藏药丹葛颈舒胶囊中丹参酮ⅡA的RP-HPLC测定法建立

目的 建立藏药丹葛颈舒胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法( RP-H PLC)摸索实验条件,建立藏药丹葛颈舒胶囊中丹参酮ⅡA的RP-HPLC测定法.结果 该方法的线性范围为2.0～64.0 mg·L-1,r为0.9998,平均回收率为102.14％,RSD为1.22％.结论 本法简便、准确、重现性好,可用于藏药丹葛颈舒胶囊的质量控制.     

低氧环境对大鼠血清促血管生成素-1水平的影响及沙利度胺的干预效应

目的观察低氧环境对大鼠血清促血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）水平的影响,并探讨低氧条件下血管生长抑制剂沙利度胺对血清Ang-1水平的干预效应。方法采用低压氧舱模拟4000m海拔的高原低压低氧环境。将实验动物分为低氧组、沙利度胺预防组和沙利度胺治疗组,经不同时间的低氧处理及沙利度胺干预后,测定血清Ang-1的水平,并与对照组进行比较分析。血清Ang-1的测定采用固相双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定。结果低氧组大鼠血清Ang-1浓度呈现随低氧时间的延长而不断上升的趋势;各组与对照组间血清Ang-1浓度存在显著差异（P〈0.01）。采用沙利度胺进行预防性干预后土鼠血清Ang-1水平仍呈持续增高,但增幅显著降低。经沙利度胺治疗后,治疗组血清Ang-1水平恢复到对照组水平。结论在低氧环境中,大鼠血清Ang-1浓度呈现随低氧时间的延长而不断增高的趋势;沙利度胺可部分阻止低氧引起的大鼠血清Ang-1的增高;沙利度胺对低氧引起的血清Ang-1水平增高具有治疗作用。沙利度胺在低氧引起的血管增生性疾病的预防和治疗中可能具有一定的作用。     

唐古特红景天乙醇提取物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的 研究唐古特红景天75%乙醇提取物对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响并初步探讨其作用机制.方法 采用高效液相色谱法鉴定提取物的有效成分;采用MTT试验检测提取物对MCF-7细胞增殖的影响;采用光镜观察药物处理后细胞形态学的变化;利用Annexin V-FITC/PI 双染色流式细胞术分析药物对细胞凋亡的影响....     

CCl_4橄榄油溶液对肝硬化大鼠模型制备成功率的影响

目的:对现有肝硬化大鼠造模方法进行改良,构建出稳定的肝硬化大鼠模型并降低制模过程中大鼠的死亡率,同时探索乙型肝炎病毒导致肝硬化大鼠模型的制备,为相关的实验提供稳定可靠的动物模型。方法:40只Wistar雌性大鼠,按0.4 ml/100g剂量予以腹腔注射50%CCl4的橄榄油溶液,每周注射2次并称量其体重,同时以10%乙醇溶液为其惟一饮用水源;体重降低大于或等于10 g以上时,暂停给药,并改用自来水为饮用水源,直到体重恢复到下降少于10 g时继续上述方案。20只Wistar雌性大鼠,按人乙型肝炎病毒患者血清1∶20生理盐水稀释予以腹腔注射,每周注射1次,同时每周按2次30%乙醇溶液灌胃,以自来水和10%乙醇溶液交替作为水源,高脂饮食。结果:CCl4橄榄油组:40只Wistar大鼠10周后,死亡11只,成模29只;病毒组:20只Wistar雌性大鼠12周后,死亡1只,未成模。结论:经过改良的肝硬化大鼠制模方案可增加建模的成功率,并可形成由慢性肝炎转化而来的小结节性肝硬化模型;病毒性肝硬化大鼠模型为以后成功制备模型提供了参考依据。     

TRPC_3参与缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)在缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用。方法:采用HUVECs细胞株,复苏传代后计数稀释,接种于6孔培养板中,实验组分为常氧对照组(5%CO2+95%空气)和缺氧组(1%O2+5%CO2+94%N2),处理24h后,应用实时荧光定量RT-PCR法及WesternBlot法检测TRPC3mRNA和蛋白水平的表达变化。构建靶向TRPC3基因的siRNA和无关序列质粒表达载体,分别转染至HUVECs,缺氧处理后再用四甲基偶氮唑盐比色法(Methods the tetrazolium,MTT)检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡。结果:缺氧处理24h,HUVECs中TRPC3mRNA和蛋白表达明显升高,细胞存活率为67.4%,与常氧对照组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3干扰组细胞存活率为92.7%,与缺氧组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3假干扰组与缺氧组无显著性差异(P>0.05)。荧光显微镜下观察,常氧对照组胞核均匀蓝染;缺氧处理组和缺氧+TRPC3假干扰组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;而缺氧+TRPC3干扰组胞核均匀蓝染。结论:TRPC3参与缺氧诱导HUVECs凋亡。     

SDS热变性法可提高PCR-SSCP检测线粒体DNA突变分析结果的准确性及清晰度

目的通过改变变性方法来提高PCR-SSCP检测小型哺乳动物线粒体DNA突变分析结果的准确性及敏感度,以期提高大样本动物线粒体DNA突变的筛查准确性和筛查效率。方法利用碱变性和SDS热变性对PCR产物进行处理,并加样到聚丙烯凝胶上,观察两者结果,并对背景色、条带清晰度、样本间距、易判性及敏感度等方面进行对比。结果通过比较,SDS热变性试验方法提高了条带的清晰度,降低了背景色。结论 SDS热变性法可提高PCR-SSCP检测线粒体DNA突变分析结果的准确性及清晰度,可提高大样本动物DNA突变的筛查准确性和筛查效率。     

10株青海湖盐单胞属菌株种间分子多样性分析

目的 对青海湖盐单胞属菌株进行种间分子多样性分析.方法 利用PCR扩增青海湖10株盐单胞菌16S rDNA序列和16S - 23S间隔序列,通过测序、Blast对比以及RFLP方法分析10株青海湖盐单胞菌的序列差异;并结合SDS-PAGE技术方法研究其全菌体蛋白的种间差异.结果 通过测定16S rDNA序列同源性、分析16S-23S rDNA ISR多态性和比较全菌体蛋白SDS -PAGE谱带,确定了10株青海湖盐单胞菌在种间具有相对的一致性.结论 初步验证了分子表型特性的多相研究对种单元初分类具有重要意义.     

塔斯品碱在Caco－2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用Caco-2细胞单层模型研究塔斯品碱的双向转运,考察时间、药物质量浓度对塔斯品碱吸收的影响。采用高效液相色谱法检测塔斯品碱的质量浓度,计算其表观渗透系数（Papp）。结果塔斯品碱在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收主要是被动转运。