初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX,运用阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,采用Western blot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中p-Akt蛋白的表达水平的情况;采用CCK-8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞的增殖和迁移能力.结果 与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的p-Akt蛋白的表达增多(P<0.05),运用阻断剂LY294002阻断PI3K信号通路后,稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的p-Akt蛋白表达降低(P<0.05).CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示,与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加(P<0.05).经阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱(P<0.05).结论 HBx可通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移.     

人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定。重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用。结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL。CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用。结论成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据。     

浅析细菌耐药机制及控制对策

随着抗菌药物的广泛应用,细菌的耐药性越来越引起人们的重视,这给临床治疗带来诸多困难,导致疗程延长和死亡率升高,极大地影响着人类的身体健康,成为全球化的重点问题.本文就近年来国内外对细菌的耐药机制及,耐药性的控制对策做一综述.     

血清和脑脊液CXCl-5、S100B蛋白检测在儿童细菌性脑膜炎中的意义

目的通过研究外周血血清和脑脊液中CXC类趋化因子配体5(CXCl-5)、S100B蛋白在细菌性脑膜炎中的变化,探讨CXCl-5和S100B蛋白检测在儿童细菌性脑膜炎中的诊断价值。方法选取2016年8月至2018年8月该院收治的102例可疑脑膜炎患儿作为研究对象,其中细菌性脑膜炎患儿46例(试验组),病毒性脑膜炎患儿56例(病脑组),选取同期健康儿童35例作为对照组。采集外周静脉血和脑脊液离心后取上清,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血清和脑脊液CXCl-5、S100B蛋白检测,比较3组患者CXCl-5和S100B蛋白的表达变化,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清和脑脊液CXCl-5、S100B蛋白检测对儿童细菌性脑膜炎的诊断价值。结果试验组血清和脑脊液CXCl-5水平显著高于病脑组和对照组,试验组和病脑组血清和脑脊液S100B蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。血清CXCl-5、S100B蛋白对儿童细菌性脑膜炎诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.961、0.736,灵敏度分别为82.6%、60.9%,特异度分别为97.1%、82.9%;脑脊液CXCl-5、S100B蛋白对儿童细菌性脑膜炎诊断的AUC分别为0.970、0.867,灵敏度分别为91.3%、63.0%,特异度分别为98.2%、91.4%。脑脊液CXCl-5、S100B蛋白对细菌性脑膜炎的诊断价值高于血清(P<0.05)。结论血清和脑脊液CXCl-5、S100B蛋白在细菌性脑膜炎患儿中表达水平升高,有助于儿童细菌性脑膜炎的诊断,具有较高的临床应用价值。