细胞芯片检测新生隐球菌菌株丝氨酸蛋白酶的表达

目的:利用细胞芯片技术检测新生隐球菌菌株中丝氨酸蛋白酶的表达,初步探讨丝氨酸蛋白酶在新生隐球菌致病过程中的作用.方法:不同来源和血清型的新生隐球菌菌株36株,应用组织芯片构建仪制备菌株芯片,利用菌株细胞芯片和免疫组化技术对菌株中丝氨酸蛋白酶的表达情况进行检测.结果:丝氨酸蛋白酶在所有菌株细胞中强阳性表达率为67.0%(25/36),强阳性表达率在血清A型、血清B型、血清D/AD型分别为46.2%(6/13)、92.3%(12/13)、66.7%(4/6),在环境分离株、临床分离株及荚膜缺陷株中分别为55.6%(5/9)、82.6%(19/23)、25%(1/4).不同血清型及不同来源菌株中,以血清B型、临床分离株中的丝氨酸蛋白酶阳性表达率高(P<0.05).结论:菌株细胞芯片是检测致病性真菌样本成分的新技术;致病力强的新生隐球菌临床分离株中的丝氨酸蛋白酶表达最高,提示丝氨酸蛋白酶在临床菌株致病过程中起到主要作用.     

部分致病性真菌丝氨酸蛋白酶的研究进展

致病性真菌主要有新生隐球菌、白念珠菌和烟曲霉菌等，它们都是重要的条件致病菌，主要感染免疫受损、免疫力低下人群以及艾滋病患者。丝氨酸蛋白酶目前除了被认为是致病性真菌潜在的毒力因子外，还被作为开启血脑屏障的钥匙而日益受到重视。本文综述了近年来对致病性真菌丝氨酸蛋白酶的检测、其属性和可能的致病机制，尤其在新生隐球菌性脑膜炎形成过程中对血脑屏障的作用等方面的研究进展。     

卡介菌多糖核酸肌注联合异丙嗪局部注射治疗寻常疣

2005年10月——2007年4月我们采用单纯CO2激光和卡介菌多糖核酸（商品名卡舒宁,成都生物制品研究所生产）肌内注射联合盐酸异丙嗪局部注射治疗寻常疣90例,临席效果满意,现报告如下。     

适用于提取新生隐球酵母菌及白色假丝酵母菌总核糖核酸快速方法研究

目的 探讨快速可以兼顾提取高质量的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总核糖核酸(RNA)的试验方法,为各种功能基因的表达研究奠定基础.方法 针对新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株新生隐球酵母菌H99及白色假丝酵母菌国际标准菌株ATCC 64548采用冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取总核糖核酸(RNA),用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用RT-PCR鉴定RNA质量.结果 提取的新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株总RNA产量分别为0.6μg/107细胞、1.5 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5s rRNA 3条清晰的条带;提取的白色假丝酵母和菌丝相总RNA产量分别为2.3 μg/107细胞、3.1 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的条带.结论 冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法,快速高质量适用于大小样本的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总RNA提取,满足各种类型分子生物学研究需要以及临床鉴别诊断治疗不同种类真菌感染.     

金属蛋白酶9在隐球菌性脑膜炎小鼠模型脑组织中的表达

目的:观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在鼠脑组织中的表达并探讨其意义.方法:雌性C57BL/6小鼠行股静脉插管后实验各组分别注入新生隐球菌菌悬液以及菌悬液加抑肽酶,8 h后应用免疫组织化学技术检测MMP-9在小鼠脑组织中的表达情况;同时观测小鼠脑组织匀浆后菌落计数(CFU),并与免疫组织化学结果进行对照分析. 结果:注入新生隐球菌菌悬液小鼠脑组织中的MMP-9显著升高,与正常对照组比较,有显著统计学差异(P＜0.01);菌悬液加抑肽酶小鼠脑组织中MMP-9与正常对照组比较无明显统计学差异(P＞0.05);MMP-9的染色强度与小鼠脑组织中的菌体负荷量正相关. 结论:隐球菌性脑膜炎小鼠脑组织中存在MMP-9过表达,MMP-9可能导致血脑屏障开放程度提高.     

