丙酮酸乙酯对人脐静脉内皮细胞HMGB1表达的影响

目的：本研究意在探讨丙酮酸乙酯（EP）对炎症因子HMGB1表达的影响,从而证实EP在急性脓毒症中的作用及机制。方法：采用原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,免疫组化法鉴定其纯度,台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力。观察不同计量的EP对人脐静脉内皮细胞分泌HMGB1的作用。细胞分三组：LPS 100 ng/mL＋EP 0μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 5μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 10μM组。采用Western blot方法检测培养上清液HMGB1的含量。结果：各细胞组于LPS 100 ng/mL刺激16 h后,EP 5μM剂量组对HMGB1分泌具有一定的抑制作用,与EP 0μM组比,HMGB1含量明显降低（t=21.27,P〈0.05）;10μM剂量组与0μM组比,降低HMGB1作用更为明显（t=26.38,P〈0.05）。结论：丙酮酸乙酯可以减少血管内皮细胞释放HMGB1,对急性脓毒症有改善作用。     

重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1抗炎作用的观察

目的：观察重组HMGB1 A-box蛋白对HMGB1的特异性拮抗作用。方法：复苏的RAW264.7细胞培养至对数生长期,用于以下实验：实验分为六组,r HMGB1组：加500 ng/mL r H-MGB1;LPS组：加100 ng/mL LPS;A-box干预1组：加500 ng/mL r HMGB1和100 ng/mL A-box;A-box干预2组：加500 ng/mL r HMGB1和200 ng/mL A-box;A-box干预3组：加500 ng/mL r HMGB1和500 ng/mL A-box;A-box干预4组：加100 ng/mL LPS和500 ng/mL A-box。培养6 h后,收集上清液,待测。各组上清液采用ELISA盒检测TNF-α的含量。结果：200 ng/mL、500 ng/mL重组A-box蛋白能明显抑制HMGB1诱导培养细胞释放TNF-α的水平（P〈0.05）,但对LPS的无明显作用。结论：r HMGB1 A-box蛋白可能有特异性拮抗HMGB1的致炎作用。     

核苷(酸)类似物对不同疗效乙肝患者DC功能影响

目的:研究慢性乙型肝炎(CHB)患者进行核苷(酸)类似物抗病毒治疗后,不同疗效患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能的差异。方法:选取56例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者用拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗104周后,依据患者HBeAg/HbeAb血清学转换情况,分为转换组19例和未转换组37例,分别抽取外周血分离和培养DC,流式细胞仪检测和比较转换组和未转换组DC表面分子HLA-DR、CD80和CD86表达水平;用MTT法测定DC刺激混合淋巴细胞反应能力,比较两组的DC刺激指数(SI)。结果:(1)所有检测对象的DC存活率无统计学差异(P>0.05);(2)转换组的DC表面分子HLA-DR、CD80的表达水平较未转换组明显增加(P<0.05);CD86表达水平略高于未转换组但无显著统计学差异(P>0.05);(3)转换组较未转换组的SI显著增加,有统计学差异(P<0.05)。结论:核苷(酸)类似物抗病毒治疗CHB增强DC功能可能与患者HBeAg血清学转换有关。     

高迁移率族蛋白B1与晚期糖基化终末产物受体结合对激活肝星状细胞的作用

目的探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)激活肝星状细胞(HSC)中的作用。方法大鼠HSC-T6细胞系培养至对数生长期,分为5组,对照组加DMEM培养液1ml;HMGB1组加0.1μg/ml的HMGB11ml;抗RAGE组将20μg/mlRAGE抗体加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1;sRAGE组将20μg/mlsRAGE加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1;AGE组:将160μg/mlAGE加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1。刺激24h后,收集各组上清培养液酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测透明质酸(HA)、Ⅲ型胶原(PⅢP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)的含量;小心取出六孔板内载玻片,免疫组织化学法检测α-SMA、转化生长因子(TGF)-β1的表达。结果抗RAGE组、sRAGE组与HMGB1组相比,HSC细胞质中的α-SMA和TGF-β1表达水平和培养液中HA、PⅢP和CⅣ的含量均显著下降(P<0.05);AGE组与对照组相比,HSC细胞质中的α-SMA和TGF-β1表达水平和培养液中的HA、PIIIP和CⅣ含量均明显增高(P<0.05)。结论 HMGB1与RAGE结合,使HSC活化,合成释放细胞外基质增加。