急性非淋巴细胞白血病Th1/Th2极化改变

目的探讨急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者Th1/Th2极化改变的临床意义。方法采用流式细胞仪检测26例ANLL患者起病时及治疗缓解后外周血CD3 CD8-细胞内IFN-γ和IL-4水平,并与同期28例对照组比较。结果ANLL患者治疗前Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较对照组显著降低(P<0.01),Th2细胞升高(P<0.05),治疗后Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较治疗前显著增高(P<0.01),Th2减低(P<0.05)。结论ANLL的发病可能与Th1/Th2失调有关。     

鱼腥草不同居群营养成分及抑菌效果比较

目的比较不同鱼腥草居群的差异。方法采用随机小区设计,栽培不同鱼腥草居群,测定不同居群的产量、营养成分含量、挥发性油含量和对金黄色葡萄球菌、八叠球菌的抑菌效果。结果①HYXC02居群的地上部分产量最高,WYXC03居群的地下部分产量最高;②WYXC03地下部分维生素C、蛋白质和可溶性糖含量高于其它居群;HYXC02和WYXC03居群的黄酮含量明显高于其他两个居群;WYXC03居群地上部分的挥发性油含量最高,WYXC02居群的地下部分的挥发性油含量最高;③WYXC02居群地上部分挥发性油对两种菌的抑菌效果均最好。结论WYXC02,WYXC03两个居群比较适合药食兼用的栽培。     

树突状细胞前体细胞亚群四色荧光分析方法探讨

目的建立树突状细胞(DC)前体细胞(pDC)亚群四色荧光检测方法,探讨以Lin-人类白细胞抗原(HLA)-DR+细胞群和以CD34-Lin-HLA-DR+细胞群设门检测不同来源标本pDC亚群的适用性。方法以Lin-HLA-DR+细胞群和以CD34-Lin-HLA-DR+细胞群设门分别检测健康成人外周血、脐带血、骨髓、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血pDC亚群各15例,比较两种设门方法的pDC检测结果。结果以该两种方法设门,pDC1/pDC2比值:外周血=脐带血>骨髓>G-CSF动员外周血;对同一种标本,两种设门方法之间比较,pDC1/pDC2比值差异无统计学意义;外周血CD34-Lin-HLA-DR+/单个核细胞(MNC)与Lin-HLA-DR+/MNC比值、pDC/CD34-Lin-HLA-DR+比值与pDC/Lin-HLA-DR+比值差异无统计学意义;而脐带血、骨髓、G-CSF动员外周血的CD34-Lin-HLA-DR+/MNC比值均显著性低于Lin-HLA-DR+/MNC比值,pDC/CD34-Lin-HLA-DR+比值显著性高于pDC/Lin-HLA-DR+比值。结论检测pDC亚群,对一般外周血标本,以Lin-HLA-DR+细胞群设门或以CD34-Lin-HLA-DR+细胞群设门,均可取得理想结果;对CD34+细胞含量相对丰富的脐带血、骨髓、G-CSF动员外周血等的标本,以CD34-Lin-HLA-DR+细胞群设门能明显优化检测结果。     

人外周血单核细胞体外诱导成熟和激活的树突状细胞

目的　建立从人外周血单核细胞体外诱导培养成熟和激活的树突状细胞 (dendritic cell,DC)的方法。方法　从健康成人外周血分离单核细胞 (PBM) ,加入粒单系集落刺激因子 (GM-CSF) 10 0 μg/L+重组白细胞介素 -4 (rh IL -4 ) 5 0 0 k U /L体外培养 14 d,并于培养结束前 1d加入或不加入肿瘤坏死因子α (TNF -α ) (10 0μg/L ) ,流式细胞仪测定树突状细胞 (DC)的主要组织相容性复合体 (MHC) - 类分子、粘附分子和协同刺激分子 ,分析其成熟度和激活度。结果　 PBM经 GM-CSF+ rh IL-4诱导培养 14 d后 ,细胞成簇 ,表型为 CD83 2 2 .6%、CD865 5 .5 %、CD11c 3 6.1%、CD64 3 .2 %、人类白细胞抗原 (HLA) -DR 13 .4% ;培养结束前 1d加入 TNF -α诱导后 ,细胞表型为 CD83 81.5 %、CD8699.3 %、CD11c 98.8%、CD64 3 .4%、HLA-DR 88.3 %。结论　 GM-CSF +rh IL-4诱导 PB-M14 d,可获得大量不成熟的 DC,该体系有利于 DC扩增 ;培养结束前 1d加入 TNF-α,DC成熟度高 ,激活性好 ,适合于肿瘤免疫治疗     

