苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用

目的考察苛求芽孢杆菌(ATCC 26904)分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后,用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链,分子量为34.7 kD(1kD=0.992 1 ku),其米氏常数为(0.22±0.01)mmo1/L(n=11),黄嘌呤抑制常数为(36±3)μmo1/L(n=4)。用此尿酸酶,只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30%,应用积分法就能可靠预测本底;直接测定反应前吸收,可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmo1/L黄嘌呤等干扰。监测0.025 U/ml尿酸酶反应5 min的数据,其线性响应范围为1~50μmol/L;所得临床标本血清尿酸含量(Ck)与过氧化物酶偶联间接终点平衡法(Ce)正相关(Ck=-0.008 1.046Ce,r=0.996,n=206),但Bland-Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸,并可保障其优势。     

CYP3A22稳定表达HepG_2细胞株的建立及其探针药物代谢活性鉴定

目的 建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株.方法 通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因.并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为模板,采用PCR扩增CYP3A22基因并在其3'添加组氨酸标签,扩增产物经BamH Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A22基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,测序表明,CYP3A22基因真核表达载体正确构建;将测序正确的CYP3A22基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,RT-PCR及Westernblot分析,并用探针药物硝苯地平对重组细胞进行进行活性鉴定.结果 与HepG2相比,HepG2-CYP3A22细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性.结论 成功建立了稳定表达CYP3A22的HepG2细胞株,可用于相关的药物代谢研究.     

药靶发现和药物筛选

药靶是指有选择性的药物体内作用对象,主要是受体、酶、离子通道、核酸等.确定有效新药靶是药物优化设计和高通量筛选的关键,对新药研发有重要意义.当前,各种新技术与新策略的应用极大促进了药靶发现.本文简述当前药靶发现的常用策略和应用.     

罗哌卡因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨罗哌卡因对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖能力和迁移能力的影响,为BMSCs的临床应用提供进一步的研究基础。方法：使用贴壁法分离扩增大鼠BMSCs,流式细胞仪检测细胞表面分子标志物;成脂、成骨和成肌诱导分化检测细胞的分化潜能;分别使用CCK-8和Brdu掺入方法检测不同浓度罗哌卡因处理对BMSCs增殖能力的影响;细胞划痕实验和Millicell小室迁移实验检测不同浓度罗哌卡因对大鼠BMSCs迁移能力的影响。结果：培养所得细胞具备BMSCs的表面标志物特点和多向分化潜能。50,100μmol/L罗哌卡因处理可显著降低BMSCs的增殖速度,降低BMSCs的Brdu阳性率,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。划痕实验和迁移实验表明罗哌卡因处理可引起BMSCs迁移能力的明显降低（P〈0.05）。上述效应均对罗哌卡因的给药剂量呈现明显的剂量依赖关系,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：罗哌卡因可显著降低大鼠BMSCs的增殖能力和细胞迁移能力,提示外科应用BMSCs时需注意罗哌卡因等长效局部麻醉剂对BMSCs造成的不利影响。