β-catenin过表达对骨肉瘤细胞TE85迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 探讨β-catenin对骨肉瘤细胞TTE85迁移、侵袭及凋亡的影响.方法 RT-PCR及Western blot检测β-catenin在不同骨肉瘤细胞中的表达情况,重组腺病毒Adβ-catenin感染TE85细胞,RT-PCR及荧光素酶报告基因检测感染Adβ-catenin后β-catenin mRNA的表达及活性,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力,DAPI染色和流式细胞技术检测细胞凋亡情况.结果 TE85细胞内源性β-catenin表达相对较低(P＜0.05),Adβ-catenin能显著增加TE85细胞外源性β-catenin基因表达及活性,β-catenin组细胞迁移能力明显减慢(P＜0.05),β-catenin组侵袭能力明显低于对照组(P＜0.05).结论 β-catenin能抑制肿瘤细胞TE85的迁移及侵袭能力,对凋亡无影响.     

中国HIV-1 CRF01_AE流行株结构基因和调节/辅助基因DNA疫苗的构建和免疫原性研究

目的 构建表达gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-holf)-vif-nef融合基因的DNA疫苗,并评价其免疫原性.方法 按人源密码子使用频率对AE2f株的gag、env、tat、rev、integrase、vif和nef基因序列进行优化,构建真核表达质粒.用Western blot法验证体外表达情况;用ELISPOT法检测小鼠的细胞免疫反应.结果 限制性酶切及DNA测序结果表明两个融合基因质粒构建正确,可以表达相应的融合蛋白.ELISPOT结果显示,Gag-Env特异性的T细胞反应强度为(3010±566)SFC/10~6脾细胞;Tat-Rev-Integrase(C-half)-Vif-Nef融合蛋白特异性的T细胞反应为(948±737)SFC/10~6脾细胞,均显著高于空载体组.结论 构建的表达HIV-1 CRF01_AE流行株gag-env融合基因和tat-rev-integrase(c-half)-vif-nef融合基因的DNA疫苗可以正确表达所编码的融合蛋白并有效地激活机体的T细胞免疫反应.     

DLX1联合BMP9促进人骨肉瘤细胞向成骨分化

目的探讨DLX1联合BMP9可否影响人骨肉瘤细胞MG63的成骨分化。方法用构建有DLX1和BMP9基因的重组腺病毒Ad DLX1和Ad BMP9,单独或联合感染MG63细胞,分为DLX1组(Ad DLX1+AdRFP感染组)、DLX1+BMP9组(Ad DLX1+Ad BMP9感染组)、BMP9组(Ad BMP9+AdRFP感染组)、RFP组(AdRFP感染组)。用RT-PCR和Western blot验证DLX1和BMP9的表达情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和读数分析细胞早期成骨能力,茜素红染色检测细胞晚期成骨能力,Western blot检测骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平。结果 Ad DLX1和Ad BMP9感染MG63细胞后,DLX1和BMP9的表达水平上调(P0.05);与RFP组相比,DLX1组、DLX1+BMP9组和BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降(P0.05),DLX1+BMP9组细胞迁移能力和侵袭能力下降更为明显(P0.05);ALP活性、钙盐沉积和OPN蛋白表达在DLX1+BMP9组和BMP9组增加(P0.05),且DLX1+BMP9组较BMP9组显著增强(P0.05)。结论 DLX1与BMP9联合作用可抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭,同时可诱导骨肉瘤细胞向成骨分化。     

成人单纯疱疹病毒性脑炎易感基因及其免疫相关通路的概述

单纯疱疹病毒性脑炎常见于婴幼儿, 但成人亦可患病, 常表现为癫痫、精神状态异常, 以及局灶性神经系统异常, 如偏瘫、脑神经麻痹等症状, 且预后较差。单纯疱疹病毒1型脑炎最为常见, 轻症患者往往会有认知功能障碍等后遗症, 重症患者的死亡风险可达70%,甚至更高。本研究总结了成人单纯疱疹病毒性脑炎相关的突变基因, 依据其影响的免疫通路, 归纳导致突变基因易感的原因, 或将有助于系统地在免疫遗传学层面对病毒性脑炎进行鉴别诊断, 为临床提供新的诊断策略和治疗方案。     

