rhTNF—a联合bcl—2反义寡核苷酸对急性髓细胞白血病细胞株HL—60增殖与凋亡的作用

目的 探讨基因重组人类肿瘤坏死因子a（rhTNF-a）和bcl－2反义寡核苷酸（ASPO）对HL－60细胞增殖与凋亡的作用，进一步认识肿瘤坏死因子a（rhTNF-a）和bcl－2两者调控肿瘤细胞凋亡的作用及相互联系。方法 单独和联合应用rhTNF-a和bcl－2ASPO处理HL－60细胞，通过MTT法检测HL－60细胞生长和存活特性变化；原位细胞凋亡检测和流式细胞技术检测细胞凋亡；应用RT－PCR、免疫组织化学检测癌基因bcl－2表达的改变。结果 rhTNF-a和bcl－2ASPO的联合应用明显增强对HL－60细胞的增殖抑制；细胞凋亡率明显升高；癌基因bcl－2在mRNA和蛋白表达明显下降。结论 TNF和bcl－2ASPO在诱导HL－60细胞凋亡中可能存在协同作用，为血液肿瘤的联合治疗提供了新的途径。     

脐带源间充质干细胞促进造血细胞在NOD/SCID小鼠归巢

目的探讨脐带源间充质干细胞(hUC-MSC)在促进造血细胞归巢,提高造血干细胞植入中的作用. 方法 RT-PCR检测经体外培养扩增所得hUC-MSC归巢相关分子的表达;将hUC-MSC和CFDA-SE荧光标记的人脐带血单个核细胞(MNC)植入NOD/SCID小鼠建立共移植模型,分离共移植24 h后小鼠骨髓有核细胞,用流式细胞仪和荧光倒置显微镜观察脐带血造血细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中含量的变化. 结果 hUC-MSC表达SDF-1及其受体CXCR-4以及相关黏附分子CD11a/ICAM-1、CD49d/VCAM-1;在hUC-MSC共移植情况下,流式细胞仪检测和荧光显微镜下细胞计数均发现人脐带血MNC在小鼠骨髓中的含量与单独脐带血移植相比较有显著提高[(145±59)/1×105vs (298±72)/1×105;(755±158)/5×105vs (1598±227)/5×105个骨髓有核细胞;n=9,P<0.05)]. 结论 hUC-MSC具有表达化学趋化因子及相关黏附分子的特性,有利于实现自身的归巢定位并引导造血干祖细胞的有效归巢与植入;动物模型的建立进一步证实其引导脐带血MNC在NOD/SCID小鼠体内向造血龛--骨髓富集(归巢)的作用.     

244例造血干细胞移植的心血管并发症

目的:探讨造血干细胞移植(HSCT)治疗恶性血液病过程中心血管并发症的发生。方法:对1990年8月至2007年8月我院244例造血干细胞移植患者并发心血管疾病的情况进行回顾性分析。结果:244例无心血管病史和心电图正常的患者中有40例(16.39%)出现心血管系统井发症,除1例移植后早期心源性猝死外,其它移植患者的心血管症状均得到控制。心律失常19例(47.5%),是其中最多的心血管并发症,以窦性心动过速、频发性房性早搏、室性早搏、房室交界性早博为多;其次为心脏缺血性改变和高血压。结论:移植相关心血管并发症是影响造血干细胞移植效果的重要因素,应在移植全过程中予以监护和处理。     

人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究

目的 建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术,并对其生物学特性进行研究.方法 采用双酶法分离脐带间充质干细胞,并通过传代进行纯化和扩增培养,绘制生长曲线;用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期;采用软琼脂克隆实验以观察脐带致瘤性.结果 成功建立了脐带间充质干细胞分离及培养扩增的方法;流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表达CD105、CD44、CD13和CD29,不表达造血细胞表型CD34、CD45和内皮细胞表型CD31,不表达CD106、CD166和HLA-DR;细胞倍增时间为30h,细胞周期分析表明,G0～G1期和S G2 M期所占比例分别为78.84%和11.16%,脐带间充质干细胞在软琼脂中无克隆形成.结论 双酶法是一种较好的分离和培养方法间充质干细胞的方法,培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性,无致瘤性,为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据.     

