过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定

目的 构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株,为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法 通过PCR扩增,连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-PuroTXNRD1,转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行：①TrxR1过表达HEK293细胞：pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞;②对照HEK293细胞：pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞;③正常HEK293细胞;通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况;通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力;通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果 构建载体经DNA测序,成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达,且酶活力也同样显著上升（P<0.005）;而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降（P<0.005）。结论 通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体,成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株,该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗,因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。     

TTF-1在浆膜腔积液肺腺癌细胞中的表达研究

目的 探讨甲状腺转录因子-1(TTF-1)在浆膜腔积液肺腺癌细胞中的表达.方法 收集2009至2011年石家庄市第一医院临床科室送检浆膜腔积液转移性腺癌65例(胸水49例、腹水15例、心包积液1例)患者及活检证实肺腺癌45例,乳腺癌9例,卵巢癌4例,结肠癌4例,胃癌2例,胰腺癌1例的临床资料.制作细胞块切片对其进行HE染色和TTF-1免疫组化染色(SP法).结果 45例肺腺癌中有39例TTF-1阳性表达,敏感性(86.67%),20例肺外腺癌有1例TTF-1阳性表达,特异性为(95%).结论 应用细胞块免疫化学染色针对TTF-1在浆膜腔积液肺腺癌细胞中的表达具有较高的敏感性和特异性,在排除甲状腺癌的可能性后,TTF-1阳性表达很大程度上提示腺癌原发于肺.     

康惠尔水胶体敷料应用于静脉炎的效果观察

目的：为了有效治疗静脉炎,为临床提供参考。方法：对采用康惠尔水胶体敷料外敷与土豆片外敷治疗静脉炎的疗效进行比较。结果：康惠尔水胶体敷料外敷治疗静脉炎的疗效好于土豆片外敷,操作方法简便,安全有效,病人活动不受限制。结论：康惠尔水胶体敷料应用于治疗静脉炎疗效好。     

浆膜腔积液细胞块免疫化学染色鉴别增生的间皮细胞与腺癌

目的探讨几项细胞块免疫化学染色鉴别浆膜腔积液中增生的间皮细胞和腺癌细胞。方法收集腺癌、间皮增生的浆膜腔积液66例,制成细胞块切片,进行HE及癌胚抗原(CEA)、钙视膜蛋白(Calretinin)、波形蛋白(vimen-tin)免疫化学染色。结果普通涂片发现浆膜腔积液中转移性腺癌46例,间皮细胞增生20例,CEA在46例转移性腺癌中,32例阳性,14例阴性,阳性率69.57%;20例增生的间皮细胞中2例阳性(均为弱阳性),18例阴性,阳性率10.00%。46例转移性腺癌中calretinin 1例阳性,45例阴性,阳性率2.17%;20例增生的间皮细胞17例阳性,3例阴性,阳性率85.00%。46例转移性腺癌中vimentin阳性表达2例,44例阴性,阳性率4.35%;20例增生的间皮细胞中18例阳性,2例阴性,阳性率90.00%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论细胞块免疫化学染色对鉴别浆膜腔积液中增生的间皮细胞及腺癌细胞有重要参考价值。     

NF-κB P65(RelA)和uPA在胃癌组织中的表达及相关性研究

目的 探讨胃癌形成中核转录因子κB P65(nuclear factor kappa B P65,NF-κB P65)和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)的表达规律及相关性.方法 应用免疫组织化学SABC法检测64例标本中胃癌、癌旁及正常组织RelA和uPA表达情况,采用Pearson等级相关检验研究两者之间相关性.结果 RelA在胃癌、癌旁、正常组织表达的阳性率分别为53.13%(34/64)、31.25%(20/64)和7.81%(5/64),三者比较有显著差异(P＜0.01);uPA阳性率在上述三者分别为59.38%(38/64)、39.06%(25/64)和12.50%(8/64),亦有显著性差异(P＜0.01).RelA和uPA在低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌中表达增强,与乳头状腺癌、管状腺癌相比有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).Pearson相关分析显示RelA和uPA的表达水平在胃癌(P＜0.01)、癌旁组织(P＜0.01)及正常组织(P＜0.01)中均呈显著正相关.结论 RelA在人胃癌组织中与邻近组织相比是超表达的,其靶基因uPA也被上调,共同参与了胃癌的形成和发展.     