山西省南部地区HIV/AIDS病死率及其影响因素分析

目的 探索HIV/AIDS病死率的影响因素和提高抗病毒治疗效果的方法。方法 采用回顾性队列研究方法,通过艾滋病综合防治信息系统,选择山西省南部4市截至2012年底的HIV/AIDS病例报告和抗病毒治疗信息,收集资料补充调查,计算病死率、治疗比例,采用Cox比例风险回归模型进行分析。结果 共收集HIV/AIDS确诊病例4 040例,平均年龄为(36.0±12.9)岁,男性占65.3%,已婚者占56.5%,文化程度初中及以下占73.5%,农民占58.4%,经性传播占54.3%(其中异性传播占40.1%、同性传播占14.2%)、经血传播占38.9%(其中采血浆占20.2%、输血/血制品占16.2%、注射毒品占2.4%)。接受抗病毒治疗比例由2004年的14.8%上升到2012年的63.4%,同期HIV/AIDS病死率从40.2/100人年降低到6.3/100人年。Cox回归分析显示:最主要死亡风险是未接受抗病毒治疗(RR=14.9,95%CI:12.7～17.4)。对1 938例接受抗病毒治疗病例进行Cox回归分析显示:治疗前BMI过低和肥胖病例的死亡风险高于正常和超重病例(RR=2.7,95%CI:1.6～4.5)、治疗前CD₄⁺T淋巴细胞≤50 cell/μl者的死亡风险高于>50 cell/μl者(RR=2.6,95%CI:1.5～4.5)。对2 102例未接受抗病毒治疗病例Cox回归分析显示:首次诊断为AIDS的死亡风险高于首次诊断为HIV病例(RR=3.4,95%CI:2.9～4.0)。结论 抗病毒治疗显著降低了HIV/AIDS的病死率,提示强化抗病毒治疗工作可进一步降低病死率。     

用伴时Cox回归模型进行艾滋病抗病毒治疗病例的生存分析

目的评估艾滋病成人抗病毒治疗(ART)效果,并分析影响治疗效果的主要因素。方法采用回顾性队列研究方法,选择山西省2004年6月至2012年12月纳入国家免费抗病毒治疗系统病例,收集资料补充调查,使用SPSS 19.0软件进行统计分析,采用t检验和χ2检验,伴时Cox回归模型进行生存分析。结果 1 887例抗病毒治疗病例中存活156例(83.1%)、死亡255例(13.5%)、停药26例(1.4%)、转诊23例(1.2%)、失访15例(0.8%);治疗后第0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0年累计生存率分别为0.91%、0.89%、0.88%、0.86%、0.85%、0.82%、0.80%、0.79%、0.79%;CD4+T细胞从ART前的143.5个/μL平均增加205.3个/μL,治疗前后<100个/μL的比例由41.4%下降至7.8%、>350个/μL的比例由0.9%上升至46.7%。病毒载量治疗前小于最低检测限占18.2%,治疗后提高到89.1%;应用Cox比例风险回归模型做多因素分析发现,ART前CD4+T细胞计数、ART时年龄、ART前体质量指数3个变量的分组与生存时间差异分别有统计学意义。死亡危险比(HR)分别为4.05、3.68、3.44;对ART后CD4+T细胞计数、ART前后CD4+T细胞计数之差、ART后病毒载量编写程序生成3个伴时协变量,连同治疗前有统计学意义和专业意义的15个变量在内的18个变量进行多因素伴时Cox回归模型分析,最后仅有ART后CD4+T细胞计数与生存时间差异有统计学意义,HR为30.28。结论抗病毒治疗取得了较好的治疗效果,生存时间与ART后CD4+T细胞计数相关。     

