丹皮酚对心梗后心室重构大鼠心肌组织TGF-β1表达的影响

目的：：探讨丹皮酚(Pae)对急性心肌梗死(AMI)后心室重构大鼠心肌组织TGF-β1表达的影响。方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Pae组和卡托普利组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI大鼠模型,Pae组大鼠腹腔注射Pae(16.0mg/kg),卡托普利组大鼠灌胃给予卡托普利(10.0mg/kg),连续给药4周。分别检测各组大鼠的左心指数(LVWI)、左室胶原容积分数(CVF),免疫组化法检测心肌组织TGF-β1蛋白的表达。结果：与模型组大鼠比较,Pae组、卡托普利组大鼠的LVWI、CVF和心肌组织TGF-β1蛋白的表达明显降低(P＜0.01)。结论：Pae改善大鼠心室重构的机制可能与其下调TGF-β1蛋白的表达有关。     

丹皮酚、三七总皂苷组方对心肌梗死后心室重构大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚、三七总皂苷组方对心梗后心室重构大鼠转化生长因子(TGF)-β/Smads信号通路的影响及可能机制。方法通过结扎左冠状动脉前降支制造大鼠急性心肌梗死模型,依干预方式不同分为模型组、丹皮酚(8 mg·kg-1)组、三七总皂苷(40 mg·kg-1)组、组方低剂量组(丹皮酚4 mg·kg-1+三七总皂苷20 mg·kg-1)、组方高剂量组(丹皮酚8 mg·kg-1+三七总皂苷40 mg·kg-1),卡托普利组(10 mg·kg-1)。另设假手术组,只穿线不结扎。连续给药28 d后检测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVEDP)、左心室内最大上升和下降速率(±dp/dtmax);HE染色观察各组大鼠心肌病理学变化;Western blot检测TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达。结果用药组与模型组比较,组方组与中药单药组比较,组方高剂量组与组方低剂量组比较,各指标变化均较明显,差异均有统计学意义(P<0.01)。模型组呈病理改变,各用药组均有不同程度的病理结构改善;组方组和卡托普利组改善最明显。与模型组比较,各用药组TGF-β1、Smad2/3蛋白表达较模型组降低,组方组较丹皮酚组和三七总皂苷组降低;组方高剂量组较组方低剂量组降低(均P<0.01)。结论丹皮酚、三七总皂苷组方可抑制心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达,有明显协同作用,其机制可能是通过阻断TGF-β/Smads信号通路实现的。     

补阳还五汤对脑出血模型大鼠脑组织CXCR4-PI3K自噬信号传导通路及Beclin-1的影响

BACKGROUND:Buyang Huanwu Decoction is commonly used in clinical medicine in treatment of intracerebral hemorrhage. Previous studies have been found that it has excellent neuroprotective effect, can efficiently inhibit the apoptosis of nerve cells. Autophagic activity is closely related to apoptosis of nerve cells. CXCR4-PI3K autophagy signaling pathway has been verified in clinic. However, the effect of Buyang Huanwu Decoction is poorly understood. There is no study on Beclin-1 in the neuroprotective studies of Buyang Huanwu Decoction.  OBJECTIVE:To explore the effects of Buyang Huanwu Decoction on CXCR4-PI3K autophagy signaling pathway and Beclin-1 in rats with cerebral hemorrhage and related mechanisms.  METHODS:According to Rosenberg method, a rat model of cerebral hemorrhage was replicated and intragastrically administered Buyang Huanwu Decoction. Western blot assay was used to measure Beclin-1 protein. Immunohistochemical method was utilized to detect the expression of PI3K, AKT, stromal cell derived factor 1 and CXCR-4 protein. TUNEL assay was applied to identify apoptosis.  RESULTS AND CONCLUSION: (1) After administration, Buyang Huanwu Decoction could reduce the number of neuronal apoptosis in rats with intracerebral hemorrhage, up-regulate the expression of Beclin-1, PI3K, AKT, stromal cell derived factor 1, and CXCR-4 protein, and exert neuroprotective effect. (2) Buyang Huanwu Decoction could activate CXCR4-PI3K autophagy signal transduction pathway, both to stimulate autophagy and to regulate autophagy state, can inhibit apoptosis, and exert cerebral protective effect.     