侵袭性曲霉病大鼠生化指标的改变及烟曲霉分生孢子致病力研究

目的：观察原发侵袭性曲霉大鼠生化指标的改变,探讨烟曲霉分生孢子致病性与其表面小棘状层的密切关系。方法：60只大鼠随机均分为免疫抑制组和非免疫抑制组。非免疫抑制组分为实验组和对照组,分别接种含或不含胰酶的孢子悬液;免疫抑制组先注射环磷酰胺和醋酸可的松．余处理同非免疫抑制组。观察所有大鼠病理学改变,通过内眦静脉采血生化分析、组织器官研磨涂片以及肾脏印模等观察免疫抑制大鼠分生孢子的致病力及菌落生长情况。结果：非免疫抑制组无明显病理学改变。免疫抑制对照组病理学损伤较实验组严重。在相同培养条件下免疫抑制对照大鼠的肾脏印模、血液培养、肺组织可观察到的烟曲霉多于实验组。血清TBIL和DBIL在感染后8h有一过性升高,血清ALP、GGT、TP和Alb无显著改变,LDH、LDH1、CK、CK—MB在2h后即有明显升高,8～24h达到最高峰,为对照组的3～6倍,48～72h后逐渐下降至正常水平。结论：在烟曲霉感染过程中,细胞免疫有很重要的作用。用蛋白质破坏性试剂可除去刺猬毛样小棘状层,经过胰酶预处理的烟曲霉分生孢子所引起的原发侵袭性曲霉病大鼠病理与其对照组有显著差异,提示烟曲霉分生孢子致病力强弱与其表面棘状突起的多寡密切相关。     

窄谱UVB联合泛昔洛韦及甲钴胺治疗带状疱疹临床观察

目的观察窄谱UVB联合泛昔洛韦及甲钴胺治疗带状疱疹的临床疗效。方法用窄谱UVB联合泛昔洛韦及甲钴胺注射液治疗62例带状疱疹,并与单用泛昔洛韦治疗比较。结果治疗组止疱、止痛、结痂、痊愈时间均较对照组明显缩短（P〈0.01）,疱疹后遗神经痛发生率明显低于对照组（P〈0.05）。结论窄谱UVB联合泛昔洛韦及甲钴胺治疗带状疱疹可缩短病程,降低疱疹后遗神经痛发生率。     

播散型孢子丝菌病1例

病人,男,19岁,战士.随部队野外驻训4个月回驻地后1个月,偶尔发现右手前臂出现一个黄豆大皮疹结节,随后右上臂也出现一个类似皮疹,同时右侧颜面部出现4个类似皮疹,有轻微瘙痒和疼痛感.皮疹逐渐增大,丘疹脓疱破溃后有黄色黏稠的脓性分泌物流出结痂,无明显压痛,在部队卫生所给予抗生素口服、消炎药膏外用等对症治疗,皮损仍然呈进行性扩大,右下肢出现一个类似的黄豆大红色结节.     

新生隐球菌丝氨酸蛋白酶对脑微血管内皮细胞MMP-9、Tau—LRP、LDL—LRP的调控作用

目的:观察新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶对血脑屏障基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、微管相关蛋白(Tau-LRP)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDL-LRP)表达的影响以及抑肽酶的干预作用。方法:在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入丝氨酸蛋白酶相关成分及其特异性抑制剂后,应用免疫组织细胞化学技术检测MMP-9、Tau-LRP和LDL-LRP表达的变化。结果:应用新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶后内皮细胞的MMP-9、Tau-LRP、LDL-LRP的表达均升高,与对照组比较有显著统计学差异(P<0.01);抑制剂组的MMP-9、Tau-LRP和LDL-LRP与对照组比较无明显统计学差异(P>0.05)。结论:新生隐球菌分泌的丝氨酸蛋白酶通过上调MMP-9和(或)Tau-LRP、LDL-LRP表达,诱导内皮细胞基质降解和细胞自身微管结构及紧密连接发生变化,可能最终导致血脑屏障通透性增加。