精液细胞DNA倍体分析结合生精细胞检查鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症

目的：拟通过比较梗阻（OA）和非梗阻性无精子（NOA）症患者精液细胞DNA倍体分析与细胞学检查结果的特点,以期建立一种无创的诊疗方案以鉴别OA与NOA。方法：NOA患者20例和OA患者10例,按照WHO方法进行精液分析诊断,获取其精液标本,液化后离心取沉淀物,1份采用体积分数70％冰乙醇重悬精液沉淀,4~C固定后用PI染色,采用流式细胞仪进行DNA倍体分析。同时,取另1份精液沉淀涂片,进行Diff-Quick染色和免疫细胞化学染色。结果：DNA倍体分析结果表明,20例NOA患者精液中均存在单倍体（1Y）、二倍体（2N）和四倍体（4N）细胞,其中2N细胞含量最高,约占71．25±8．73％。1N细胞的百分比含量为5．46±2．93％,4N细胞含量为3．28±2．54％。10例OA患者精液中有8例只存在2N细胞,含量为71．67±13．09％,未检测到1N和4N,2例未检测到各种倍体细胞。精液细胞学检查结果表明,20例NOA患者中有15例患者精液中可检测出生精细胞,5例患者精液中未检出生精细胞。10例OA患者精液中均未检出生精细胞,其中2例没有任何细胞。结论：精液细胞DNA倍体分析与细胞学检查作为2种无创的检查方法,均可作为评估患者生精功能的辅助诊疗手段,两者结合可作为鉴别OA和NOA的辅助诊断指标。     

高、低生育力捐精者复苏精液功能指标的比较性研究(附40例报告)

目的:探讨可以全面有效评估捐精者生育力的精子功能指标,运用于复苏精液标本的筛选,旨在提高辅助生殖技术成功率。方法:根据捐精者精液使用的妊娠结局,收集上海市人类精子库高、低生育力捐精者的冷冻精液标本各20例,比较两组精液标本复苏后的精子浓度、活力、正常形态率、顶体完整率、DNA完整性以及线粒体膜电位。结果:高、低生育力组精液复苏经系列评估后,正常形态率分别为(18.50±6.10)%、(14.42±6.44)%;顶体完整率分别为(86.17±4.49)%、(80.04±7.52)%;精子DNA碎片率分别为(9.21±3.22)%、(15.72±8.20)%,以上指标经统计学分析两组之间具有显著性差异(P0.05)。但线粒体膜电位高生育力组[(56.75±18.80)%]与低生育力组[(52.23±18.86)%]之间无显著性差异(P0.05)。精子线粒体膜电位与精子活力呈显著正相关(r=0.760,P0.05),其他功能指标与精子浓度、活力无显著相关。结论:精子浓度、活力与正常形态率、顶体完整率以及DNA完整性可以有效评估捐精者复苏精液生育能力。     

气相冷冻法和液相冷冻法对人类精子运动能力、形态学及超微结构的影响

目的研究液氮蒸汽熏蒸法(简称气相冷冻法)和直接投入液氮冷冻法(简称液相冷冻法)对人类精子冷冻复苏后运动能力、形态学及超微结构的影响。方法选择25例捐精者的精液标本,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)作为冷冻保护剂。每份精液标本等分为2份,分别进行气相法冷冻和液相法冷冻。复苏后,利用IVOS精子分析仪测定精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数,巴氏染色观察精子形态并计算形态正常率,透射电子显微镜观察精子超微结构。结果气相法冷冻从28℃降温到-185℃用时468 s,再经过1 h后降温到-196℃;液相法冷冻从30℃降温到-196℃用时90 s。两种方法冷冻复苏后精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数、形态正常率与冷冻前比较均明显降低(P<0.05)。气相法冷冻复苏后精子的复苏率、总活动率、前向运动精子百分率均高于液相法,差异有统计学意义(P<0.05);两种冷冻方法复苏后精子形态正常率、运动参数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。通过透射电子显微镜观察,使用GYC作为冷冻保护剂,两种方法冷冻复苏后,精子头部质膜和顶体膜超微结构未出现明显的损伤。结论改良GYC保护剂对精子超微结构具有保护作用;气相冷冻法冷冻人类精子的复苏结果优于液相法。     

