安徽淮北地区人群HCV感染及HCV基因型分布调查

该地区农村自然人群、煤矿工人和职业献血者中抗－ＨＣＶ阳性率分别为１．４％、０．５％和４．８％。在ＨＣＶ感染者中男女之间差别无显著意义。ＨＣＶ感染者中多数具有明确的感染途径和来源。经输血和献血及使用血液制品是其主要的感染途径和来源。人群中ＨＣＶ基因型以Ⅱ型感染为主，占６３．９％。肝炎病人ＨＣＶ感染中混合感染所占比例比一般人群和职业献血者的混合感染比例高。     

CCL3L1融合蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化CCL3L1融合蛋白,并对其免疫原性进行分析.方法 应用分子生物学技术将pGEX-4T-1-CCL3L1质粒进行酶切,收集CCL3L1片段与pET-32a(+)表达载体连接,构建pET-32a(+)-CCL3L1重组质粒,将其转化BL-21大肠埃希菌进行蛋白表达并纯化.应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.以间接ELISA法测定BABL/c小鼠多克隆抗体滴度.结果 成功获得了高纯度的CCL3L1融合蛋白,且该蛋白为可溶性表达,以其制备的多克隆抗体滴度最高可达1:51 200.结论 获得高纯度可溶性表达的CCL3L1融合蛋白及其高效价的多克隆抗体.     

SARS病毒S蛋白受体结合区DNA疫苗及免疫效果研究

目的 研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)靶细胞受体结合区所构建之DNA疫苗的免疫效果,为进一步的SARS-CoV免疫机理研究及疫苗研制奠定基础.方法 选取SARS-CoV S基因包含靶细胞受体结合区和S1亚单位C端2个基因片段作为目的基因,构建真核表达质粒pVAX-RBD(receptor binding domain)、pVAX-S1C作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测其特异性体液免疫及细胞免疫情况.结果 体液免疫方面,以SARS全病毒裂解产物和原核表达的RBD蛋白作为诊断抗原,用ELISA均可检测到高滴度的小鼠血清抗体IgG的产生.而且,血清中和试验显示pVAX-RBD质粒激发了小鼠保护性中和抗体的产生.通过流式细胞分析和酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测,pVAX-RBD和pVAX-S1C两组质粒均诱导免疫小鼠产生了特异性细胞免疫反应.结论 证明SARS-CoV S蛋白受体结合区上中和表位的存在;体液免疫在抗SARS-CoV感染方面起到重要作用.     

DNA疫苗在病毒感染疾病中的应用进展

DNA疫苗属于继第一代减毒、灭活疫苗，第二代重组基因工程亚单位疫苗之后的第三代新型疫苗。DNA疫苗不仅能诱导体液免疫反应，而且还可以有效地激发细胞免疫。考虑到细胞免疫在病毒感染性疾病的机体免疫过程中发挥重要作用，且目前临床上对病毒感染性疾病的防治措施及其相对效果都不尽如人意，DNA疫苗在此方面更是被寄于厚望。本文对DNA疫苗的历史发展，针对病毒防治方面的部分疾病研究进展、问题及前景进行简要综述。     

B族链球菌C5a肽酶蛋白表位的克隆、表达和免疫学分析

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白表位，结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测B族链球菌C5a肽酶蛋白的表位，应用PCR技术扩增出编码该表位基因片段，克隆PCR产物构建重组质粒，测序验证。在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达融合蛋白。表达的蛋白经质谱分析和Western blot鉴定。纯化该融合蛋白并免疫C57／BL小鼠，萃取GBS表面蛋白，双向琼脂扩散试验检测抗体水平。结果在SCPB中预测到1个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组和表达了这一肽段，质谱得出与SCPB蛋白的相似性分数为79，Western-blot证实能与抗SCPB的抗体反应，纯化后融合蛋白纯度〉90％。动物实验证实融合蛋白能产生特异性的抗GBS抗体。结论重组表位具有一定免疫原性。为相关蛋白的毒力机制研究和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础。     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

HCV NS5B蛋白结构与功能研究进展

NS5B是一种依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp),作为核心酶在HCV复制中起关键作用.NS5B结构和功能的研究,有助于HCV基因组RNA复制及调节、HCV与宿主相互作用的认识,同时也为以RdRp为靶标的药物研究奠定了理论基础.     

汉滩病毒重组腺病毒疫苗与DNA疫苗的联合免疫效果分析

汉坦病毒基因组由L、M、S3个负链RNA片段组成，M片段编码囊膜糖蛋白G1和G2，G1和G2在病毒的吸附、病毒膜与细胞膜的融合、中和抗体的产生等方面起着重要作用。以腺病毒为载体的活载体疫苗安全性好，能有效感染呼吸道和肠道等组织细胞，不仅能激发黏膜免疫，还能诱导系统免疫和细胞免疫反应。我们分别以腺病毒和质粒pcDNA3．1为载体，构建了含有完整汉滩病毒基因M片段和单独表达G1的重组腺病毒和重组DNA疫苗。DNA疫苗能够引发体液和细胞介导的免疫应答，但接种后只能引发很弱的免疫应答。为了克服上述疫苗的缺     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的:用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原,建立诊断TTV 感染的特异性方法. 方法:采用PCR方法扩增TTV ORF2基因,将之插入到测序质粒载体中进行测序,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30,并转化大肠杆菌M15菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后,得到纯度为90%的ORF蛋白抗原.用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot Blotting分析.结果:经IPTG诱导后,筛选出2株高表达株. 结论:该蛋白具有良好的抗原活性.     

中国南京庚型肝炎病毒部分基因的克隆及cDNA序列分析

采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)从南京地区某输血后丙型肝炎患者血清中克隆出庚型肝炎病毒(HGV)非结构区部分基因。序列分析结果表明，该序列与国外发表的庚型肝炎病毒HGU 44402，HGU 45966和HGU 36380(GBV-C)对应位置核苷酸序列同源性分别为89．09%，92．12%和87．27%，与已报道的HGV河北株序列同源性为93．94%。对40份输血后丙型肝炎血清和30份非甲非乙非丙非丁非戊型肝炎血清进行了检测，HGV RNA阳性率分别为10．00％和6.67%。