利用目的基因随机表位库筛选葡激酶抗原决定簇

目的：用目的基因随机表位库方法寻找葡激酶(straphylokinase SAK)的显性表位。方法：①SAK免疫BALB／C小鼠，免疫亲和层析纯化抗血清后，抗SAK抗体用生物素标记；②构建SAK随机表位肽库，随机挑取12个独立克隆测序，分析库DNA片段的分布和碱基含量情况；③以多抗为靶蛋白用克隆原位杂交法筛选肽库；④构建SAK的缺失突变体mSAK，Western blot分析mSAK的免疫反应性。结果：①筛选肽库得到一个由19个氨基酸组成的免疫显性表位区，命名为A1区；②mSAK不能与抗SAK多抗反应。结论：用简便、有效的方法筛选得到了SAK的一个表位A1区，初步确定A1区是SAK引起免疫反应的重要区域。     

人体肿瘤因素对放免显像的影响

肿瘤放免显像的质量，取决于肿瘤细胞结合标记抗体的量，而人体肿瘤的生长状况，是影响肿瘤对标记抗体摄取的重要因素之一。肿瘤方面的因素如肿瘤抗原表达量的高低、肿瘤抗原是否脱落进入血循环、病灶的大小与血供、肿瘤患体内ＨＡＭＡ反应等，都与抗体结合量有密切关系。提高病灶部位抗原的量、改善肿瘤血供，消除ＨＡＭＡ等不利因素，可望提高显像质量。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的研究

目的 进行重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）的临床前研究和Ⅰ期临床试验。方法在动物模型上进行ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的药理、毒理、药代和药效研究，并在人体上进行安全性评价和初步疗效观察。结果体外实验证明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血祖细胞有促增殖作用；在６０Ｃｏｒ射线照射造成的白细胞低下动物（狗和猴），显示了明显的升白细胞作用；急性毒性试验显示，ＬＤ５０大于５０００μｇ／ｋｇ；小鼠的药代动力学研究表明，注入的ＧＭ－ＣＳＦ主要从尿中排出，并不在体内蓄积；狗的慢性毒性试验表明在高于临床用量３倍时，无明显毒性反应。Ⅰ期临床试验证明，每天在２．５－７．５μｇ／ｋｇ的剂量下使用是安全的，并能升高白细胞。结论ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可用于治疗放疗与化疗引起的白细胞减少症。     

IFN-γ增强TNF相关凋亡诱导配体对骨巨细胞瘤细胞的抑制

目的: 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosisinducing ligand，TRAIL)对人骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone ,GCT)的作用及干扰素γ(interferonγ,IFNγ)对TRAIL抗瘤活性的影响,并探讨其影响机制。方法： 选取2003年-2006年于301医院骨科手术切除的骨巨细胞瘤新鲜标本9例，将取自标本的骨巨细胞瘤细胞分为:对照组, TRAIL组，IFNγ组, IFNγ诱导后加入TRAIL组,应用CCK8法检测TRAIL、IFNγ单独及联合作用对骨巨细胞瘤细胞的增殖抑制作用，流式细胞仪、TUNEL法分析IFNγ对TRAIL凋亡诱导作用的影响，RTPCR法检测IFNγ作用前后肿瘤细胞DR4、DR5、TRAIL的表达。结果:骨巨细胞瘤细胞对照组存活率为（98.64±0.31）%，TRAIL (100、 500、1 000 μg/L)单独作用对肿瘤细胞增殖无明显抑制作用;IFNγ(500、1 000 U /ml)单独作用后,细胞的存活率分别为(94.05±1.89)%、(9047±2.66)%。IFNγ(500 U /ml)诱导24 h后与TRAIL(100、200 μg/L)联合作用,细胞的存活率分别为(84.65±246)%、(77.65±3.14)%。两者联合作用后流式细胞仪测得联合作用组凋亡率为(27.94±2.88)%、(38.65±2.46) %，对照组凋亡率为(1.77±0.49)%；TUNEL法测得联合作用组凋亡率分別为(19.63±3.51)%、(29.28±4.80)%，对照组的凋亡率为(1.1±0.17)%。RTPCR 结果显示，IFNγ作用24 h后肿瘤细胞TRAIL、DR4、DR5 mRNA表达明显上调。结论：骨巨细胞瘤细胞对TRAIL不敏感, IFNγ可以明显提高TRAIL诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的敏感性,其机制可能与IFNγ上调TRAIL、DR4、DR5mRNA的表达有关。     

人体肿瘤因素对放免显像的影响

肿瘤放免显像的质量，取决于肿瘤细胞结合标记抗体的量，而人体肿瘤的生长状况，是影响肿瘤对标记抗体摄取的重要因素之一。肿瘤方面的因素如肿瘤抗原表达量的高低、肿瘤抗原是否脱落进入血循环、病灶的大小与血供、肿瘤患者体内ＨＡＭＡ反应等，都与抗体结合量有密切关系。提高病灶部位抗原的量，改善肿瘤血供，消除ＨＡＭＡ等不利因素，可望提高显像质量。     

COMPARISON OF FOUR METHODS TO GENERATE IMMUNOREACTIVE FRAGMENTS OF A MURINE MONOCLONAL ANTIBODY OC859 AGAINST HUMAN OVARIAN EPITHELIAL CANCER ANTIGEN

In the present study,four different proteases (pepsin,papain,bromelain and ficin) were screened with a murine monoclonal antibody OC859,in order to verify whether different digestion procedures could improve yield and stability of the F(ab‘)2 or Fab fragments.The yields of F(ab‘)2 or Fab fragments from digestion with pepsin,papain,bromelain and ficin were respectively 20.3 /-2.0%,50.5% /-5.0%,74.4 /-2.7% and 82.8 /-10.2% of the theoretical maximum.Immunoreactivity in a noncompetitive solid-phase radioimmunoassay (SPRIA) of the fragments generated by the four proteases were respectively 10 /-5%,36 /-5%,60 /-6% and 75 /-6% of the intact OC859 IgG.These results suggested that the fragmentation of OC859 with ficin gave a higher yield of superior immunoreactive fragments.     

从噬菌体随机肽库中筛选IL-6抗体的识别表位

目的：从噬菌体随机６肽文库中筛选ＩＬ－６抗体的识别表位。方法：利用具有ＩＬ－６中和活性的单抗Ｃ２２０筛选呈现于丝状噬菌体表面Ｐ３蛋白的随机６肽文库。结果：从噬菌体随机６肽文库中选出３６株可与单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列ＳＥＬＲ,该序列与ＩＬ－６的育列具有一定同源性。竞争结合实验的Ｗｅｓｔｅｍ印迹分析,带有ＳＷＦＮＬＲ和ＨＳＷＬＲＹ小肽的２株噬菌体克隆可与ＩＬ－６竞争结合单抗Ｃ     

COMPARISON OF FOUR METHODS TO GENERATE IMMUNOREACTIVE FRAGMENTS OF A MURINE MONOCLONAL ANTIBODY OC859 AGAINST HUMAN OVARIAN E

ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＯＦＦＯＵＲＭＥＴＨＯＤＳＴＯＧＥＮＥＲＡＴＥＩＭＭＵＮＯＲＥＡＣＴＩＶＥＦＲＡＧＭＥＮＴＳＯＦＡＭＵＲＩＮＥＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＹＯＣ８５９ＡＧＡＩＮＳＴＨＵＭＡＮＯＶＡＲＩＡＮＥＰＩＴＨＥＬＩＡＬＣＡＮＣＥＲＡ...