-PCR检测miR-424、HIF-1α、vWF、CD31基因表达;Western blot法检测HIF-1α、vWF、CD31蛋白表达。结果复肝丸剂量小于400 mg/L对HHSCE无明显细胞毒性。与正常组比较,200μmol/L CoCl_2可诱导肝窦内皮细胞缺氧损伤模型,且模型组miR-424、HIF-1α表达增加,细胞迁移和管腔生成增多,vWF、CD31表达增加(P0.01);与模型组比较,miR-424抑制剂与200 mg/L复肝丸干预后,miR-424与HIF-1α表达均不同程度降低,细胞迁移和管腔生成受抑制,vWF、CD31表达降低(P0.01);且复肝丸组综合疗效与miR-424抑制剂相当。结论复肝丸具有良好的抑制肝窦内皮细胞血管新生的作用,其作用机制与抑制miR-424表达相关。     

应用两种功率的氦氖激光刺激山羊穴位产生镇痛效应的比较观察

从1978年以来,我们提出了应用氦氖激光刺激兔、猪、绵羊、大白鼠等的有关穴位可以提高痛阈的几篇报告,曾引起了国内外的注视。本实验我们选取了山羊前、后躯不同部位的山根(唇鼻部)、百会(腰荐部)、交巢(肛门上部)三穴,以比较其激光刺激     

黄芪注射液对二尖瓣关闭不全病理模型犬主动脉压和左心室压的影响

目的：观察黄芪注射液对二尖瓣关闭(MR)不全病理模型犬的心血管效应,探讨其在MR病治疗上的价值。方法：在异氟烷吸入麻醉下．对外科手术制作的犬亚急性二尖瓣关闭不全模型(术后50d后)一次性静脉推注黄芪注射液2．5g／kg(1．25ml／kg),通过心导管法连续测定主动脉压和左心室压。结果：开始注射黄芪注射液后MR犬的主动脉压和左心室收缩压呈现先显著降低,然后恢复再降低的变化,左心室舒张末压在早期有升高变化随后呈降低趋势。结论：(1)黄芪注射液对MR模型犬具有显著降低主动脉收缩压(AoPs)、主动脉舒张压(AoPd)和主动脉平均压(AoPm)的作用。(2)黄芪注射液对MR模型犬主动脉压的降低作用,提示其在犬心气虚治疗上具有减轻后负荷的可能,在临床治疗上有一定价值。     

扶正化瘀方抗大鼠肾间质纤维化的作用

目的观察扶正化瘀方抗氯化汞(HgCl_2)诱导的大鼠肾间质纤维化病变的作用,并初步探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方(FZHY)组及维生素E(VitE)组,模型组用HgCl_2 8 mg/kg灌胃9周,FZHY组(4.6 g/kg)和VitE组(100 mg/kg)分别给予相应的药物干预。检测肾功能情况(Cr和BUN),盐酸水解法检测肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量,HE染色、Masson染色和六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态,Western blot观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与模型组比较,FZHY组及VitE组大鼠肾体比(双肾质量/体重)明显下降(P0.05)、肾组织Hyp含量明显下降(P0.05),血清Cr和BUN含量明显下降(P0.01),肾脏纤维化程度明显减轻。其中FZHY组比VitE组轻。FZHY组和VitE组肾组织ColⅠ和FN表达均较模型组减弱(ColⅠ,P0.05;FN,P0.01)。FZHY组α-SMA表达较模型组减弱(P0.01),VitE组则无明显变化(P0.05)。结论FZHY可改善HgCl_2诱导模型大鼠的肾功能损伤,减少细胞外基质沉积,减轻肾间质纤维化病变,其作用机制与抑制肌成纤维细胞活化有关。     

氯化钴诱导人肝窦内皮细胞缺氧模型特点

目的观察氯化钴(CoCl_2)诱导人肝窦内皮细胞(HHSEC)缺氧模型特点。方法不同浓度CoCl2(0~800μmol/L)与HHSEC细胞孵育24 h,CCK8法检测细胞活力;50~200μmol/L CoCl2与HHSEC细胞孵育,Transwell实验检测细胞迁移;Matrigel管腔生成实验检测细胞管腔形成情况;蛋白质免疫检测细胞HIF-1α、vWF、VEGF蛋白表达;免疫荧光染色观察HIF-1α核转位。结果与对照组比较,50~200μmol/L CoCl2组HHSEC细胞活力明显增加,细胞迁移到膜下的数量显著增多,并且形成丰富而密闭的管状结构。50μmol/L、200μmol/L CoCl2促进HHSEC中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、第八因子相关抗原(vWF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达,其中200μmol/L CoCl2组HIF-1α、vWF表达较50μmol/L CoCl2组高。结论 50μmol/L、200μmol/L低浓度CoCl2可诱导人肝窦内皮细胞缺氧、血管新生,其作用机制与促进HIF-1α表达及核转位相关。     

HPLC-MSn分析扶正化瘀方中五味子的入血成分

目的:分析扶正化瘀方(Fuzheng Huayu decoction,FZHY)灌胃大鼠后进入血液的五味子中木脂素类成分,以探讨部分体内效应成分.方法:应用液相色谱-电喷雾质谱联用(HPLC-ESI-MSn)技术,通过空白血清,口服FZHY方后含药血清,FZHY方和对照品之间的色谱图和质谱碎片信息的对比分析,结合文献报道,确定口服FZHY方后大鼠的入血成分.结果:FZHY方和口服FZHY方后含药血清中均含有五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子乙素,并在FZHY方中还发现含有五味子甲素和丙素.结论:五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子乙素是直接吸收入血的成分,可能是发挥抗肝纤维化的体内效应成分.     

CO_2激光治疗拇指嵌甲合并甲沟炎12例疗效观察

资料 :拇指嵌甲合并甲沟炎 12例 ,男性 8例 ,女性 4例 ;年龄 14～ 18岁。双侧 2例、左侧 6例、右侧 4例。患甲共计14个 ,其中 4年连续拔除同一患甲 3次者 12个 ,4次者 2个。方法 :患指常规消毒 ,1%利多卡因自拇指根部行神经阻滞麻醉。用波长 10 6 μｍ ,输出功率 10Ｗ ,光斑直径 0 2ｃｍ的ＣＯ2 激光原光束聚焦汽化、炭化患甲 1/ 4病侧沿甲沟 ,直至甲床。边炭化边用盐水棉球擦净炭化物 ,至甲下正常组织 ,使局部凝固结痂。保持创面干燥 ,数周后痂皮自然脱落 ,创面愈合。结果 :术后 14个患甲无一感染。随访 2～ 3年 ,原病灶未见嵌甲形成及甲…