长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的 探讨长链非编码RNA ZEB1-AS1在脑缺血/再灌注损伤（CI/RI）中的作用及其机制。方法 通过脑中动脉闭塞构建雄性SD大鼠局灶性CI/RI模型,实时定量PCR和Western blot分别检测ZEB1-AS1和HMGB1的时序表达并确定了CI/RI最佳时间（2 h/24 h）。将大鼠分为Sham组、CI/RI组、CI/RI+si-NC组、CI/RI+si-ZEB1-AS1组、CI/RI+OE-NC组、CI/RI+OE-ZEB1-AS1 组。向CI/RI大鼠侧脑室注射ZEB1-AS1沉默/过表达载体及对照载体后,通过神经功能缺损评分和转盘实验分析认知功能;干湿重法分析脑水含量;Western blot检测白蛋白水平以评价血脑屏障完整性;ELISA法分析脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平。分别用FJC和TUNEL法检测CI/RI大鼠皮层中神经元丢失和细胞凋亡情况,Western blot分析HMGB1和TLR-4水平。此外,体外建立SH-SY5Y细胞氧-糖剥夺/复氧模型来模拟缺血/再灌注微环境,TUNEL法、Hoechst 33258染色、流式细胞术检测ZEB1-AS1 沉默对神经元凋亡的影响;Western blot 分析 HMGB1 和 TLR-4 水平。结果 qPCR 和 Western blot 结果显示,ZEB1-AS1和HMGB1在CI/RI大鼠脑组织中的表达随着再灌注时间的延长升高（24 h达到峰值）,而后逐渐降低。神经功能缺损评分和转盘试验结果显示,与OE-NC组相比,ZEB1-AS1过表达加重了CI/RI大鼠认知功能受损（P<0.05）;而si-ZEB1-AS1组大鼠的认知功能则好于 si-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠的脑水含量高于 OE-NC 组（P<0.05）;而与 si-NC 组相比,si-ZEB1-AS1组大鼠的脑水含量减少（P<0.01）。血脑屏障渗漏检测数据提示,si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中白蛋白的含量低于si-NC组（P<0.01）;OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中的白蛋白含量则高于OE-NC组（P<0.05）。ELISA结果显示,si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平低于si-NC组（P<0.01）;而OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α含量高于OE-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠皮层 FJC 阳性神经元数量高于 OE-NC 组（P<0.01）;与此相反,si-NC 组相比,ZEB1-AS1敲减则降低了FJC阳性神经元数量（P<0.01）。Western blot结果显示,与OE-NC组相比,ZEB1-AS1过表达促进了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）;而ZEB1-AS1敲减则产生相反的结果（P<0.01）。细胞水平上,与si-NC组相比,ZEB1-AS1敲减降低了 TUNEL阳性细胞数（P<0.01）;流式细胞术检测结果进一步证实该现象。此外,Western blot结果进一步证实,ZEB1-AS1敲减下调了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）。结论 长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧脑缺血/再灌注损伤。