TrKA-siRNA抑制乳腺癌细胞系MCF-7 NF-κB的表达并促细胞凋亡

目的 探讨TrKA基因表达的变化对NF-κBp65核蛋白的表达和细胞凋亡的影响。方法 构建TrKA特异小干扰RNA（siRNA）表达载体,重组体经测序鉴定正确后转染乳腺癌MCF-7细胞。G418(geneticin)筛选稳定表达TrKA siRNA干扰细胞株,命名为TrKA-siRNA。荧光实时定量RT-PCR,Western blot和免疫组化法检测TrKA基因的表达,Western blot检测NF-κBp65核蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 成功构建 TrKA-siRNA 表达载体,TrKA mRNA和蛋白水平分别下调74.7%和80.5%（P<0.05）。阳性对照 GAPDH 基因表达水平下降85.0%（p<0.05）;NGF作用2 h后,MCF-7组细胞NF-κBp65核蛋白表达明显增加,而TrKA-siRNA组细胞NF-κBp65核蛋白改变不显著。与MCF-7组相比,TrKA- siRNA组细胞凋亡明显增加（p<0.05）,NGF对其凋亡无促进作用。结论 有效阻断TrKA基因的表达能抑制NF-κB抗凋亡途径的活化,从而增加了乳腺癌MCF-7细胞的凋亡。此作用可能不依赖于外源性的NGF。     

凝血和纤维蛋白溶解指标监测对脑梗死患者的临床意义

目的探讨脑梗死患者凝血和纤维蛋白溶解指标的变化对临床治疗及预后判断的临床应用价值,以指导临床用药及对脑梗死疾病治疗过程的监测和患者预后的判断。方法采用法国STGA0全自动血凝仪对脑梗死患者的凝血谱进行监测,凝血4项采用磁殊法;D-D二聚体应用免疫比浊法检测。结果脑梗死组与正常组相比PT、Fib、D-D明显增高（P＜0．01）;APTT、TT无明显差异（P＞0．05）。其中IYD二聚体增高最明显,而且D-D二聚体明显升高的患者预后大多有后遗症。结论监测脑梗死患者凝血谱的变化有利于对患者病情的评估和指导临床制定合理的治疗方案,并对患者的预后评估有一定的参考价值。     

miR-145在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-145在胃癌中的表达及其临床意义。方法选取2011年2月至2012年6月江苏省中医院就诊的67例胃癌患者,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测胃癌患者miR-145的表达情况,取肿瘤边缘外5cm处的非癌胃黏膜作为对照,比较miR-145在正常组织及胃癌组织中的表达差异及与胃癌临床病理参数的相关性。结果 54例(80.60%)胃癌患者胃癌组织miR-145表达明显低于正常组织,miR-145的表达在不同性别、年龄及TNM分期患者间的差异无统计学意义(P>0.05),但在不同组织学分级及淋巴结转移情况患者间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-145在胃癌中呈低表达,可能与胃癌的发生、发展密切相关,可成为胃癌诊断及预后判断的指标。     

中西医结合治疗痰瘀互结型高脂血症35例临床观察

目的:观察参蚕降脂方治疗高脂血症的临床疗效。方法:将70例患者随机分为2组,对照组35例口服阿托伐他汀钙片治疗;治疗组35例在对照组治疗基础上加服参蚕降脂方。2组均治疗8周。结果:治疗组总有效率为100%,高于对照组的94.3%;治疗组在TC、TG、LDL-C、HDL-C、ET-1指标改善方面优于对照组。结论:中西医结合治疗高脂血症效果显著。     