温度和Hoechst 33258浓度对人活精子标记效果的影响

目的研究孵育温度和荧光染料Hoechst 33258(H258)的浓度对活体标记人类精子效果的影响。方法随机选取14份精液标本,经洗涤处理后,在不同温度(0℃、室温和37℃)下分别用0(对照)、0.01、0.1 mg/mL的H258孵育1 h。记录精子前向运动百分率及H258着色率。以未予处理的精液标本作为空白对照组。结果在观察条件范围内,孵育温度与H258浓度对精子运动的影响有统计学意义。随着H258质量浓度的升高和孵育温度的降低,精子前向运动百分率下降(P<0.01)。精子着色率随孵育温度和H258质量浓度的升高而提高;当H258质量浓度为0.1 mg/mL时,不同孵育温度下的精子着色率比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 H258可用作精子活体荧光标记,37℃+0.1 mg/mL H258是本研究中最优的染色条件。但仍需要根据不同使用目的选择孵育条件。     

电刺激取精术获取精子经体外培养后冻存方法研究

目的:优化电刺激取精术获取的精子处理和冷冻复苏方法,为临床不射精症的治疗和生育力保存提供新途径。方法:将20例同房不射精患者电刺激获取的精液(或尿液)样本分为两组,其中6例采用PBS洗涤并用Modified-HTF重悬(A组),另外14例用Modified-HTF直接洗涤并重悬(B组),对处理后精子行CASA,分析精子浓度和活动率;采用麦管载体和一步熏蒸法冷活动率为(1.12±0.41)%,M-HTF处理组的精子活动率为(9.23±9.43)%;冷冻复苏后,A组精子复苏后活动率和冷冻复苏率分别为(0.24±0.41)%、8.37%;B组的精子活动率和复苏率显著增加,分别为(4.11±2.33)%、35.41%。同样,电刺激尿液样本中,PBS处理组的精子活动率为(1.30±0.51)%,M-HTF处理组的精子活动率提高至(5.48±5.32)%;冷冻复苏后,A组的精子活动率和复苏率分别为(0.26±0.40)%、6.31%;B组的精子活动率和复苏率,分别为(3.02±1.64)%、45.88%。结论:本研究所建立的电刺激精子经体外培养及冷冻复苏的方法,可以显著增加精液和尿液样本中精子的活力,改善精子的冷冻复苏率,为临床不射精症的治疗和生育力保存提供新途径。     

人类精液一步熏蒸法冻融的实验研究

目的:研究一步熏蒸法对冷冻精子复苏率的影响,以探索人类精子的最优冷冻方法。方法:选择100例符合WHO第5版正常参考值的精液标本,按照程序降温法和一步熏蒸法分2组进行冷冻。利用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测冷冻前后精子前向活动力,同时比较2种方法对精子膜功能完整性、畸形率的影响。结果:冷冻后程序降温法和一步熏蒸法前向运动精子百分率差异有显著性[(34.0±18.4)%vs(43.0±19.5)%,P<0.05],均较冷冻前的(57.0±16.7)%显著下降(P<0.05);2种冷冻方法前向运动精子复苏率差异显著[(52.2±20.6)%vs(67.1±20.0)%,P<0.05];与冷冻前[(84.5±7.5)%]相比,2种方法冷冻后低渗肿胀精子百分率明显下降[分别为(67.1±11.1)%和(70.6±10.0)%,P<0.05],2种冷冻方法间差异也显著(P<0.05);而畸形率冷冻后显著增加[(85.0±8.7)%和(85.7±9.1)%vs(77.8±9.6)%,P<0.05],但2种冷冻方法之间差异无显著性(P>0.05)。结论:与程序降温法相比,一步熏蒸法操作简单方便,适用于不同时间段的精液标本冷冻,具有较高的冷冻复苏率,是一种值得推荐的快速冷冻方法。     

新型冷冻管承载设计对人类精子复苏率的影响

目的探讨精液冷冻管承载工具对人类精液活动力及复苏率的影响,优化精子冷冻保存的方案.方法取本库20例健康自愿供精的精液,同一例供精者的精液分成两份:实验组冷冻管用棉花包裹,对照组不做任何处理.通过相差显微镜镜检,利用计算机辅助精液分析(CASA)系统分析两组冷冻前后人类活动精子的运动参数,并作相关的统计学分析及比较.结果实验组冷冻复苏率为(66.71±6.51)%,对照组冷冻复苏率为(59.67±7.74)%(平均提高了7.04%)(P<0.01).结论冷冻管包裹棉花的冷冻前处理对精子有一定的保护作用,因而冷冻管承载工具的专门设计对精液冷冻有实质性意义.