RNA干扰抑制高氧暴露下A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的研究

目的 研究小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达及其与细胞凋亡的关系,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用. 方法 体外传代培养A549细胞系,将Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipo-fectamine 2000转染A549细胞,随机分为干扰后空气组、无干扰高氧组和干扰后高氧组.三组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后采用RT-PCR技术测定Trx-2和细胞色素c(cytochrome c,Cytc)mRNA的表达;采用流式细胞术检测三组A549细胞凋亡情况. 结果 (1)RT-PCR检测显示序列特异性SiRNA可显著降低Trx-2 mRNA的表达.(2)干扰后高氧组24 h Trx-2 mRNA水平为0.2774±0.0174,48 h为0.2587±0.0069,均低于无干扰高氧组(分别为0.7799±0.1249,0.4050±0.0842)(P均＜0.05).无干扰高氧组24 h Trx-2 mRNA水平高于干扰后空气组(0.4046±0.0161)(P＜0.05).(3)无干扰高氧组24 h Cytc mRNA水平为0.3957±0.0903,48 h为0.3438±0.0092,均低于干扰后高氧组(分别为0.6620±0.0395,0.4806±0.0977)和干扰后空气组(分别为0.5197±0.0377,0.4902±0.1079)(P均＜0.05).(4)干扰后高氧组A549细胞凋亡率明显高于干扰后空气组. 结论 SiRNA能显著下调A549细胞Trx-2 mRNA的表达;高氧暴露诱导SiRNA干扰后A549细胞Trx-2和Cytc mRNA表达的变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用.     

肺表面活性物质蛋白B基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的研究

目的探讨肺泡表面活性物质蛋白B（SPB）基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的关系。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院的新生儿呼吸窘迫综合征（NRDS）诊断病例为病例组,并按1∶2比例收集胎龄和出生体重相匹配的无明显感染症状早产儿为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态（PCR-RFLP）分析技术及基因测序技术检测SPB-18A/C及SPB1580C/T多态性,观察两组间基因型频率和等位基因频率的差异。并复习文献比较本研究汉族与其他种族人群等位基因频率的差异。结果 2008至2010年NRDS组91例,对照组182名进入分析。①SPB-18A/C基因在NRDS组AA,AC,CC基因型频率分别为11.0%、40.7%和48.4%,对照组分别为6.6%、31.3%和62.1%;两组基因型频率差异无统计学意义（P〉0.05）;NRDS组A等位基因频率显著高于对照组（31.3%vs22.3%）。②SPB1580C/T基因在NRDS组TT、TC和CC基因型频率分别为5.5%、63.7%和45.1%,对照组分别为30.8%、6.6%和48.4%;两组基因型频率差异无统计学意义（P〉0.05）;NRDS组C等位基因频率显著高于对照组（79.1%vs70.9%）。③本研究汉族人、美国人、巴西人和丹麦人SPB1580等位基因C频率分别为79%、35%、41%和46%,差异有统计学意义（P〈0.05）,与日本人群等位基因C频率（72%）差异无统计学意义（P〉0.05）;本研究汉族人、巴西人、美国人和丹麦人SPB-18等位基因A频率分别为31%、58%、57%和61%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论本研究汉族人群SPB-18A/C及SPB1580C/T基因多态性是NRDS的危险因素。不同种族人群SPB1580C/T和SPB-18A/C基因多态性分布存在明显差异。     

母亲妊娠期高血压疾病对早产儿病死率及主要并发症的影响北大核心CSCD

目的探讨母亲妊娠期高血压疾病（HDCP）对早产儿病死率及早期主要并发症的影响。方法收集本课题组各协作单位在2013年1月1日至2014年12月31日产科出生胎龄24～36＋6周早产儿的一般临床资料。按HDCP程度分为4组：HDCP组、子痫前期组、子痫组和无HDCP组,比较各组早产儿的病死率和主要并发症的发生率,并分析其影响因素。结果HDCP组早产儿病死率明显高于无HDCP组（χ2＝9.970,P＝0.019）,其中以子痫前期病死率最高（4.8%）,与无HDCP组（2.2%）比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,与HDCP组（1.8%）、子痫组（3.2%）比较差异无统计学意义。HDCP组呼吸窘迫综合征（RDS）发生率明显高于无HDCP组（χ2＝13.241,P＝0.004）,其中子痫组发病率最高（35.4%）,与无HDCP组（16.2%）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,但与HDCP组（19.9%）、子痫前期组（17.1%）比较差异无统计学意义。HDCP组支气管肺发育不良（BPD）发生率明显高于无HDCP组（χ2＝9.592,P＝0.022）,其中子痫组发病率最高（9.7%）,与无HDCP组（2.0%）及HDCP组（1.7%）比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）,而与子痫前期组比较差异无统计学意义,且随着HDCP的程度加重,BPD的发生率逐渐升高。HDCP对脑室内出血（IVH）、坏死性小肠结肠炎（NEC）、早产儿视网膜病（ROP）、脓毒症无明显影响（χ2＝7.054、7.214、0.358、3.852,P＝0.070、0.065、0.949、0.278）。考虑患儿总体结局,即患儿死亡或存活但至少合并一种并发症,HDCP对其有影响（χ2＝15.697,P＝0.001）,且随HDCP程度加重,其发生率逐渐增高。调整胎龄、出生体质量、性别、分娩方式、胎盘早剥、前置胎盘、产前激素、妊娠期糖尿病、新生儿窒息等因素,结果显示HDCP是导致早产儿死亡的危险因素（OR＝2.159,95%CI：1.093～4.266）,而子痫前期组、子痫组之间比较差异无统计学意义（P＝0.714、0.389）;HDCP对RDS、BDP、ICH、NEC、ROP、脓毒症无明显影响。结论HDCP导致早产儿死亡风险增加,也是导致RDS及BPD发生率增加的高危因素,对NEC、ROP、IVH、脓毒症等主要并发症的发生无明显影响。     