HIV-1感染者全基因多肽特异性T细胞免疫应答的初步研究

目的 探讨HIV-1感染者人群分泌γ干扰素(IFN-γ)的HIV-1特异性T细胞反应的特征.方法 对HIV-1感染者进行6个月和12个月随访,采用ELISPOT试验检测HIV-1特异性T细胞反应,采用流式细胞术计数CD4+ T细胞.结果 6个月随访,CD4+T细胞计数与病毒载量呈负相关,具有统计学意义;分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应最强的是Nef肽库;高强度特异性T细胞反应频度最高的是Nef(72%)肽库.12个月随访,CD4T细胞计数与病毒载量呈负相关,具有统计学意义;分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应最强的是Nef肽库;高强度特异性T细胞反应频度最高的是Nef(74.1%)肽库.结论 HIV-1 B亚型的所有蛋白均可以诱导产生分泌IFN-γ的HIV-1特异性T细胞反应.6个月和12个月两次随访的研究结果均表明,针对Nef、Gag表位的HIV-1特异性T细胞反应最强、频度最高.     

不同感染时间与感染途径的HIV-1感染者全基因组CTL免疫反应比较研究

目的 分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV/AIDS感染者覆盖全基因组的CTL应答特征.方法 将75例HIV/AIDS感染者分为3组,血液感染1～2年组(10例)、血液感染＞10年组(43例)和性接触感染1～2年组(22例);以HIV-1 B亚型构建全基因组17个肽库作为抗原,采用ELISpot检测各组HIV特异性CTL应答;采用流式细胞术检测各组CD4计数;采用实时定量RT-PCR检测各组HIV病毒载量.结果 血液感染1～2年组、血液感染＞10年组和性接触感染1～2年组感染者对HIV-B亚型17个肽库的平均应答频率分别为40%、65%、23%,经单向方差分析,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答频率差异有统计学意义(F=19.96,P＜0.01);3组感染者对HIV-B亚型17个肽库总应答强度范围分别为0～5 835 SFCs/106 PBMC、0～7 225 SFCs/106PBMC、0～9 740 SFCs/106PBMC,且3组感染者对HIV-B亚型17个肽库的应答强度差异亦有统计学意义(H=101.90,P＜0.01);此外,3组感染者对HIV-1 B亚型17个肽库的应答广度分别为7(2～11)个、11(9～14)个、4(2～6)个,3组感染者应答广度的差异也有统计学意义(H=34.75,P＜0.01).3组感染者应答频率、应答强度和应答广度从高到低依次为血液感染＞10年组、血液感染1～2年组、性接触感染1～2年组.不同感染时间和不同感染途径的感染者对Nef肽库和Gag肽库的应答百分比和应答强度均高于其他肽库.CD4计数＜200/μl、CD4计数为200～500/μl和≥500/μl3组感染者对17个肽库的总应答强度范围分别为0～18 475 SFCs/106 PBMC、350～34 095 SFCs/106PBMC、490～21 550 SFCs/106 PBMC,但差异无统计学意义(H=2.93,P=0.23);3组感染者CTL应答广度分别为3(0～8)个、10(2～17)个、10(1～17)个,3组间差异有统计学意义(H=14.72,P＜0.01),CD4计数＜200/μl的感染者CTL应答广度低于CD4计数为200～500/μl和≥500/μl组.不同病毒载量3组(＜LDL、LDL-1×104拷贝/ml和≥1×104拷贝/ml)标本对17个肽库的总应答强度范围分别为490～18 475 SFCs/106PBMC、0～24 115 SFCs/106PBMC、770～34 095 SFCs/106 PBMC,但3组间差异无统计学意义(H=0.79,P=0.67);应答广度分别为8(1～17)个、11(0～17)个、8(1～16)个,3组间差异也无统计学意义(H=5.27,P=0.07).结论 中国HIV/AIDS感染者中CTL应答多集中在Nef和Gag,这两个抗原为HIV/AIDS感染的优势抗原;感染时间和感染途径对CTL应答可产生显著影响;随感染时间的延长,免疫反应的强度与应答比例均增加.这些信息对设计针对中国人群的AIDS疫苗有较重要意义.