深圳地区12960例地中海贫血筛查受检者的地中海贫血基因型分析

目的 探讨深圳地区地中海贫血基因型特征,及其罕见基因型碱基突变位点.方法 选择2014年5月至2015年10月于广东省深圳市第二人民医院拟行地中海贫血筛查的12 960例受检者为研究对象.研究对象纳入标准:①红细胞平均体积(MCV)＜80 fl的门诊及住院患者;②于本院行产前筛查的孕妇.排除标准:①不愿意参加本试验者;②已被确诊为其他血液系统疾病者.受试者先进行血常规MCV、血红蛋白(Hb)电泳和红细胞脆性检测的地中海贫血筛查试验,对筛查试验阳性(红细胞脆性＜70％)的患者,采用跨越断裂点PCR及反向斑点杂交(RDB)技术进行地中海贫血基因常见缺失型和点突变的基因型检测.对常见基因型检测不能确诊的患者,采用巢式PCR和PCR-直接测序(SBT)技术进行罕见基因型分析.本研究遵循的程序符合深圳市第二人民医院制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并征得受试对象本人的知情同意,与之签署临床研究知情同意书.结果 12 960例受检者中,地中海贫血筛查试验阳性患者为2 194例,通过常见基因型检测,确诊1 019例为地中海贫血,检出率为46.4％.537例α地中海贫血患者中,以东南亚缺失型(--SEA/αα)比例最高,占66.1％(355/537),其次为α地中海贫血2(-α 3.7/αα)占15.6％(84/537),而基因型(αCS α/αCSα、αQS α/αQS α、αWS α/αWSα)和4种HbH病基因型(-α3.7/αQS ααQS、--SEA /αCS αCS、--SEA/αQS αQS、--SEA/αWS αWS)较为少见.α地中海贫血罕见基因型检出率为0.1％(3/2 194),包括2例HKαα/--SEA及1例HKαα/αα.在456例β地中海贫血患者中,β41-42(-TCTT)/β和β654(C＞T) /βA基因型检出率最高,分别为33.8％(154/456)和30.3％(138/456).在26例β复合α地中海贫血患者中,以β复合α地中海贫血1(--SEA/αα)基因型检出率最高(34.6％,9/26).β地中海贫血罕见基因型检出率为0.2％(4/2 194),包括2例β37G＞A),突变点为413 G＞A或405 G＞A,1例β88-93(-AGTG),突变点为557处出现杂合峰,1例β-88(C＞T),突变点为-88 C＞T.结论 深圳地区地中海贫血基因型有独特的分布特征,巢式PCR技术有助于发现HKαα/--SEA及HKαα/αα基因型.采用PCR-SBT技术能鉴定罕见地中海贫血基因型并发现新突变点.本研究结果为在深圳地区开展遗传咨询和产前诊断提供了参考数据.     

小干扰RNA逆转三氧化二砷耐药的白血病K562/AS2细胞Topo Ⅱ基因表达的实验研究

 目的　研究小干扰RNA片段（shRNA）对三氧化二砷（ATO）耐药的白血病细胞株K562／AS2细胞的TopoⅡα、TopoⅡβ基因表达及其功能的影响。方法　设计并合成针对TopoⅡα和TopoⅡβ基因序列的shRNA各3对,在脂质体的介导下转染K562／AS2细胞;用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）分析TopoⅡα、TopoⅡβ mRNA的表达水平;流式细胞术检测TopoⅡα、TopoⅡβ蛋白表达。结果　针对TopoⅡα- shRNA、TopoⅡβ的shRNA作用于K562／AS2细胞24 h后,TopoⅡα mRNA水平和蛋白水平最大下调为（78.22±0.01）%、（31.17±1.27）%（P＜0.05）,TopoⅡβmRNA水平和蛋白水平最大下调为（57.36±0.01）%、（23.98±1.22）%（P＜0.05）。结论　转染24 h后针对TopoⅡ的shRNA可抑制对ATO耐药的白血病细胞株K562／AS2 细胞TopoⅡ基因的表达。     

血小板抗体的检测及其对血小板输注疗效的影响

目的：探讨血小板抗体的产生规律及其对血小板输注效果的影响。方法：检测A组（非过滤组）和B组（过滤组）患者血小板HLA抗体和HPA抗体，以CCI值评价两组患者血小板输注效果。结果：A组HLA抗体阳性率为53．33％（16／30）；HPA抗体阳性率为13．33％（4／30）；血小板输注无效率为43．33％（13／30）。B组HLA抗体阳性率为13．33％（4／30）；HPA抗体阳性率为10．00％（3／30）；血小板输注无效率为10．00％（3／30）。两组HLA抗体阳性率比较差异有统计学意义（P〈0．05），HPA抗体阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05），发生血小板输注无效比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：输注滤除白细胞的机采血小板难以减少血小板HPA抗体同种免疫的发生率，但可以减少血小板HLA抗体同种免疫的发生率。提高血小板输注效果。     

LADA患者血清IL-12、IL-18及血淋巴细胞亚群研究

与2型糖尿病组及正常对照组相比,成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)组外周血淋巴细胞亚群有明显变化,白细胞介素12(IL12)、白细胞介素18(IL18)水平亦升高。LADA存在明显细胞免疫紊乱,并与胰岛功能密切相关。     

增加细胞内三氧化二砷浓度恢复耐三氧化二砷的K562细胞对其敏感性的研究

目的 探讨耐受三氧化二砷（ATO）的白血病ATO耐药K562细胞（K562/AS2细胞）内砷浓度与耐药性的关系.方法 亲代敏感K562细胞（K562/S细胞）按照逐步增加ATO浓度诱导,建立K562/AS2细胞.采用原子荧光光谱法检测细胞内砷浓度.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度ATO对细胞的毒性作用.结果 1μg/ml ATO培养24、48、72h后,K562/S细胞内的砷浓度比K562/AS2细胞增高[（15.63±0.42） μg/L比0μg/L、（22.27±0.15） μg/L比（3.51±0.12） μg/L、（24.31±0.21） μg/L比（3.61±0.11） μg/L;均P＜0.05].随着ATO浓度的增加及培养时间的延长,K562/AS2细胞内砷浓度逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间砷浓度增加较快.K562/AS2细胞生长抑制率也逐渐增加（P＜0.05）,在1μg/ml和2μg/ml间增加较快.直线相关分析显示,当K562/AS2细胞与ATO接触分别为24、48和72 h时,其细胞生长抑制率均与细胞内ATO浓度呈正相关.结论 增加ATO浓度或延长ATO作用时间均可增加耐药细胞内ATO浓度,细胞内ATO浓度与ATO对细胞的毒性呈正相关,增加细胞内ATO浓度能够增强耐ATO K562细胞对ATO的敏感性.