舒胃方调控SCF/c-Kit通路对功能性消化不良大鼠胃排空功能及Cajal间质细胞的影响

目的:探讨舒胃方调控干细胞生长因子(stem cell factor, SCF)/c-Kit通路对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠胃排空功能及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal, ICCs)的影响并进行分子对接,分析其作用机制。方法:32只SD级大鼠,随机取8只为空白组,另外24只通过多因素应激干预法建立FD大鼠模型,随机分为模型组、莫沙比利组及舒胃方组。光学显微镜观察大鼠胃窦组织;酚红法检测大鼠胃排空率;透射电镜观察大鼠ICCs的超微结构;ELISA法检测大鼠腹主动脉SCF含量;Western Blot检测大鼠胃窦组织SCF、c-Kit蛋白的表达;对舒胃方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:各组大鼠胃壁组织结构完全,胃黏膜上皮完整,胃腺体结构和排列规整,未见明显炎性细胞浸润。空白组大鼠ICCs超微结构清晰,数量多,体积大,呈圆形、梭形,细胞核占比多,细胞质占比少,线粒体、内质网、核糖体多;模型组大鼠ICCs超微结构改变,数量少,体积小,线粒体...     

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。     

丹皮酚对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及TGF-β1,CollagenⅢ表达的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对急性心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)表达的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠,采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,记录结扎前及结扎后10,20,40,60,120 min,24 h心电图变化,测量各个时点ST段的偏移幅度并进行统计学分析,将造模成功后的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组;另有只穿线不结扎的假手术组,共6组,丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip 8.0,12.0,16.0 mg·kg~(-1)剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10.0 mg·kg~(-1),所有干预均1次/d;28 d后取材,HE染色观察心肌组织病理生理学改变情况,采用免疫组织化学法检测左室梗死区TGF-β_1和CollagenⅢ蛋白的表达。结果:HE染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠左室病理生理学改变显著,梗死灶边缘部分心肌细胞发生肥大、伸长,左心室壁部分心肌凝固性坏死,凋亡细胞胞核固缩、胞质伊红深染,另有部分组织发生疏松水肿,与模型组比较,各治疗组大鼠心肌细胞病理改变均不同程度减轻;免疫组织化学染色结果显示:模型组与假手术组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白的表达明显增多(P0.01);治疗组各组及卡托普利组与模型组比较,TGF-β_1及collagenⅢ蛋白表达均降低(P0.01,P0.05)。结论:丹皮酚可降低心肌梗死大鼠心肌的病变程度,改善心室重构及心功能,其作用机制可能是通过降低心肌组织中TGF-β_1及collagenⅢ的表达来实现的。     

丹皮酚对急性心肌梗死大鼠Smad2, Smad3, Smad7 mRNA含量表达的影响

目的:研究丹皮酚对急性心肌梗死(AMI)大鼠进行性心室重构的保护作用及其对转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路上Smad2,Smad3,Smad7 mRNA含量表达的影响。并探讨其延缓甚至逆转心室重构的分子机制。方法:采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作在体大鼠急性心肌梗死模型,在心电图评价的基础上,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组,另有只穿线不结扎的假手术组,每组10只,共6组。丹皮酚低、中、高剂量组分别给予ip8,12,16 mg·kg-1剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,卡托普利组用蒸馏水稀释其片剂碾成的药粉,给予ig 10 mg·kg-1,所有干预均1次/d;4周后分别取材,测定各组大鼠心脏质量指数及梗死面积,采用实时荧光定量RTq PCR技术检测各组心肌组织Smad2,Smad3,Smad7 mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,丹皮酚低、中、高剂量组、卡托普利组大鼠心肌梗死面积明显减少(P0.05),心脏质量指数降低(P0.05);模型组Smad2,Smad3 mRNA的表达水平均明显高于假手术组(P0.01),Smad7的表达低于假手术组(P0.01);丹皮酚各剂量干预组Smad2,Smad3 mRNA的表达明显低于模型组(P0.01),Smad7 mRNA的表达则明显强于模型组(P0.01)。结论:丹皮酚有抗AMI大鼠心肌纤维化的作用,其机制与上调TGF-β1抑制性信号蛋白Smad7的mRNA表达及下调TGF-β受体调控信号蛋白Smad2,Smad3的mRNA表达有关。即其作用机制可能与干预TGF-β/Smads信号转导有关。     