Abstract：

Objective To investigate and compare the features of the HIV-1-specific CTL responses among three HIV-infected groups with varied infection history. Methods Three HIV-infeeted groups were enrolled in this study, including two groups infected by blood transmission (one group has been infected for more than 10 years and the other for 1-2 years) and one group of the man who have sex with man. The HIV-1-specific CTL responses were quantified by an IFN-γ based ELISPot assay with a peptide matrix system containing overlapping peptides spanning the entire HIV-1 Clade B genomic consensus sequences. Results The responding rate of CTL responses against all 17 peptide pools among the group that infected 1-2 years,the group infected more than 10 years and the group of MSM were 40% ,65% ,23%. One way ANOVO analysis showed that the responding rate of CTL responses against all 17 peptide pools were statistical significant among the three groups (F=19.96, P＜0.01);the magnitude of CTL responses of the three groups were 0-5 835 SFCs/106 PBMC, 0-7 225 SFCs/106PBMC, 0-9 740SFCs/106pBMC, Kruskal-Wallis test showed that the magnitude of CTL responses were statistical significant among the three groups( H = 101.90 , P ＜0.01);the breadth of CTL were 7 ( 2-11 ), 11(9-14) and 4 (2-6) respectively and Kruskal- Wallis test showed that the breadth of CTL had no statistical significant among the three groups( H = 34. 75 ,P ＜0. 01 ). The sequence of responding rate, magnitude and breadth of CTL from high to low was the group that had been infected for more than 10 years, the group infected 1-2 years and the sex transmission group. The common characteristics of the CTL response among the three groups were that the responding rate and the magnitude of the peptide Nef and Gag was higher than other peptide's. The magnitude of CTL responses among three different CD4count groups (CD4 ＜ 200/μl, CD4 200-500/μl, CD4 ≥500/μl,) was 0-18 475 SFCs/106pBMC, 350-34 095 SFCs/106pBMC, 490-21 550 SFCs/106 PBMC and had no statistic difference among the three different CD4 groups(H=2.93, P=0.23) while the breadth of CTL was 3(0-8), 10(2-17), 10 (1-17)respoctively and the breadth of CTL was lower in the group of CD4 count less than 200/μl than the other two groups( H = 14. 72, P ＜ 0. 01 ). The magnitude of CTL responses among three different viral load (VL)groups (VL＜ LDL, LDL ＜ VL ＜ 1 × 104 copys/ml, VL≥1 ×104 copys/ml) was 490-18 475 SFCs/106pBMC, 0-24 115 SFCs/106pBMC, 770-34 095 SFCs/106 pBMC and had no statistic difference among the three different viral load groups ( H = 0.79, P=0.67) and the breadth of the three different viral load groups CTL was 8( 1-17), 11 (0-17), 8 (1-16) and Kruskal-Wallis test showed that there was no statistic difference among the three different viral load groups (H =5.27, P =0. 07). Conclusions All groups predominantly develope T cell immune responses against Nef and Gag proteins. With the elapse of HIV infection, the CTL responses are increased in both magnitude and responding rate. This information is important for vaccine development.     

Id1基因对人骨肉瘤细胞恶性逆转向成骨分化的影响

目的 探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation factor 1,Id1)对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响.方法 用重组腺病毒调控MG63细胞中Id1过表达后,RT-PCR及Western blot检测验证Id1的表达情况,CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,ALP读数法检测成骨分化早期指标ALP的活力.结果 AdId1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量增高,AdsiId1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量降低(P＜0.05);Id1过表达后,MG63细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力等恶性生物学行为均增强,G1期细胞比例降低,Id1表达量下调后则逆转MG63细胞的恶性生物学行为,G1期细胞比例增高(P ＜0.05);Id1表达量下调后,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高(P＜0.05).结论 抑制Id1基因表达可以促使骨肉瘤的恶性生物学行为逆转并诱导骨肉瘤细胞发生成骨分化.     

淋巴细胞膜分子CD160结构与功能的研究进展

T细胞活化需要两个信号:一是T细胞抗原受体(TCR)与抗原肽-MHC Ⅰ/Ⅱ类分子复合物相互作用的第一信号,决定了T细胞应答的特异性;二是T细胞表面辅助受体与抗原提呈细胞(APC)的共刺激分子相互作用传递的辅助或协同信号,加强或抑制了第一信号的刺激[1.2].