硫氧还蛋白及其还原酶的研究进展

硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)、硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)及烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(nicotinamide adenine dinucleotidephosphate,NADPH)构成的Trx系统是一个广泛分布于原核生物和真核生物的NADPH依赖的二硫化物还原酶系统,在机体氧化还原平衡及细胞增殖中具有重要调节作用.近年来,对Trx及TrxR的研究已覆盖了大部分生物医学领域.随着对Trx及TrxR在哺乳动物细胞中生理作用及功能角色的深入研究,逐步发现两者与多种疾病密切相关,因而日益受到重视.现就Trx与TrxR的研究状况做一综述.     

武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D基因多态性及其与支气管肺发育不良相关性分析

目的: 研究武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D(SP-D)基因多态性及其与支气管肺发育不良(BPD)易感性的相关关系。方法: 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对218例武汉汉族新生儿SP-D相关位点进行基因型检测,同时进行基因测序验证结果。结果: SP-D Met11Thr三种基因型TT、TC、CC频率分别为10.5%、49.1%、40.4%,等位基因T和C频率分别为35.1%和64.9%。SP-D Ala160Thr三种基因型GG、GA、AA频率分别为54.6%、39.4%、6.0%,等位基因G和A频率分别为74.3%和25.7%。与对照组比,SP-D Met11Thr和SP-D Ala160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联(P>0.05)。结论: SP-D Met11Thr和SP-D Ala160Thr基因型和等位基因频率存在种族差异性;SP-D Met11Thr和SP-D Ala160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联。     

Effects of hyperoxia on cytoplasmic thioredoxin system in alveolar type epithelial cells of premature rats

This study investigated the effects of hyperoxia on dynamic changes of thioredoxin-1 (Trx1) and thioredoxin reductase-1 (TrxR1) in alveolar type Ⅱ epithelial cells (AECⅡ) of premature rats. Pregnant Sprague-Dawley rats were sacrificed on day 19 of gestation. AECⅡ were isolated and purified from the lungs of premature rats. When cultured to 80% confluence, in vitro cells were randomly divided into air group and hyperoxia group. Cells in the hyperoxia group were continuously exposed to 95% O2/5% CO2 and those in the air group to 95% air/5% CO2. After 12, 24 and 48 h, cells in the two groups were harvested to detect their reactive oxygen species (ROS), apoptosis, TrxR1 activity and the expressions of Trx1 and TrxR1 by corresponding protocols, respectively. The results showed that AECⅡ exposed to hyperoxia generated excessive ROS and the apoptosis percentage in the hyperoxia group was increased significantly at each time points as compared with that in the air group (P<0.001). Moreover, TrxR1 activity was found to be markedly depressed in the hyperoxia group in comparison to that in the air group (P<0.001). RT-PCR showed the expressions of both Trx1 and TrxR1 mRNA were significantly increased in AECⅡ exposed to hyperoxia for 12 and 24 h (P<0.01), respectively. At 48 h, the level of Trx1 mRNA as well as that of TrxR1 mRNA in the hyperoxia group was reduced and showed no significant difference from that in the air group (P>0.05). Western blotting showed the changes of Trx1 protein expressions in the hyperoxia group paralleled those of Trx1 mRNA expressions revealed by RT-PCR. It was concluded that hyperoxia can up-regulate the protective Trx1/TrxR1 expressed by AECⅡ in a certain period, however, also cause dysfunction of the cytoplasmic thioredoxin system by decreasing TrxR1 activity, which may contribute to the progression of oxidative stress and cell apoptosis and finally result in lung injury.     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。     

小分子干扰RNA抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞中的硫氧还蛋白-2对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1、细胞色素C氧化酶工表达的影响

目的 探讨小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadenine dinucleotide,NADH)脱氢酶亚单位1(NADH dehydrogenase subunit 1,ND1)及细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome C oxidase Ⅰ,COX Ⅰ)表达的影响. 方法 体外传代培养A549细胞系,将Trx-2序列特异性的SiRNA转染A549细胞,随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组与干扰后高氧组.分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA和蛋白.采用逆转录.聚合酶链反应技术测定Trx-2、ND1和COX Ⅰ mRNA水平的表达,Western印迹技术检测Trx-2蛋白的表达. 结果 (1)序列特异性SiRNA可显著抑制Trx-2表达.(2)无干扰高氧组24 h Trx-2mRNA水平为0.7799-4-0.1249,显著高于无干扰空气组(0.4424±0.1140)(P<0.05).干扰后高氧组24 h Trx-2 mRNA水平为0.2774±0.0174、48 h为0.2587±0.0069,均显著低于干扰后空气组和无干扰高氧组(P相似文献   

硫氧还蛋白在高氧肺损伤中的作用

支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的具体发病机制尚未完全阐明,高氧暴露所导致的氧化应激损伤被认为是其发病的主要机制之一[1].近年研究显示硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)广泛参与体内氧化应激、核酸代谢、炎症反应、细胞生长及凋亡等多种生物学过程[2-4].