丹皮酚对大鼠急性心肌梗死所致心肌纤维化的影响及机制

目的:观察丹皮酚(paeonol,Pae)对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)所导致的心肌纤维化的干预作用,并研究其作用机制是否与Pae影响心肌组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),Smad 2 RNA及蛋白含量的表达有关。方法:采用左冠状前降支(LAD)结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型,以心电图出现ST段水平向下或向上偏移≥0.1 m V且T波高耸超过同导联R波的1/2、左室前壁颜色变苍白视为心肌梗死(MI)模型成功,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丹皮酚低、高剂量组,另有只穿线不结扎的假手术组,共4组,丹皮酚低、高剂量组分别给予ip 8.0,12.0mg·kg-1剂量的丹皮酚注射液,假手术组与模型组每天ip等体积生理盐水,每天给药1次;28 d后取材,检测左心指数;HE染色,Masson染色分别观察心肌组织病理生理学改变及心肌间质纤维化情况,实时荧光定量RT-PCR和Western blotting法分别检测左室梗死区TGF-β1,Smad2的mRNA和蛋白表达。结果:左心指数:与假手术组比较,模型组左心指数明显升高(P0.01);与模型组比较,丹皮酚8.0,12.0 mg·kg-1组左心指数均下降(P0.01,P0.05);HE染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠左室病理生理学改变显著,梗死边缘部分心肌细胞发生肥大、伸长、左心室壁部分心肌凝固性坏死,凋亡细胞胞核固缩,胞质伊红深染,另有部分发生疏松水肿,与模型组比较,丹皮酚8.0,12.0 mg·kg-1组病理改变均不同程度减轻;Masson染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌胶原纤维明显增多,纤维瘢痕形成,心肌纤维化程度较重,与模型组比较,丹皮酚8.0,12.0 mg·kg-1组大鼠心肌纤维化程度均不同程度减轻;与假手术组比较,模型组TGF-β1,Smad 2 mRNA和蛋白的相对表达量均增多(P0.01);与模型组比较,丹皮酚8.0,12.0 mg·kg-1组TGF-β1,Smad 2 mRNA和蛋白表达均降低(P0.01)。结论:Pae具有抗急性心肌梗死所致大鼠心肌纤维化的作用,其机制可能与其干预TGF-β1/Smad2信号通路的传导有关。     

补阳还五汤提取物灌胃对脑出血大鼠脑组织中PI3K、AKT、Caspase-3表达的影响

目的 观察补阳还五汤提取物对脑出血大鼠脑组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对脑组织的保护作用机制。方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、银杏叶片组各18只,后4组采用Rosenberg法建立脑出血大鼠模型后,分别给予生理盐水、补阳还五汤提取物、银杏叶片连续灌胃35 d。用免疫组化法检测PI3K、AKT、Caspase-3蛋白表达,TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况,干湿重法检测脑组织含水量,甲酰胺法检测血-脑脊液屏障通透性。结果 与模型组比较,补阳还五汤组、银杏叶片组PI3K、AKT蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑组织含水量、凋亡细胞数减少,血-脑脊液屏障通透性降低(P均<0.05)。结论 补阳还五汤提取物可能通过激活PI3K/AKT信号通路,降低血-脑脊液屏障通透性来保护脑出血大鼠脑组织。