中职助产专业临床课程实训教学存在的问题和对策

针对我校助产专业,通过向学生发放调查问卷,从讲解示范、实训指导、实训评价、实训组织、实训总结5个方面分析当今中职助产专业临床课程实训教学中存在的问题,并提出具体的对策,最终促进人才培养质量的提高。     

人脐带间充质干细胞对NOD/SCID小鼠造血重建的影响

目的探讨脐带间充质干细胞(MSC)对NOD/SCID小鼠造血重建的影响。方法以足月胎儿脐带分离的MSC和脐血单个核细胞作为供体,化疗预处理后NOD/SCID小鼠作为受体。将小鼠随机分为以下3组(每组10只):单纯化疗组,仅做化疗预处理,不输注任何细胞;单移植组,化疗后输注单纯脐血单个核细胞(1×107/只);共移植组,化疗后输注脐血单个核细胞(1×107/只)和脐带MSC(1×106/只)。移植后第3、7、14、21、28天分别计数小鼠外周血白细胞,观察其变化;移植后第6周计算小鼠的生存率,并用流式细胞仪检测小鼠骨髓内人CD45 细胞的表达(即植入率)。结果共移植组小鼠移植后第14、21天外周血白细胞[分别为(5.73±0.38)×109/L、(5.90±0.42)×109/L]明显高于单移植组[分别为(3.30±0.58)×109/L、(4.83±0.41)×109/L],差异有显著性(P<0.05)。移植后第6周,共移植组小鼠骨髓人CD45 细胞表达明显高于单移植组(P<0.05),而两组小鼠生存率无显著性差异(P>0.05)。结论成功地建立了异种异基因小鼠脐血移植模型,脐带MSC作为一种新来源的MSC,能够促进造血重建,提高植入率,有望应用于临床共移植治疗中。     

脐带源间充质干细胞对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的抑制作用

目的：〖HT5"SS〗观察人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的影响,探讨其在免疫调控中的作用。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗建立分离、扩增hUCMSC的方法,检测其MHC表型;实验分3组：(1)单纯脐带血组（阴性组）;（2)脐带血+丝裂原刺激组（对照组）;（3）脐带血+丝裂原刺激 +MSC共培养组（实验组）;流式细胞术检测各组脐带血T细胞及其CD4＋和CD8＋亚型细胞共培养8 h后早期激活标志CD69的表达, MTT法检测各组脐带血T细胞共培养5 d后增殖情况。 〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗成功建立分离、扩增hUCMSC的方法,免疫表型分析显示hUCMSC不表达HLAⅡ抗原,低表达HLAI抗原;流式细胞术检测示在hUCMSC共培养情况下,经丝裂原刺激后,脐带血T淋巴细胞CD69表达与对照组\[(22. 6±5.2)%\]的阳性率相比较,下降至(7.8±3.5)%（P<0.01）,而且这种抑制对不同亚型T细胞（CD4+/CD8+）均起作用;MTT检测显示在hUCMSC共培养条件下,丝裂原刺激T细胞增殖受到抑制,抑制的程度与hUCMSC的剂量呈依赖性。 〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗hUCMSC对异源性脐带血T淋巴细胞激活和增殖具有抑制作用,而且这种作用为非选择性的,呈剂量依赖性。     

人类脐带源间充质干细胞细胞因子分泌及造血支持作用的研究

目的研究脐带源间充质干细胞（UC—MSC）细胞因子分泌特征及其对脐血源CD34^＋细胞的造血支持作用,并与骨髓源间充质干细胞（BM—MSC）相对照。方法RT—PCR法检测UC—MSC和BM—MSC细胞因子分泌。将脐血CD34^＋细胞分别接种于UC—MSC或BM—MSC滋养层共培养5周,收集贴壁与非贴壁细胞接种于标准甲基纤维素培养基,计数克隆形成细胞（CFC）。结果UC—MSC表达SCF、LIF、M—CSF、Flt-3、IL-6、GM—CSF、G—CSF、SDF-1和VEGFmRNA,不表达IL-3mRNA。与BM—MSC相比,二者表达细胞因子谱相似,但BM—MSC不表达GM—CSF和G—CSFmRNA。共培养5周计数CFC显示,BFU—E、GFU—GM和CFU—GEMM在CD刍细胞／UC—MSC（75．5±27．9,100．0±25．1,9．5±7．3）与CD34^＋细胞／BM—MSC（70．5±28．8,108．3±9．5,8．5±5.1）共培养体系差异无统计学意义（P〉0．05）。结论UC—MSC与BM—MSC具有相似的造血支持功能和细胞因子分泌谱。     

存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。     

中西医结合治疗变应性鼻炎58例临床疗效观察

目的探讨中西医结合疗法在变应性鼻炎患者中的应用效果。方法 58例患者随机分成治疗组、对照组,每组29例,对照组采用常规的西药治疗,治疗组则在对照组的基础上,加用中药进行辅助治疗,观察治疗前后总体疗效及IL-13的含量变化。结果①治疗组和对照组总有效率分别为93.1%和86.2%。②在IL-13的水平方面,治疗后治疗组和对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论中西医结合治疗过敏性鼻炎对于提高临床治疗效果具有重要意义。