肝素结合生长因子Midkine基因在大肠杆菌中的克隆、表达和纯化

目的：用基因工程的方法构建、表达和纯化人肝素结合生长因子human Midkine（hMK），并进行活性测定。方法：利用RT-PCR技术从胎儿肾组织中扩增MK，将去除信号肽序列的hMK插入pET30a，构建成表达载体pET-hMK，经表达和亲和层析、纯化获得目的蛋白，3^H-TdR法测定活性。结果：hMK序列与Genebank发表的人MK基因编码序列一致，SDS-PAGE电泳显示表达出目的蛋白，3^H-TdR法测定有良好的活性。结论：人MK已被转人表达载体中，并在大肠杆菌中诱导表达，获得了hMK的表达菌株。     

Hp感染与胃癌及癌前病变中p53、bcl-2、c-myc基因表达关系的研究

目的：研究幽门螺杆菌（Hp)感染的胃癌及癌前病变患者胃粘膜p53,bcl-2,c-myc基因的表达，以探讨Hp在胃癌发生，发展过程中的作用机制，方法：应用免疫组化方法测定60例胃癌组织，18例异型增生，29例肠上皮化生，35例萎缩性胃炎，29例浅表性胃炎组织中Bcl-2,c-myc基因蛋白表达情况，PCR／SSCP测定p53基因第5－8外显子突变，Hp阳性由快速尿素酶法和HE染色确定，结果：胃癌组Hp阳性41例，阴性19例，在胃癌组织中p53,bcl-2,c-myc基因阳性表达分别为38例（63．3％），38例（63．3％），18例（30．0％），p53,c-myc基因在胃癌中阳性表达率显著高于异型增生（P＜0．05）,bcl-2在异型增生组织中的阳性表达率与胃癌，肠上皮化生相比无显著性差异（P＞05），p53,bcl-2,c-myc基因表达与胃癌分期，淋巴结转移均无显著性关系（P＞0．05），但bcl-2与胃癌类型，分化程度显著相关（P＜0．05），每一种病变类型Hp阳性组p53,bcl-2,c-myc基因蛋白的阳性表达率均高于Hp阴性组，两者之间有显著性差异（P＜0．05），结论：Hp感染者具有更多肿瘤生物学行为，可以引起抑癌基因p53第5－8外显子突变，癌基因c-myc，凋亡调节基因bcl-2表达增加,Hp可能为促癌剂，在胃癌的发生发展中起一定作用。     

人SLPI启动子调控下eGFP基因表达载体的构建与表达

目的构建SLPI基因启动子驱动下EGFP表达载体并验证该启动子在非小细胞肺癌细胞株中的特异调控活性。方法通过PCR方法从人外周血基因组中扩增SLPI启动子，经序列分析后，利用peDNA3．1（＋）和pEGFP构建SLPI启动子调控下EGFP表达载体，以脂质体介导转染入人宫颈上皮癌Hela、肺腺癌A549、SPC-A1和肝细胞癌HepG2细胞中，经G418稳定筛选后，在荧光显微镜下观察该启动子在非小细胞肺癌细胞株中的特异调控EGFP表达的活性。结果克隆出的SLPI启动子序列与Genebank上SLPI基因上游5’末端转录调控区的序列完全一致，稳定转染的细胞株Hela、A549、SPC—A1和HepG2中，CMV启动子控制下的EGFP基因均有表达，发出绿色荧光；而SLPI启动子词控下的EGFP基因在Hela、A549和SPC-A1中有表达，发出绿色荧光，在HepG2中则未见荧光发出。结论钓取的人SLPI启动子在非小细胞肺癌细胞中具有特异调控其下游基因表达的活性，为探索该启动子调控下的抗肺癌基因治疗提供实验基础。     

氟骨症成骨细胞激活中钙与信号转导

在慢性氟中毒(地氟病)的全身病变中，危害最大的是骨相损害，即氟骨症。氟骨症的病变复杂多样，成骨活动增强是一个发生较早并起主导作用的环节。在成骨细胞(osteoblast OB)活化、增殖活跃过程中，存在着复杂的信号转导机制和信息介质的代谢和(或)功能的变化，这些可能与OB激活密切相关。随着分子生物技术的进步，为进一步探讨和证明钙     