C肽检测系统评价及临床应用

目的对化学发光微粒子免疫检测法检测c肽的方法进行评估和初步应用。方法连续5d测定同一标本每次重复3次。计算重复性、实验室内精密度、真实度、功能灵敏度和线性范嗣;用美国临床实验室标准化委员会（EP15-A）提供的方案对该方法的重复性、实验室内精密度、功能灵敏度和线性范围进行研究。结果该方法的功能灵敏度为0．60ng／mL;性范围0-18．30ng／mL;~部精密度为7．00％-12．29％,总不精密度为6．63％-8．35％。结论化学发光微粒子免疫检测系统检测C肽各项性能指标良好,符合要求,系统推荐用肝素抗凝管。     

咳喘停贴剂穴位贴敷对慢性哮喘大鼠肺组织抑炎细胞因子的影响

目的 观察咳喘停贴剂穴位贴敷对慢性哮喘大鼠Th1下游抑炎细胞因子含量的影响.方法 将48只Wistar大鼠随机分成6组:正常组、模型组、布地奈德组、穴位假贴敷组、地塞米松组、穴位贴敷组,每组8只.用卵清蛋白致敏和激发的方法复制慢性过敏性哮喘大鼠模型.模型复制后各组给予相应的治疗,治疗14 d后观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(int erleukin-2,IL-2)和IL-12含量.结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中IFN-γ、IL-2、IL-12含量均明显降低(P＜0.05).与模型组比较,穴位假贴敷组BALF中IFN-γ、IL-2、IL-12含量无明显变化(P＞0.05);布地奈德组、地塞米松组、穴位贴敷组IFN-γ、IL-12含量明显升高(P＜0.05),IL-2含量呈升高趋势(P＞0.05),但3组之间IFN-γ、IL-2、IL-12含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 咳喘停穴位贴敷治疗慢性哮喘大鼠的机制与调节呼吸道中抑炎细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12的分泌异常有关.     

GFP作为脐带间充质干细胞体内示踪标志物在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达

目的通过腺病毒转染携绿色荧光蛋白(GFP)的脐带间充质干细胞(ucMSCs)移植大鼠脑缺血再灌注损伤模型,研究GFP作为示踪剂的可行性。方法体外培养经腺病毒转染GFP的ucMSCs,建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,通过脑立体定位技术将1×10~6携GFP的ucMSCs移植入损伤脑组织,并于造模7d后取脑组织进行冰冻切片,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果体外携GFP的ucMSCs形态呈成纤维状,融合时聚集成簇,呈放射状或漩涡状排列,与未转染ucMSCs形态无差异,荧光显微镜下可见GFP的阳性率达80%以上,且荧光扩散至整个细胞,可反映细胞完整形态。移植后大鼠未出现排斥反应,7d后脑组织移植部位附近均可见GFP表达,荧光未见衰减。结论 GFP作为ucMSCs移植治疗脑损伤的有效示踪剂,可为细胞水平的各种研究及体内移植细胞的研究提供实验手段。     

PEI与脂质体介导基因转染的比较研究

目的：比较新型转染试剂阳离子聚合物聚乙烯亚胺（PEI）与脂质体2000介导的血管内皮细胞生长因子 VEGF165基因转染人胚肾细胞293T 的转染效率,为基因转染提供新的方法。方法分别采用脂质体和不同 N／P 比值的 PEI 将合成的含有绿色荧光蛋白（GFP）和 VEGF165的质粒转入293T 细胞。转染24 h 后,采用 CCK-8试剂盒检测细胞活性;转染48 h 后在荧光显微镜下观察比较两种转染方法的转染效率,并通过 ELISA 方法检测细胞上清液中 VEGF165浓度,比较两种方法的转染效果。结果当 N／P＝9时,PEI 转染的细胞活性与脂质体转染相近,对细胞的毒性较小;此时,PEI 转染效率与脂质体也相似,均可达到约70％;同样,转染后细胞上清中 VEGF165浓度较未转染组提高（P ＜0．05）,但两种方法转染组间比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论PEI 作为一种新型的转染试剂,与脂质体相比,在一定比例范围内,具有转染效率高,对细胞毒性小且价格低廉的优势,有望成为基因转染的有效载体。