基于一次成像测量FRET系统校正因子的智能型QuanTi-FRET方法

QuanTi-FRET是一种通过对多种荧光共振能量转移(FRET)标准质粒样本进行多次FRET成像来测量FRET成像系统敏化淬灭转化因子(G)和供受体通道激发效率校正因子(β)的方法。本课题组发展了一种基于一次成像测量系统校正因子G和β的智能型QuanTi-FRET方法——AutoQT-FRET方法。AutoQT-FRET方法包括如下4个步骤：1)将分别转染了不同FRET标准串联质粒(C5V、C17V、C32V和CTV)的细胞合并到一个细胞培养皿中培养,对该皿细胞样本进行三通道FRET成像;2)对三通道图像进行区域划分,并根据不同种类的FRET标准质粒对各区域进行归类;3)对归类成功的区域逐像素绘制三维空间散点图,以确定各个FRET标准质粒的标准线;4)使用确定好的各质粒标准线对整个视野内的细胞区域进行质粒分类与系统校正因子G和β的测量。该方法大幅简化了系统校正因子的测量过程,缩短了测量时间。本文比较了AutoQT-FRET方法与其他方法测量系统校正因子的优劣,实验结果表明：AutoQT-FRET方法操作简单,而且测量稳定性与准确度都有所提高。