BMP—2基因转染的人骨髓基质干细胞复合PLA／PCL支架体外构建组织工程骨

目的 用人骨形态发生蛋白2腺病毒表达载体(Ad—BMP—2)转染的人骨髓基质干细胞(hBMSC)，复合PLA／PCL(聚乳酸／聚己内酯)生物降解支架体外构建组织工程骨。方法 用Ad—BMP—2转染体外培养的成人BMSC，免疫组化、原位杂交染色和蛋白印迹方法检测细胞BMP—2的表达，并通过流式细胞仪和ALP活性检测分析其对细胞增殖、分化的影响。然后将转染后细胞接种到PLA／PCL支架上，扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 转染后，hBMP—2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达；S期细胞比例和ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀，伸展良好。结论 Ad—BMP—2可高效转染hBMSC，且促进细胞增殖及成骨转化。转染后细胞在PLA／PCL上生长良好，BMP—2基因治疗的组织工程骨构建成功。     

血清α_1-抗胰蛋白酶检测的临床意义

本文用手动速率散射比浊法测定了84例患儿血清α_1-抗胰蛋白酶含量。结果小儿肺炎急性期为4.45±1.32 g/L,恢复期为 2.59±0.4 g/L,非感染性疾病为 2.32±0.34 g/L;肺炎急性期其血清a_1-抗胰蛋白酶含量明显高于对照组,与对照组对比差异显著;肺炎恢复期及非感染组与对照组对比,无显著性差异。提示α_1-抗胰蛋白酶为一非常敏感的急性时相蛋白,临床可作为诊断感染性疾病的一项指标。     

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染人骨髓基质干细胞和对其增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的构建人骨形成蛋白-2(hBMP-2)真核表达载体pcDNA3.1-hBMP-2,转染人骨髓基质干细胞(MSCs),探讨基因转染对其增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法利用重组DNA和基因克隆技术构建重组载体pcDNA3.1-hBMP-2;细胞培养和基因转染技术体外转染人MSCs;免疫细胞化学、原位杂交和蛋白印迹法检测细胞BMP-2的表达;通过流式细胞仪和VEGF探针原位杂交分析其对细胞增殖和VEGF表达的影响. 结果转染后细胞在mRNA水平和蛋白质水平均表达BMP-2;转染后S期细胞比例增多,提示细胞DNA的合成增加;BMP-2基因转染上调细胞VEGF的表达. 结论在脂质体介导下,pcDNA3.1-hBMP-2转染MSCs获得成功.基因转染后能促进细胞增殖并将通过使VEGF的表达增加促进血管再生,为进一步骨缺损的基因治疗及构建组织工程骨奠定了实验基础.     

恶性淋巴肿瘤粗针穿刺活检的病理技术应用

淋巴瘤的定性诊断必须依靠病理学的检查.粗针穿刺活检(needle core biopsy, NCB)对患者损伤小,避免了手术切取活检造成的创伤和痛苦.本文重点介绍恶性淋巴肿瘤粗针活检的病理技术应用,现报道如下. 1 材料与方法 1.1 研究对象收集我院2003年1月～2011年12月经穿刺活检诊断的淋巴组织疾病115例,其中男性70例,女性45例,男女比为1.5:1;年龄4～83岁,平均54.3岁.     

多药耐药基因、CD34~＋的表达对急性髓细胞性白血病化疗效果的影响

目的探讨白血病多药耐药（MDR）基因表达对化疗的影响。方法应用FITC单克隆CD34荧光抗体对30例急性髓细胞性白血病（AML）患者行流式细胞术检测CD34＋的表达;RT-PCR（逆转录/多聚酶链式反应）半定量法检测耐药基因的表达;并进行了细胞遗传学分析。结果 30例初诊的白血病患者,24例MDR-1表达阳性中,化疗后达到缓解（CR）者13例（54.2%）,而未缓解及部分缓解者11例;6例MDR-1未表达者,化疗后只有1例（16.7%）未达到CR。30例病人流式细胞术检测显示,CR组18例中有15例CD34＋细胞率〈2.1%,未CR组12例中有9例CD34＋细胞率〉5.7%。结论多药耐药基因表达影响AML的预后效果,CD34＋细胞也可作为AML的预后指标。     

重组核心蛋白聚糖转染对肝癌HepG2细胞周期、caspase-3影响的研究

目的 将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体转染到肝癌HepG2细胞中并检测其表达,同时探讨DCN抗肿瘤作用的机制.方法 实验分为对照组细胞和转染组细胞;脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1分别转染到肝癌HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR、免疫组化和Western印迹法检测DCN表达;同时检测细胞周期、caspase-3酶活性.结果 与对照组细胞比较,转染组细胞DNC mRNA及蛋白质表达均明显增高(P＜0.05);细胞生长缓慢,G0/G1期细胞显著增多,S期细胞明显降低(P＜0.05);caspase-3酶活性显著增多(P＜0.05).结论 成功建立了稳定转染DCN的HepG2细胞株,并证实DCN能抑制细胞生长、阻滞细胞周期、提高caspase-3酶活性.