“套扎法”改良小切口在子宫次全切除术中的应用研究

目的探讨"套扎法"改良小切口在子宫次全切除术中的应用效果。方法将90例妇科良性疾病患者根据手术方法的不同分为小切口组43例、腹腔镜组47例,小切口组采用"套扎法"改良小切口进行手术,腹腔镜组采用腹腔镜进行手术。结果 2组手术时间、术中出血量、肛门排气时间比较差异均无统计意义(P0.05);住院费用腹腔镜组明显高于小切口组,2组比较差异有高度统计意义(P0.01)。结论 "套扎法"改良小切口手术与腹腔镜手术在子宫次全切除术中治疗效果相当,但是"套扎法"改良小切口手术相比腹腔镜手术容易掌握,还可明显降低治疗费用,非常适合在基层医院推广应用。     

血清HE4、CA125、CA199、CA724联合检测对卵巢癌早期诊断的临床价值探讨

目的探讨了血清人附睾分泌蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原724(CA724)联合检测对卵巢癌早期诊断的临床价值。方法选择了该院2012年1月至2015年6月明确诊断的卵巢癌患者80例为卵巢癌患者组,100例妇科卵巢良性疾病患者为良性卵巢疾病组,85例妇科门诊健康体检者为健康对照组,对3组人群分别采用免疫化学发光法和酶联免疫吸附法(ELISA法)检测了CA125、CA199、CA724和HE4的水平,分析和探讨了4种肿瘤标志物单独和联合检测对卵巢癌早期诊断的价值。结果对3组人群分别检测了血清HE4、CA125、CA199、CA724水平,卵巢癌组明显高于健康对照组和良性卵巢疾病组,差异有统计学意义(P0.05);Ⅰ期卵巢癌患者的HE4阳性率高于CA125、CA199、CA724,阳性率分别是65.4%、39.2%、56.7%、45.7%,而HE4与CA125、CA199、CA724联合检测Ⅰ期卵巢癌阳性率较高为79.8%;CA125对浆液性癌、子宫内膜样癌、低分化腺癌诊断敏感度均较高,CA724对黏液性癌、子宫内膜样癌诊断敏感度较高,HE4对浆液性癌、子宫内膜样癌诊断敏感度较高。结论 CA125可作为卵巢癌诊断的首选肿瘤标志物。血清HE4、CA125、CA199、CA724四项指标联合检测可提高卵巢癌早期诊断敏感度,对卵巢恶性肿瘤的早期诊断有着良好的应用价值。     

妊娠期uNK、pNK细胞NKG2A与NKG2D的表达及其生物学意义的研究

目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女uNK细胞和pNK细胞NKG2A、NKG2D的表达状况;RTPCR技术检测绒毛膜组织HLAE、MICA的表达。结果:子宫NK细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,二者分别为(97.86±1.75)%与(33.35±10.92)%;子宫NK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(93.21±4.52)%与(97.80±1.72)%,滋养层组织仅检测到HLAEmRNA的表达。结论:妊娠期子宫NK细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体HLAE,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。     

红花对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

目的研究红花对四氯化碳(CCl4)致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法 50只Wistar雄性大鼠,随机分为正常组,模型组,红花高、中、低剂量组,每组10只。红花高、中、低剂量组灌胃给药剂量分别为1、0. 5、0. 25 g/kg,连续给药8 d,末次给药后1 h,除正常组外,其余组大鼠一次性腹腔注射CCl4花生油溶液致急性肝损伤。于CCl4染毒后24 h处死动物。取血测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活力;取肝组织进行HE染色及测定肝组织中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力((TAOC)的活力;蛋白印迹法(Western blot)检测炎性指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及JNK通路中JNK、p-JNK和p-c-Jun、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白表达;采用RT-PCR和Western blot分别测定死亡受体凋亡途径FasL、Fas及线粒体凋亡途径Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果急性损伤后,模型组血清ALT、AST、ALP及肝组织的MDA水平与正常组相比明显升高(P 0. 05),CAT、GSH-Px和T-AOC的水平显著下降(P 0. 05),红花各剂量组同模型组相比上述指标均有统计学差异(P 0. 05); HE染色表明模型组中央静脉周围多数融合坏死,易见凋亡小体,红花各剂量组凋亡小体和小坏死灶均有所减少;模型组各炎症因子及p-JNK、p-c-Jun和cleaved Caspase-3的蛋白表达与正常组相比显著增加(P 0. 05),Bax、FasL、Fas的mRNA和蛋白表达明显增加(P 0. 05),而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显减少(P 0. 05)。红花各剂量组与模型组相比各炎症因子蛋白表达均有统计学差异(P 0. 05),JNK通路Bax、p-JNK、p-c-Jun、FasL、Fas、Bcl-2蛋白表达与模型组相比均有统计学差异(P 0. 05)。与模型组相比,红花中、低剂量组Bax、Bcl-2 mRNA的表达有统计学差异(P 0. 05),高剂量组与模型组之间无统计学差异(P 0. 05)。结论红花对CCl4致大鼠急性肝损伤有保护作用,且可能是通过其抗氧化、抗炎性因子激活以及抑制JNK通路激活、减少该通路激活后诱导的凋亡来实现的。